板蓝根饮片炮制工艺研究*

李 恒，陈江平，甘力帆，雷玉婧，姚晓璇，刘燎原

（广东一方制药有限公司，广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244）

板蓝根，别名靛根、蓝靛根、靛青根等，为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根[1]。板蓝根始载于《神农本草经》，列为上品，其性寒，味苦，归心、胃经，是一味清热解毒、凉血利咽的临床常用中药，用于瘟疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，痄腮，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿[1]。现代研究表明，板蓝根主要含有核苷类、有机酸类、氨基酸类、生物碱类等成分，核苷类成分为板蓝根抗病毒作用的有效部位之一，尿苷、腺苷、鸟苷均为板蓝根中的核苷类成分[2-4]。生物碱类中的（R，S）-告依春也具有抗病毒的作用，尤其对流感病毒具有显著的抑制活性[5-7]。

2015年版《中华人民共和国药典》一部“板蓝根”项下饮片炮制方法为“除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥”[1]，缺乏具体的工艺参数，不利于板蓝根饮片的质量控制。有关板蓝根饮片炮制工艺研究的质量评价指标均较单一[7-8]，鲜见多指标综合评价板蓝根饮片炮制工艺的报道。主成分分析（principal component analysis，PCA）是基于化学、数学和计算机科学联合交叉应用的多元分析方法，由PEARSON[9]在1901年首次提出，PCA的本质就是将数据的多元变量抽取出少量主成分，从而在能保留原始数据中绝大多数信息的情况下，使用尽可能少的主成分来表征复杂的原始数据[10-12]，其在中药炮制研究中有着非常广泛的应用[13-15]。本研究以外观性状、水分、浸出物、（R，S）-告依春含量和4个特征峰的峰面积为评价指标，结合主成分分析法，综合评价不同炮制工艺对板蓝根饮片质量的影响，优选板蓝根饮片炮制工艺，为板蓝根饮片规范炮制及质量提升提供参考。

1 仪器与试药

1.1 试药板蓝根药材（批号：YM1906006，产地：陕西）购自陕西生生中药饮片有限责任公司，经广东一方制药有限公司魏梅主任药师鉴定为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根。

1.2 试剂对照品尿苷（批号：wkq18042002，纯度≥98%，四川省维克奇生物科技有限公司）；腺苷（批号：110879-201703，纯度99.7%）、鸟苷（批号：111977-201501，纯度93.6%）、（R，S）-告依春（批号：111753-201706，纯度100%）对照品（中国食品药品检定研究院）；甲醇、磷酸（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

1.3 主要仪器Waters Arc型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；ME204E型万分之一天平、XP26型百万分之一天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q Direct型超纯水系统（默克股份有限公司）；DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；C21-WK2102型多功能电磁炉（美的集团有限公司）。

2 方法与结果

2.1 板蓝根饮片的制备参考2015年版《中华人民共和国药典》一部“板蓝根”项下方法[1]，本研究确定以下3种饮片炮制方法。A法：取板蓝根药材适量，除去杂质，分别置于10倍投料量的冷水中浸泡1、2、4、8 h（样品编号依次为：A1、A2、A3、A4），切厚片，50℃烘箱干燥12 h，筛去碎屑；B法：取板蓝根药材适量，除去杂质，分别润制2、4、8、12、24、36 h（样品编号依次为：B1、B2、B3、B4、B5、B6），切厚片，50℃烘箱干燥12 h，筛去碎屑；C法：取板蓝根药材适量，除去杂质，分别蒸制0.5、1、2、3 h（样品编号依次为：C1、C2、C3、C4），切厚片，50℃烘箱干燥12 h，筛去碎屑。按上述不同炮制工艺各制备3批样品，不同炮制工艺的板蓝根饮片外观性状见表1。由结果可知，采用冷水浸泡法和润制法制得的饮片，随着炮制时间的增加，切制时会出现翘片，部分样品产生异味，因此需要合理选择炮制时间。

