岩白菜素在小鼠体内的药动学研究

窦 伟 李英伦肖 潇 李亨东

(四川农业大学动物医学院药学实验室,四川雅安 625014)

岩白菜素在小鼠体内的药动学研究

窦 伟 李英伦*肖 潇 李亨东

(四川农业大学动物医学院药学实验室,四川雅安 625014)

目的：研究岩白菜素（bergenin）在血液中的HPLC检测方法及在健康小鼠体内的药动学。方法：65只健康小鼠，单剂量一次灌胃岩白菜素200 mg.kg-1；采用高效液相色谱法测定血药浓度，血药浓度最低检测质量浓度为0.203μg.mL-1，并以DAS 2.0药动学软件对所得数据进行分析。结果：岩白菜素体内过程符合一级吸收二室模型（权重=1），主要动力学参数如下：t1/2α为（1.363±0.761）h，t1/2β为（2.658±0.182）h，Tmax为（0.833±0.167）h，Cmax为（10.864±1.616）mg.L-1，AUC（0-t）为（44.626±5.497）mg.L-1.h-1，Ka为（2.918±1.643）l.h-1，MRT（0-t）为（3.600±0.210）h。结论：岩白菜素在健康小鼠体内吸收迅速，生物利用度低，分布较广，消除较快。

岩白菜素 药动学 高效液相色谱

岩白菜素（C14H16O9），环合芳香碳苷类化合物，最早从岩白菜属中植物提取出来而得名[1]。中国药典收载为镇咳祛痰药，可用于慢性支气管炎的治疗，并有护肝、抗心律不齐、免疫增强、抗炎、抗HIV、等方面的药理作用[2-6]。但由于岩白菜素脂溶性低，对光和热不稳定，其制剂在体内不易被吸收，代谢快，生物利用度不高等因素，限制了岩白菜素的广泛应用。本实验通过对岩白菜素的药动学和组织分布研究，建立岩白菜素的药动学研究方法，为以后的在体药效研究和剂型设计提供依据。

1 材料与方法

1.1 样品与试剂

岩白菜素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：111532-200202），岩白菜素片（云南滇池药业，批号：080105），磷酸、甲醇均为色谱级，实验用水为超纯水。

1.2 试验动物

清洁级昆明小鼠65只，雌性，体重20±2.2g，购于成都生物制品研究所。小鼠购进后常规饲养，饲料不含任何抗生素，观察五天无异常后进行实验。

1.3 仪器

岛津LC-2010C高效液相色谱仪、岛津CLASS-VP色谱工作站，北京同泰联TTL-DC氮吹仪。

2 试验方法

2.1 供试品制备方法与测定

小鼠眼眶取血，血液收集到肝素抗凝管中，以4 000 r.min-1离心10 min后，将上清液取出，4℃冰箱中保存备用。取血浆0.1 ml加入甲醇1.0 ml，旋涡混合1 min，超声波萃取5 min，4 000 r.min-1离心5min，取上清液，置40℃水浴中氮气吹干。精密加入甲醇100μl溶解残渣，旋涡振荡混合均匀，4 000 r.min-1离心5 min，取上清液过0.45 μm滤膜，取滤液作为供试品溶液。

2.2 标准曲线和检测限测定

取小鼠空白血浆6份，每份100μl，分别加入不同浓度的岩白菜素对照品溶液，使其在样品中质量浓度分别为0.5 μg.ml-1、2 μg.ml-1、5 μg.ml-1、10 μg.ml-1、15μg.ml-1、20μg.ml-1，旋涡振荡混匀。进样20μL，记录岩白菜素峰面积，以峰面积（A）对浓度（C）作线形回归。岩白菜素标准曲线回归方程为Y = 6811C+ 1115.3，R2=0.9991。线性范围为0.5～20μg/ml。以信噪稀释法测定信噪比为3∶1时的浓度值，即为检测限。岩白菜素的最低检测质量浓度为0.203μg.ml-1，最低检测量为4.06 ng。

2.3 回收率与精密度实验

表1 绝对回收率，相对回收率及精密度实验结果.n=5

2.4 药液制备和给药方式

岩白菜素片药液：2颗岩白菜素片（每片含岩白菜素120mg），加少量水研磨2min，定容至15ml，超声乳化2 min，制成16mg.ml-1岩白菜素的药液。

取小鼠65只，随机分为5个平行组，给药前禁食12h，自由饮水。按200mg.kg-1灌胃给药。于给药前及给药后10min，20min，30min，40min，50min，1h，2h，4h，6h，8h，10h，12h眼眶取血，血样直接采集到肝素抗凝管中，按2.1中方法处理待用。

2.5 数据分析

根据所测的岩白菜素血药浓度-时间数据，利用DAS2.0.1药动学软件计算药动学参数。

色谱柱：phenomenex C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相甲醇-0.7%磷酸（15：85），流速1.0ml.min-1，检测波长275nm，柱温40℃，进样体积20μl。

在此色谱条件下，内源性物质和代谢产物不干扰测定，峰形和分离度良好，岩白菜素的保留时间为13.4min，柱效4530，结果见图1.

