盘龙七药材的质量评价 *

郭琳 徐悦 李玉泽 张东东 黄文丽 邓翀 张丽 宋小妹,3 宋蓓

(1.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳 712000；2.陕西中医药大学药学院，陕西 咸阳 712046；3.陕西省中药基础与新药研究重点实验室，陕西 咸阳 712046；4.陕西中医药大学附属医院，陕西 咸阳 712000)

盘龙七，“太白七药”之一，别名石白菜、地白菜等，其基原为虎耳草科岩白菜属(Bergenia)植物秦岭岩白菜BergeniascopulosaT.P.Wang的干燥根茎，在国内主产于陕西、甘肃、四川等地，在陕西境内主要产于眉县、翠华山以及秦岭山区[1-3]，一般生长在海拔2500～3600 m的湿润的峭壁悬崖缝隙中，为我国特有种[4-6]。盘龙七味涩、微苦，性平，具有滋补强壮、止血、祛痰止咳、补益脾胃、收涩固肠、利水活血、活血化瘀、祛风除湿、消肿止痛等功效，临床上用于治疗急慢性肠胃炎、咳嗽、吐血、便血、肠炎、浮肿、崩漏、白带等症[7]。近年来有很多学者对盘龙七的化学成分进行研究，根据文献报道含有黄酮类、多酚类、香豆素类、蒽醌类、甾体及有机酸类等[7-11]。岩白菜素作为盘龙七的主要药效成分，口服无毒，具有良好的止咳、祛痰、抗菌、抗心律失常、抗氧化和提高免疫力等作用，在临床上广泛应用于慢性支气管炎、慢性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等疾病的治疗[12-17]。另外，盘龙七多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗凝血等作用，且对机体毒副作用小[18-20]。近年来的临床实验表明，在治疗风湿性关节炎、慢性气管炎方面，盘龙七具有一定的疗效，还能增强免疫功能[21]。本文从原植物形态、性状特征、显微特征等方面对盘龙七进行研究，建立了其薄层色谱鉴别方法及HPLC含量测定方法，为补充及完善盘龙七药材质量标准提供了重要依据。

1 材料

显微镜DMBH200(宁波舜宇仪器有限公司)；微型计算机(型号：启天M430E；批号：P560A2717044；北京联想有限公司)；Waters e2695型高效液相色谱仪(包括自动进样器，四元泵，柱温箱，2998PDA检测器)；微型计算机(型号：启天M4500-M00)；101-A4型电热鼓风干燥箱(上海捷呈实验仪器有限公司)；GB204电子天平(瑞士梅特勒托利多)；舒美KQ-500DE型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限责任公司)；KEWE电热恒温水浴锅(北京科伟永兴有限公司)；DYF-200A型高速万能粉碎机(上海比朗仪器有限公司)。

岩白菜素(批号：HA06214198)、儿茶素(批号：HC019123198)，芦丁(批号：100080-200306)以上对照品均购自中国食品药品检定研究院，纯度均大于98%，没食子酸(实验室自制，经高相液相色谱按面积归一化法测定其纯度均大于98%)；甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)，水为娃哈哈纯净水。

盘龙七15批药材中14个均采自陕西，只有一个批次采自甘肃。经陕西中医药大学王继涛高级实验师鉴定为虎耳草科岩白菜属(Bergenia)植物秦岭岩白菜BergeniascopulosaT.P.Wang的干燥根茎。

2 方法与结果

2.1植物形态 秦岭岩白菜为多年生草本，高5～50 cm。全株平滑无毛。根茎粗壮，延伸，直径2.5～4 cm，沿石壁缝隙匍生，半暴露；密被栗黑色鳞片和叶柄鞘的残余。叶基生，叶柄长1.5～13 cm，托叶鞘无毛；叶片近肉质，有光泽，圆形或宽卵状圆形，长5～25 cm，宽3～22 cm，先端钝圆，基部近圆形或略作楔形，边缘具锯齿或不明显齿，有时近全缘，两面具腺窝；叶脉明显。花茎长10～20 cm，光滑，中部以上具1披针形苞叶；圆锥状聚伞花序顶生，具多数花，分枝，几先叶开放；花萼钟状，5深裂，紫红色，多脉，花瓣5，有深紫色脉纹，先端钝，基部有爪；雄蕊10，子房卵球形，无毛，基部2室，花柱2，柱头大，盾状。蒴果2瓣裂。花期4～5月，果期7～8月。(图1)

