天门冬氨酸氨基转移酶的临床应用与比对研究

王亚男

（中国人民大学统计学院，北京 100000）

天门冬氨酸氨基转移酶，存在于人体各种组织中，其中以心肌中含量最丰富，其次是在肝脏、骨骼肌和肾脏等组织中。在肝脏内，70%到80%存在于肝细胞线粒体中，20%到30%存在于肝细胞质中，天门冬氨酸氨基转移酶绝对值超过谷氨酸氨基转移酶。天门冬氨酸氨基转移酶以其在细胞内分布的部位不同分为两种同工酶，即细胞质型天门冬氨酸氨基转移酶和线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶。由于线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶定位于线粒体内，不易释放进入血液中。正常情况下，天门冬氨酸氨基转移酶在血清中的含量很低，但如果有相关组织器官发生损伤时，天门冬氨酸氨基转移酶在血清中的含量会发生变化。天门冬氨酸氨基转移酶的测定有助于了解心肌、肝、肾组织的损伤程度。天门冬氨酸氨基转移酶的增高常见于急、慢性重症肝炎、肝硬变、心肌炎、心肌梗塞、肾炎、胆管炎、皮肌炎、胰腺炎等病症。由于心肌含天门冬氨酸氨基转移酶量最高，其次是肝脏，所以心和肝细胞损伤后血中酶活性能迅速升高。但仅仅测定总天门冬氨酸氨基转移酶活性不能完全反映心与肝损伤程度和判定预后。测定血清线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶可间接了解肝细胞超微结构损伤及线粒体损害的严重程度。线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶不仅能作为心、肝细胞坏死的指标，也能作为对心与肝脏疾病动态监测的指标。因此天门冬氨酸氨基转移酶含量的检测在临床诊断中具有非常重要的意义。

鉴于天门冬氨酸氨基转移酶含量检测在临床诊断中的重要意义。体外诊断试剂的领域中，已有多家企业的产品获得国家药品监督管理局上市批件并进行销售。如：天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（速率法）、天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（IFCC速率法）AST (IFCC Method)、天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒（比色法）Aspartate Aminotransferase (ASTL)、天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)法）、天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)等。其中天门冬氨酸底物法的检测原理是反应开始由于α-酮戊二酸作为第二种试剂的添加。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的浓度由其在340/410 nm的吸收率测量，吸光度降低速率与天门冬氨酸转氨酶活性成正比。

目前临床应用的产品在生产厂家、检测原理等诸多方面的选择有很多，为了选出更优的，更适合临床应用的产品，现对市面在售的多种产品中随机选择了两个产品试剂A和试剂B 进行对同一样本的检测比对研究，同时为了进一步验证灰区样本的检测灵敏度，我们还选择了一个应用最为广泛的试剂C 作为第三方试剂，对检测不一致的样本进行复核，同时结合临床诊断进一步判定灰区样本的检测结果，进而判断两种试剂的检测的灵敏度。

在此次比对研究的实验中，我们计划选取100 例血清样本，进行检测并统计比较，样本的检测结果需要涵盖检测水平正常样本及异常样本，且样本测量值需要覆盖较大的检测范围。

虽然此次的研究仅仅是为了挑选更加合适的临床检测用试剂，但是对于样本的使用需要符合《赫尔辛基》的伦理原则，任何公开的文件中不得透漏任何病人的相关信息，不得对病人造成隐私的泄露。因为此次实验仅仅是使用临床常规检测的剩余样本，所以不会与人体有直接接触，预期不会产生任何不良事件。同时会采取最严格的措施来保护样本信息。而且为了更加客观地检测并评价分析检测结果，此次实验我们将采用盲法，即检测人员将无法得知实验用样本的任何信息。样本收集由人员1 来完成，样本收集完成后，由人员1 对样本进行去标识并重新编号，编号顺序为1001-1100。人员1 将编号完成的样本送至人员2 手中，由人员2 完成所有的检测工作，并将数据完整的反馈给人员1.最终由人员1 对数据进行统计并分析。统计完成后再由人员1和人员2同时对检测结果进行讨论。

此次实验样本入选的标准为临床剩余样本；样本的采集和处理符合标准实验室操作以及产品说明书的要求；样本的相关信息完整，包括年龄，性别，唯一且可追溯的编号，临床诊断等。排除标准为严重溶血、混浊的样本；不符合样本采集和处理要求的样本；样本收集时间或病例信息不明确。剔除标准为仪器或人为因素（包括样本处理、检测操作可能出现的干扰或错误）导致无法确认待评价试剂与对比试剂结果差异的样本；测定结果缺失待评价试剂（或对比试剂）的检测数据的样本；检测结果超出试剂线性范围的样本。在测定过程中，对样本分别用受试试剂和对比试剂进行测定，分别记录测量值，并对数据进行如下分析。定量分析：根据试剂A的测定结果与试剂B的测定结果，求出线性回归方程，计算样本浓度范围、相关系数（r）及常数的95%置信区间。定性分析：根据试剂A 及试剂B 说明书的各自规定，检测结果在各自参考值范围内的，判断为阴性；检测结果在各自参考值范围外的，判断为阳性。如试剂A和试剂B的定性分析不符，则用试剂C 作为第三方检测结果进行检测并判定。以试剂A 检出结果作为参照，计算试剂B的阳性符合率、阴性符合率、总体符合率和研究试剂和对比试剂的一致性kappa 值。阳性符合率：受试试剂阳性样本占对比试剂阳性样本的比例。阴性符合率：受试试剂阴性样本占对比试剂阴性样本的比例。总体符合率：检出结果一致的样本占总样本的比例。kappa 值：受试试剂和对比试剂的一致性。重点关注灰区样本的检测与判读。