图1 生物样品中岩白菜素的色谱图A-空白血样；B-给药后血样；C-空白血样加岩白菜素；1-岩白菜素

3 实验结果

3.1 色谱条件及适用性研究

3.2 药动学参数的测定

小鼠给药后，岩白菜素在小鼠体内不同时间的平均血药浓度数据用DAS2.0程序拟合，结果符合二室模型，其血药浓度见表2，血药浓度-时间曲线见图3，主要药动学参数见表3。

表2 小鼠灌胃岩白菜素后体内血药浓度（n=5）

图2 小鼠灌胃（200 mg.kg-1）后血液中岩白菜素的血药浓度-时间曲线（n=5）

4 讨论

4.1 给药剂量

人口服岩白菜素的推荐剂量为375mg/d，按体表面积比例折算小鼠灌胃量为1mg/d，但在此剂量下一次给药，大部分时间点血药浓度低于最低检测限，无法准确检测，故将一次性口服剂量扩大为4mg.（kg.bw）-1，该剂量下得到了较好的实验结果。

4.2 岩白菜素的药动学

健康小鼠灌服岩白菜素后，各项参数表明：岩白菜素在小鼠体内吸收快，达峰时间短，吸收迅速。在大剂量给药的情况下血药浓度能达到一个较高的水平，说明岩白菜素在小鼠体内的血药浓度与给药剂量呈正相关，提示了岩白菜素的吸收方式有可能为被动扩散，该结论与秦瑄[7]等以大鼠作为实验动物的研究结果相符。导致岩白菜素吸收程度低的可能原因是：一、岩白菜素结构中含有内酯环，在碱性条件下易开环水解[8]；二、岩白菜素具疏水性，在水中溶解度不高。

另外，小鼠按200 mg.kg-1灌服岩白菜素后，T1/2a为（1.363±0.761）h，表明在小鼠体内分布较快；V/F为（6.863±2.515）L.kg-1，说明岩白菜素在小鼠体内分布广泛。大鼠[7]T1/2a为（0.45±0.21）h，V/F（83.66±26.59）L.kg-1，与小鼠相比存在分布差异。

表3 小鼠灌胃（200 mg.kg-1）后血中岩白菜素的药动学参数（二室模型）.n=5

小鼠灌服岩白菜素后的T1/2β为（2.658±0.182）h，CL/F为（2.152±0.289）L·kg-1·h-1，说明岩白菜素在小鼠体内消除较快，有效血药浓度维持时间较短。大鼠[7]T1/2β为（8.73±3.67）h，CL/F为（30.48±4.35）L·kg-1·h-1，大小鼠相比较，小鼠对岩白菜素的消除较快。

[1] 李百华，王俊平.岩白菜素的研究概况[J].西北药学杂志，1990，5（3）：45-47.

[2] Lim H K，Kim H S，Choi H S，et al.Hepatoprotective effects of bergenin，a major constituent of Mallotus japonicus，on carbon tetrachloride-intoxicated rats[J]Journal of thnopharmacology，2000，72（3）：469-474.

[3] Pu HL，Huang X，Zhao JH，et al.Bergenin is the antiarrhythmic principle of Fluggea virosa[J].Planta Medica，2002，68（4）：372-374.

[4] Nighat N，Surrinder K，Mushtaq A，et al.Immunomodulatory effect of bergenin and norbergenin against adjuvant-induced arthritis—A flow cytometric study [J].Journal of Ethnopharmacology，2007，122（2）：401-405.

[5] Swarnalakshmi T，Sethuraman MG，Sulochana N.，et al.A note on the antiinflammatory of bergenin [J].Current Science，1984，53（17）：917.

[6] Inder P S，Sandip B B，Bhutani K.Anti-HIV natural products [J]. Current Science，2005，89（2）：269-290.

[7] 秦瑄.岩白菜素的生物药剂学和药代动力学基础研究[D].四川大学，2007.

[8] 赵荣春，高志燕.岩白菜素的稳定性研究[J].新疆医学院学报，1993，16（4）：348-349.

窦伟（1984-），男，硕士研究生，从事新兽药的开发。

李英伦（1965-），男，教授，博士，主要从事兽医药理与中兽医的研究。