图1 盘龙七原植物——秦岭岩白菜

2.2药材性状 根茎近圆柱形，略弯曲，一端稍细，直径0.6～4 cm。表面灰棕色至黑褐色，具密集或疏而隆起的环节，密被褐色鳞片及残存叶鞘，并可见棕红色细根痕。质坚硬，难折断，断面棕红色，略显粉性，近边缘处有一圈维管束环列。气微，味微苦。(图2)

图2 盘龙七药材图

2.3显微鉴别 本品粉末为浅褐色、棕红色或浅棕色。淀粉粒众多，均为单粒，类圆形、类椭圆形或梨形，脐点和层纹不明显；含众多草酸钙簇晶和少许草酸钙柱晶；导管微木化，多为网纹导管、螺纹导管和梯纹导管，有较少环纹导管和孔纹导管；木栓细胞表面观多边形，薄壁细胞类椭圆形；含有少量纤维束和较多棕色块。(图3)

2.4薄层鉴别 精密称取盘龙七粉末约1.0 g，加甲醇25 mL，超声提取45 min(功率250 W，频率60 kHz)，滤过，残渣加适量甲醇冲洗，滤液定容至25 mL，作为供试品。另取岩白菜素、儿茶素、没食子酸加甲醇制成1.5 mg·mL-1溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液6 μL，对照品溶液岩白菜素、儿茶素、没食子酸分别为6 μL、2 μL、2 μL点于同一薄层层析硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(6.5∶3.5∶0.9∶0.1)下层液作为展开剂展开，取出，晾干，碘熏，置于日光下观察。可见供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。结果如图所示(图4)。

1.儿茶素(catechin)；2.岩白菜素(pbergenin)；3-14样品(sample)：3.陕西太白山(Mountain Taibai of Shaanxi)；4.陕西红河谷(Red River of Shaanxi)；5.陕西太白山(Mountain Taibai of Shaanxi)；6.陕西眉县(Mei County of Shaanxi)；7.甘肃陇南(Longnan city of Gansu)；8.陕西汉中(Hanzhong County of Shaanxi)；9.陕西红河谷(Red River of Shaanxi)；10.陕西眉县((Mei County of Shaanxi)；11.陕西红河谷(Red River of Shaanxi)；12.陕西红河谷(Red River of Shaanxi)；13.陕西太白山(Mountain Taibai of Shaanxi)；14.陕西红河谷(Red River of Shaanxi)；15.没食子酸(gallic acid)

2.5含量测定

2.5.1色谱条件 色谱柱为Thermo HyPURITY C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温为30 ℃；检测波长为275 nm；流速为1 mL·min-1；进样量：10 μL；流动相：乙腈(A)-水溶液(B)，梯度洗脱(0～12 min，5%A～11%A；12～15 min，11%A～15%A；15～20 min，15%A～16%A；20～25 min，16%A～16%A；25～28 min，16%A～19%A；28～34 min，19%A～19%A；34～45 min，19%A～20%A)。

2.5.2对照品溶液制备 分别精密称取岩白菜素、儿茶素、芦丁的对照品适量，加甲醇分别制成0.325 mg·mL-1、0.275 mg·mL-1、0.275 mg·mL-1的溶液，即得对照品溶液。

2.5.3供试品溶液制备 精密称取盘龙七粉末约0.5 g，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入20 mL，称重，超声处理(功率250 W，频率60 kHz)45 min，放冷，称重，用甲醇补足重量，用0.22 μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液，即得。

2.5.4专属性试验 精密吸取“2.5.2”、“2.5.3”项下对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，结果见图5。分离度大于1.5，说明基线分离良好。

图5 对照品(A:岩白菜素、B：儿茶素、C：芦丁)及样品(D：盘龙七)的HPLC色谱图

2.5.5线性关系考察 取“2.5.2”项下对照品溶液适量，用甲醇溶液依次稀释，分别进样10 μL，按“2.5.1”项下色谱条件测定岩白菜素、儿茶素、芦丁的峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标，以对照品质量(X，μg)为横坐标，得回归方程和线性范围，同时以仪器的信噪比S/N为3时测定检出下限(LOD)，S/N为10时测定定量下限(LOQ),结果见表1。

