扬州地区167例非综合征型聋患者耳聋相关基因突变分析

王莹 关兵 常玲美 徐丽 张俊中

耳聋是临床上最常见的遗传性疾病之一，在各种导致耳聋的病因中，遗传因素占60%[1]。目前已知的耳聋基因有200多种[2],但绝大多数遗传性聋只与几个耳聋基因突变有关，我国遗传性聋主要与GJB2、SLC26A4、GJB3和mtDNA12SrRNA基因突变有关[3]。本研究对扬州地区167例非综合征型聋患者进行上述最常见的4个耳聋基因的20个位点进行检测，以期明确病因，为其康复治疗及遗传咨询提供指导。

1 资料与方法

1.1研究对象 研究对象为2014年2月～2020年4月经扬州大学苏北人民医院耳鼻喉科确诊为非综合征型聋的167例患者，男87例，女80例，2岁～50岁，平均20±4.5岁，所有患者均为重度及极重度感音神经性聋，不伴身体其他部位畸形。患者均来自扬州市或扬州市周边地区，均为汉族；语前聋132例，语后聋35例，其中大前庭水管综合征8例；有耳聋家族史者48例，有头部外伤史3例；耳毒性药物应用史1例；无早产、出生时缺氧窒息患者。排除标准：①合并有眼、肾、骨、皮肤等部位病变的综合征型聋患者；②传导性聋患者、外耳及中耳畸形的患者；③伴有全身性疾病者、智力障碍者、既往有脑炎、脑膜炎、腮腺炎等明确非遗传因素致聋患者；④患者或家属不同意参加此研究者。

1.2研究方法

1.2.1病史采集 采用一对一问卷调查形式，由患者或其监护人填写，内容如下：①一般情况:就诊时间、姓名、性别、年龄、出生年月、民族、籍贯、居住地址和电话等;②耳聋的发病时间、发病原因或诱因、耳聋之前是否会说话、耳聋病情发展情况及伴随症状等;③个人史:环境噪声史、耳毒性药物应用史和头部外伤史等。本研究获得扬州大学附属苏北人民医院道德伦理委员会批准，对所有研究对象的临床信息录取和血样采集，均获得了患者本人或其监护人的同意，并签署了知情同意书。

1.2.2遗传性聋基因芯片检测方法 采集患者静脉血3 ml，涂于耳聋基因检测卡片上，送往天津华大基因科技有限公司科学研究所，对最常见的4个耳聋基因的20个位点进行检测，包括：GJB2基因(35delG、176_191del16、235delC、299_300delAT)、GJB3基因(538C>T、547G>A)、SLC26A4(PDS)基因(281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)、mtDNA12SrRNA基因(1555A>G、1494C>T、1095T>C)。

2 结果

167例非综合征型聋患者中检出常见致聋基因突变者63例，总突变率为37.72%(63/167)，其中，检测出GJB2突变者47例，SLC26A4 突变者15例(8.98%，15/167)，mtDNA12SrRNA c.1555A>G突变1例(0.60%,1/167)；未检出GJB3基因突变者(表1)。本组患者中SLC26A4基因IVS7-2A>G 纯合突变、IVS7-2A>G及2168A>G 复合杂合突变、IVS7-2A>G及2162C>T复合杂合突变者经颞骨CT检查均确诊为大前庭水管综合征，mtDNA12SrRNA c.1555A>G突变患者有耳毒性药物应用史，其外婆亦有耳聋病史。

表1 63例基因突变者基因突变位点、检出人数及检出率

3 讨论

耳聋基因具有较高的遗传异质性，不同地区不同人群其耳聋基因的突变频率、突变方式和突变热点均有差异。国内外大量研究表明，大多数重度以上非综合征型聋主要由为数不多的几个耳聋基因突变所致，主要为GJB2、SLC26A4、GJB3和mtDNA12SrRNA四个基因。

戴朴等[4]研究显示，在遗传性感音神经性聋患者中，42.41%能够检测出相关耳聋基因突变。胡煜等[5]对上述4个基因9个位点进行检测，结果显示致聋基因突变率为26.80%(48/179)，遗传性聋基因突变携带者达17.32%(31/179)。孙捷等[6]对新疆地区的遗传性聋患者进行4个基因9个位点的检测，耳聋相关基因突变者占51.16%。本研究167例非综合征型聋患者中未检出GJB3基因突变，其余3个基因总突变率为37.72%(63/167)。由此可见耳聋基因存在明显的地区差异性、遗传异质性，检测位点的多少对耳聋基因突变检出率高低也有明显影响。