本次入组的样本临床诊断多为肾病综合征；肝功能异常、原发性胆汁性肝硬变、冠状动脉粥样硬化性心脏病、IgG4 相关疾病；自身免疫性胰腺炎、慢性肾功能衰竭等。根据此次试剂A和试剂B 对入组的110 例样本的检测，其中1071 号样本对试剂A和试剂B 均超出检测下限，所以在最终统计中需剔除此样本的检测结果。因此最终对109例样本的检测结果进行定量及定性的数据统计分析。统计结果如下。

定量统计：样本数量109 例，Y 截距-2.389，相关系数0.999，斜率1.035，样本浓度范围10U/L-816U/L。设试剂B 测定结果为X，试剂A 测定结果为Y，经计算，N=109 次，r=0.9999，P=0.000（P<0.001），根据统计学原理，两组数据高度相关。一元线性回归方程为：y=1.035x -2.389，F 值为49351.4763，系数95%至今区间为1.0258～1.0442，截距95%置信区间为-3.9489～-0.8291，p<0.05，线性回归方程具有统计学意义，说明试剂A和试剂B 对同一样本的检测结果具有很好的相关性。

定性结果统计分析：根据试剂A 及试剂B 说明书的各自规定，试剂A 检测结果15U/L-37 U/L 为阴性，其余检测结果为阳性。试剂B 检测结果13U/L–40 U/L的为阴性，其余检测结果为阳性。试剂C 检测结果15U/L-40U/L 为阴性，其余检测结果为阳性。本次试验共检测110 例样本，对这110 例有效样本进行定性分析（其中在定量分析时，剔除的1071 号样本（原因：试剂A和试剂B 检测结果均超出线性下限），有定性意义，故在本次定性分析时无需剔除）结果如下。以试剂A 检出结果作为参照，计算试剂B的阳性符合率、阴性符合率、总体符合率和试剂A和试剂B的一致性kappa 值。阳性符合率＝(2+67)/(4+71)×100%＝92.00%（95%可置信区间：83.40%～97.01%），阴性符合率＝24/25×100%＝96.00%（95%可置信区间：79.65%～99.90%），总符合率＝(2+24+67)/100×100%＝93.00%（95%可置信区间：86.11%～97.14%），Kappa值＝0.8250。

阴阳性检测结果不一致的样本信息如下：样本1：性别男，年龄49 岁，临床诊断为末端回肠狭窄，试剂A 检测结果14.60 U/L，试剂B 检测结果14U/L，试剂C 检测结果14.05 U/L；样本2：性别男，年龄25 岁，临床诊断为纯红再生障碍性贫血；侵袭性胸腺瘤，试剂A 检测结果39.93U/L，试剂B 检测结果37U/L，试剂C 检测结果34.07 U/L；样本3：性别女，年龄34 岁，临床诊断为结缔组织病；肺间质病变，试剂A 检测结果43.21U/L，试剂B 检测结果40U/L，试剂C 检测结果40.05 U/L；样本4：性别女，年龄44 岁，临床诊断为骨坏死；重度骨质疏松；高脂血症；血压；动脉硬化，试剂A 检测结果24.09U/L，试剂B 检测结果12U/L，试剂C 检测结果20.03 U/L；样本5：性别女，年龄55岁，临床诊断为原发性胆汁性肝硬化；重度骨质疏松，试剂A检测结果38.19U/L，试剂B 检测结果38U/L，试剂C 检测结果39.03 U/L；样本6：性别女，年龄63 岁，临床诊断为下肢缺血，试剂A 检测结果14.46U/L，试剂B 检测结果13U/L，试剂C 检测结果14.03 U/L；样本7：性别女，年龄59 岁，临床诊断为宫颈恶性肿瘤，试剂A 检测结果40.87U/L，试剂B 检测结果18U/L，试剂C 检测结果40.03 U/L。其中样本1、2、3、4、5、6的检测结果虽然阴阳性判定不一致，但是接测结果基本都在参考值附近的灰区样本，结合试剂C的检测结果和临床诊断，可推断，检测结果阴阳行不符的原因很可能是样本以及检测系统本身的误差所导致，不影响试剂在临床中的应用。但是样本7的试剂A和试剂B的检测结果相差很大，但是结合试剂C的检测结果，可推断，试剂B 检测过程中出现了错误，因此此数据在此次分析中属于离群值，在进行最终结果判断时建议剔除。

针对此次实验数据的分析可发此次所选的任意三种已上市的试剂，三种试剂对于同一样本的测值有可能会存在一定差异，但是这种差异对于临床诊断的判别影响不大，因为临床医生不会仅仅根据临床的检测结果进行病人诊断，病人诊断的确定是根据病人针对性的检查与临床观察和病人描述等多种因素综合诊断得出。因此此次实验无法判定试剂A和试剂B的优劣性。任意一种试剂均可作为临床诊断的辅助试剂。