表1 线性关系

2.5.6精密度试验 取同一供试品溶液，照“2.5.1”项下色谱条件，重复进样6次，测定岩白菜素、儿茶素、芦丁峰面积的RSD分别为1.84%、1.65%、1.04%，结果表明本法精密度良好。

2.5.7稳定性试验 取同一供试品溶液于0、2、4、8、12、18、24 h内重复进样6次，照“2.5.1”项下色谱条件测定岩白菜素、儿茶素峰、芦丁峰面积的RSD分别为1.12%、1.08%、1.47%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.5.8重复性试验 取同一批号样品，平行称取6份，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，照“2.5.1”项下色谱条件测定岩白菜素、儿茶素、芦丁峰面积的RSD分别为1.87%、1.49%、1.82%，结果表明本法具有较好的重复性。

2.5.9加样回收试验 精密称取已知含量的样品粉末约0.25 g，共6份，精密加入对照品溶液，按供试品溶液制备方法操作。在上述色谱条件下进行测定，计算平均回收率。结果岩白菜素、儿茶素、芦丁的平均回收率及RSD分别为99.74%(0.42%)、99.21%(1.15%)、99.33%(1.01%)。

2.5.10样品含量测定 取15个不同产地的盘龙七样品，按“2.5.3”项下方法制备样品溶液，按“2.5.1”项下色谱条件进行测定，结果见表2。

表2 样品含量测定(mg·g-1，n=3)

3 讨论

盘龙七始载于《陕西中草药》，在《秦岭巴山天然药物志》《华山药物志》《中药大辞典》等均有记载。本文从植物形态及药材性状，结合多次在陕西、甘肃等地进行产地调查，“盘龙七”为虎耳草科岩白菜属植物秦岭岩白菜BergeniascopulosaT.P.Wang的干燥根茎，古今所用品种一致。

3.1薄层色谱展开剂的选择 在进行盘龙七中岩白菜素、儿茶素、没食子酸的鉴别时，分别考察了三氯甲烷-甲醇-水、三氯甲烷-甲醇-甲酸、三氯甲烷-甲醇-丙酮-水等不同展开系统，经过反复实验，最终选用三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(6.5∶3.5∶0.9∶0.1)下层溶液作为展开剂，碘熏后，具有分离度好、斑点清晰等特点，可用于盘龙七药材的鉴定。

3.2含量测定检测条件的选择 通过考察不同比例甲醇-水、乙腈-水对盘龙七化学成分的分离效果，结果显示使用乙腈-水溶剂的分离效果比较理想；另外，通过全波长扫描和对不同温度和流速的考察，最终确定检测条件：检测波长为275 nm；流速为1 mL·min-1；乙腈(A)-水溶液(B)为流动相，梯度洗脱(0～12 min，5%A～11%A；12～15 min，11%A～15%A；15～20 min，15%A～16%A；20～25 min，16%A～16%A；25～28 min，16%A～19%A；28～34 min，19%A～19%A；34～45 min，19%A～20%A)。

3.3含量测定结果分析 结合图5及表2可以看出，岩白菜素含量在盘龙七中最高，儿茶素和芦丁的含量相差不大，15批盘龙七中3个成分的含量整体上符合上述规律，但不少样品中个别成分(指含量相近的成分)的含量并不完全遵循上述规律。另外，我们可以看出各地岩白菜素的含量差异较大，含量最高的样品和含量最低的样品相差11.6倍，这可能是由于采摘年份和产地不同造成的影响。由表2中可以看出，陕西红河谷和眉县所产的盘龙七所含的岩白菜素含量稳定，但红河谷产盘龙七中岩白菜素的含量较高，可能是由于秦岭红河谷的土壤、降水、气候等因素适合盘龙七的生长，因此，选择合适的产地尤为重要，也为临床用药提供了科学依据。

盘龙七作为“太白七药”之一，在民间使用悠久，具有广泛的药用价值，但其质量标准尚不完善，有待进一步提高，本研究建立的薄层色谱鉴别方法，可以看出15批药材成分一致，稳定，能用于鉴别盘龙七药材。本论文还建立了盘龙七中岩白菜素、儿茶素、芦丁的HPLC含量测定方法。研究结果表明，本方法薄层斑点清晰，分离度好，含量测定方法简便易行，重复性好，为盘龙七的质量标准制定提供了科学依据。