GJB2基因的突变方式很多，有移码突变、无义突变、错义突变及剪接位点突变等，该基因突变的患者多表现为常染色体隐性遗传。GJB2基因突变是非综合征型聋最常见的基因突变，不同地区不同种族的耳聋患者GJB2突变频率和热点不同。在中国人群中，GJB2基因常见突变类型有235delC、299_300delAT、176_191del16等，占该基因突变人群的80%以上[7,8]；在本组对象中，GJB2基因突变占所有患者的28.14%(47/167)，与戴朴等[8]文献报道的GJB2基因突变在国内不同地区非综合征型聋人群的携带率4%～30.4%相一致。本研究中仅检测了GJB2的4个位点，突变携带率为28.14%，占所有检出耳聋基因突变的74.60%(47/63)，与Smith等[9]报道的GJB2基因突变是常染色体隐性遗传性聋的一半以上责任基因相一致；其中235delC突变检出率最高(17.96%)，299delAT次之(10.18%)，176del16再次之(4.5%)。GJB2基因突变所致的耳聋多为重度听力损失，且发病年龄段主要集中在婴幼儿时期[10]。本组耳聋患者中，存在GJB2基因235delC纯合突变者占4.79%(8/167)，GJB2基因299delAT纯合突变者占1.80%(3/167)；GJB2纯合突变者可确定耳聋原因为GJB2基因突变所致。另外，GJB2基因235delC杂合突变占13.17%(22/167)，其中4例为235delC/176del16复合杂合突变，4例为235delC/299delAT复合杂合突变，235delC、299delAT和176del16均有隐性致聋效应，可认为235delC/299delAT及235delC/176del16复合杂合突变的协同作用是导致患者耳聋的主要原因。有文献认为多数的235delC杂合突变(约70%～90%)可以经DNA测序检测到另一个病理性突变位点[11]，本研究有14例235delC杂合突变、4例176del16杂合突变及10例299delAT杂合突变未能检测到另一个病理性突变位点，可能与本研究仅检测了GJB2的4个热点突变而非全组基因位点有关。

目前为止，SLC26A4基因突变被认为是仅次于GJB2基因突变引起遗传性感音神经性聋的遗传学病因。SLC26A4基因所编码的Pendrin蛋白主要负责氯离子的转运，氯离子转运障碍最终可引起前庭水管或耳蜗结构异常而导致疾病[12]。SLC26A4基因与大前庭水管综合征(large vestibular aqueduct syndrome, LVAS)及Pendred综合征(pendrend syndrome, PS)密切相关。SLC26A4最常见的突变位点有IVS7-2A>G、2168A>G、1226C>T等，本组对象检出IVS7-2A>G位点突变者占8.98%(15/167)，与国内其他研究[13]结果接近。本组患者中SLC26A4基因IVS7-2A>G 纯合突变、IVS7-2A>G及2168A>G 复合杂合突变、IVS7-2A>G及2162C>T复合杂合突变者经颞骨CT检查均为大前庭水管综合征(EVAS)，提示若发现该基因突变的患者，可通过指导其生活习惯及避免感冒、撞击头部等防止和延缓听力下降的发生。李俎怡等[14]认为GJB2基因和SLC26A4基因的单杂合突变并不会致病，只能说明患者携带此突变基因，而这两个基因的纯合突变和复合杂合突变则被认为具有致病性。

氨基糖苷类药物中毒引起的耳聋分为两种：一种是药物剂量过大引起的耳聋，为非遗传性聋；另一种是线粒体基因突变引起的耳聋，为遗传性聋。mtDNA12SrRNA c.1555A>G、c.1494C>T为两个常见突变位点，戴朴等[15]报道的13个母系遗传聋家系患者中33个患者携带有mtDNA12SrRNA基因1555位点的A-G均质突变;Zhao等[16]在一个母系遗传非综合征型聋大家系中，在mtDNA12SrRNA 1494位点发现了一个C-T的同质转换。本研究中发现mtDNA12SrRNA基因1555A>G突变者1例，该患者有耳毒性药物应用史，患者外婆亦有耳聋病史，遂建议该患者母亲及母亲的姐妹进一步进行耳聋基因检测，并告知患者及该家系相关基因携带者应避免使用耳毒性药物，防止耳聋的发生。GJB3基因突变在中国耳聋患者中携带率较低[17]，本组患者中未检出GJB3基因突变。

本组对象GJB2基因突变检出率28.14%(47/167)，SCL26A4基因突变检出率8.98%(15/167)，mtDNA12SrRNA基因突变检出率0.60%(1/167);可见对于部分发达地区可将此4个基因20个位点的基因检测技术纳为非综合征型聋患者的病因检测方法，以利明确其病因，指导婚育及用药，亦可通过产前诊断指导耳聋患者家庭的生育，避免和尽量减少聋儿的出生。