340例双耳重度极重度非综合征型聋患儿常见耳聋基因筛查结果分析

刘海燕 陈亚秋 黄永望 丁怡冰 王洪月 刘爽 肖彩霞

先天性听力障碍是常见的出生缺陷之一，据文献报道，60%～70%的听力障碍与遗传因素有关，而基因突变是导致遗传性聋的重要原因[1～3]。研究表明，耳聋致病基因突变具有较高的异质性，非综合征型聋主要由少数几个热点基因的突变引起，这使得基因筛查得到极大关注[4,5]。中国人群的热点耳聋基因包括GJB2、SLC26A4、GJB3、线粒体DNA12SrRNA等。因此，本研究拟通过对340例双耳重度极重度非综合症型聋患儿4个常见耳聋基因20个位点进行筛查，探讨双耳重度极重度听力损失的病因，为患儿及其家庭成员遗传咨询和指导、防聋治聋提供参考。

1 资料与方法

1.1研究对象 选择2013年～2020年12月经天津市妇女儿童保健中心诊断为双耳重度极重度感音神经性聋患儿340例作为研究对象，回顾性分析病史资料，包括患儿的一般信息、耳聋发病年龄、感冒发烧史、耳毒性药物使用史、头部外伤史、家族史、母孕期疾病史，体格检查及影像学资料，排除耵聍栓塞、外耳道闭锁、中耳炎及综合征型聋患儿。340例患儿中，男188例，女152例，年龄6个月～6岁，平均1.24±0.98岁。

1.2听力诊断方法 听力诊断检查包括中耳功能检查、听性脑干反应(ABR)、听性稳态反应(ASSR)和诊断型耳声发射测试。中耳功能检查时，1岁以下患儿采用1 000 Hz和226 Hz探测音、1岁以上患儿采用226 Hz探测音声导抗测试。ABR检查带通滤波0.1～3 kHz，33.1 Hz重复短声刺激，叠加2 000次，以波V反应阈为参考指标，听力损失分级如下：轻度31～50 dB nHL、中度51～70 dB nHL、重度71～90 dB nHL、极重度≥91 dB nHL。受检患儿采用10%的水合氯醛0.5 ml/kg镇静，用药前患儿监护人均在自愿情况下签署知情同意书。

1.3耳聋基因筛查方法 于滤纸片上采集患儿末梢循环血，自然风干后送至华大基因检测实验室，采用基质辅助激光解析离子飞行质谱技术，检测4个常见耳聋基因20个位点，分别为：GJB2(35delG、167delT、176-191del16、235delC、299-300delAT)、GJB3(538C>T、547G>A)、SLC26A4(218C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)及线粒体DNA12SrRNA(1555A>G和1494C>T)。

2 结果

340例双耳重度极重度听力损失患儿共检出基因突变134例(39.41%，134/340)，明确诊断为遗传性聋91例，占受检总人数的26.76%(91/340)，占基因突变阳性患儿的67.91%(91/134)，其中纯合突变49例，复合杂合突变42例；杂合突变43例，占受检总人数的12.65%(43/340)，占基因突变阳性患儿的32.09%(43/134)。2例聋儿基因突变检查结果正常，但颞骨CT显示前庭水管扩大。

134例基因突变患儿中，GJB2基因突变68例，占受检者总数的20.00%(68/340)，占基因突变总例数的50.74%(68/134)，其中纯合突变32例(9.41%，32/340)，c.235delC纯合突变29例，占基因突变患儿的21.64%(29/134)，299_300delAT纯合突变3例，占基因突变阳性患儿的2.24%(3/134)；复合杂合突变18例(5.29%，18/340)，杂合突变18例(5.29%，18/340)(表1)。SLC26A4基因突变62例，占受检者总数的18.24%(62/340)，占基因突变总例数的46.27%(62/134)，其中IVS7-2A>G纯合突变17例(5.00%，17/340)，占基因突变阳性患儿的12.69%(17/134)，复合杂合突变24例，杂合突变21例(表1)。

表1 340例患儿检出基因突变位点不同突变形式例数分布(例)

双基因杂合突变4例(4/340，1.18%)，其中c.235delC/c.IVS7-2A>G 杂合突变2例，c.235delC/c.2168A>G杂合突变2例。未检测出GJB3基因和线粒体DNA12SrRNA基因突变。

3 讨论

本研究双耳重度极重度聋患儿中GJB2基因突变检出率最高，主要突变位点为235delC、299-300delAT；其次是SLC26A4基因，主要突变位点为IVS7-2A>G，这与戴朴等[6]对中国不同地区和种族重度感音神经性聋群体热点突变的研究结果一致。

GJB2是常见的耳聋致病基因，主要遗传方式为常染色体隐性遗传，既往研究表明，GJB2基因突变导致的听力损失特点主要为双耳先天性非进行性重度或极重度聋，少部分表现为后天性聋。本组对象中GJB2基因突变占基因突变总数的50.74%(68/134)，与王国建等[7]不同听力学表型人群中常见耳聋基因突变检出率的结果一致。本研究中，GJB2杂合突变18例，为明确病因，下一步需要做GJB2基因测序；基因筛查及测序不仅可以早期发现先天性耳聋，还可能发现基因突变导致的迟发性听力损失，通过定期复查随访追踪，有利于耳聋的早发现早干预。

SLC26A4基因也是常见的致聋基因，其检出率仅次于GJB2，是导致前庭水管扩大(enlarged vestibular aqueduct，EVA)的主要基因[8]。王秋菊等[9]对我国107例前庭水管扩大耳聋家系研究发现，高达97.9%的患者至少携带一个SLC26A4 突变，88.4%的患者是双等位基因突变，其研究中共检出 40 种突变，其中 c.919-2A>G突变是中国人群中最常见的突变方式，占突变总数的57.63%。SLC26A4基因突变的遗传方式主要为常染色体隐性遗传，其导致的听力损失特点多表现为双耳先天性重度、极重度感音神经性聋，随着年龄增长听力逐渐下降，最终全聋；堕床、轻微头部外伤、感冒、噪声等可诱发并加重耳聋[10]。IVS7-2A>G为中国人的热点突变位点，燕志强等[11]研究发现SLC26A4基因突变的感音神经性聋患者中，IVS7-2A>G突变检出率62.3%；本组对象中IVS7-2A>G纯合突变17例、复合杂合突变24例。柴福等[12]通过芯片捕获高通量测序发现了SLC26A4基因新的致病突变基因位点c.1545-1546insC。本研究中SLC26A4基因杂合突变21例，为更进一步明确病因，需要进一步行SLC26A4基因测序。2例聋儿基因突变检查结果正常，但颞骨CT显示前庭水管扩大，可能存在本研究未检测到的基因突变,需要进一步行SLC26A4基因测序。

GJB3基因主要导致后天高频听力损失，线粒体DNA12SrRNA主要导致药物性聋，携带此基因突变者对氨基糖苷类抗生素高度敏感，本研究中未检测到GJB3基因、线粒体DNA12SrRNA的热点突变。

综上所述，本组双耳重度极重度感音神经性聋患儿以GJB2、SLC26A4基因突变检出率较高，值得一提的是，43例患儿检测出GJB2或SLC26A4单基因杂合突变，下一步需要行GJB2或SLC26A4单基因测序；另有部分患儿未检测到基因突变位点，为明确病因，需行高通量测序。近几年基因测序对于发现新的致病突变以及明确病因方面发挥的作用越来越重要，早期明确耳聋患儿的病因，可以为患儿及其家庭成员提供遗传咨询和指导，为防聋治聋提供帮助。