表1 不同炮制工艺的板蓝根饮片外观性状

2.2 色谱条件[16]色谱柱Agilent TC-C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，1%A；5~30 min，1%→7%A；30~40 min，7%A），检测波长为245 nm，流速为0.8 mL/min，柱温为30℃，进样量为10 μL。

2.3 对照品溶液的制备取尿苷、腺苷、鸟苷和（R，S）-告依春对照品适量，精密称定，加甲醇制成含尿苷、腺苷、鸟苷和（R，S）-告依春各15.778、17.647、20.218、40.120 μg/mL的混合对照品溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备取板蓝根饮片粉末（过四号筛）约1.0 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，煎煮2 h，放冷，再称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5 精密度试验取“2.3”项下对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，计算峰面积及保留时间的RSD。结果4个色谱峰峰面积的RSD分别为0.87%、0.54%、0.79%、0.69%，保留时间RSD分别为0.13%、0.18%、0.12%、0.15%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验取“2.4”项下供试品溶液，分别于制备0、2、4、6、8、12 h后按“2.2”项下色谱条件测定，计算峰面积及保留时间的RSD。结果4个色谱峰峰面积的RSD分别为2.41%、0.15%、0.71%、0.93%，保留时间RSD分别为0.24%、0.29%、0.19%、0.26%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验取同一板蓝根饮片，按“2.4”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，计算峰面积及保留时间的RSD。结果4个色谱峰峰面积的RSD分别为4.40%、4.12%、2.78%、4.68%，保留时间RSD分别为0.22%、0.30%、0.21%、0.22%，表明该方法重复性良好。

2.8 样品分析取不同炮制工艺饮片，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，记录色谱图。以4种对照品为对照，对不同炮制工艺的板蓝根饮片成分进行比较，得到HPLC图谱见图1。由图1可知，板蓝根药材及不同炮制工艺的饮片中均含有尿苷、腺苷、鸟苷和（R，S）-告依春4种成分。因此，本研究采用共有峰按取样量折合的峰面积为指标，比较板蓝根炮制前后的成分变化。板蓝根药材及不同炮制工艺饮片的4个峰的平均色谱峰峰面积见表2。

表2 板蓝根药材及不同炮制工艺饮片共有峰平均峰面积结果（n=3）

图1 板蓝根药材及不同炮制工艺饮片HPLC图

2.9 水分、浸出物和（R，S）-告依春含量的测定水分测定法按照2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0832项下的烘干法，醇溶性浸出物测定法按照2015年版《中华人民共和国药典》四部通则2201项下的热浸法（溶剂为45%乙醇）[17]和2015年版《中华人民共和国药典》一部板蓝根项下含量测定方法[1]对板蓝根药材和饮片样品的水分、浸出物和（R，S）-告依春含量进行测定。由结果可知，板蓝根药材及不同炮制品水分、浸出物和（R，S）-告依春含量分别在6.8%～12.1%、26.8%～45.9%、0.032%～0.234%之间，均符合《中华人民共和国药典》规定。（见表3）

表3 板蓝根药材及不同炮制工艺饮片的水分、浸出物和（R，S）-告依春含量测定结果（n=3）

2.10 主成分分析使用SPSS 19.0软件，以浸出物、生物碱类成分（R，S）-告依春含量及核苷类成分尿苷、腺苷、鸟苷的平均峰面积为变量，以特征值和累计贡献率为判定依据，对不同炮制方法的板蓝根饮片进行主成分分析。根据降维结果，共计算出2组主成分PC1和PC2，特征值分别为3.218、1.072。各成分方差贡献值分别为64.361%、21.432%，累计贡献值达到85.793%，具有较强的代表性，可用来评价板蓝根不同炮制工艺饮片的质量。

根据各因子载荷矩阵及特征值计算得分系数，进一步得到PC1、PC2及总和得分（Y）方程式：

式中：ZX1、ZX2、ZX3、ZX4、ZX5分别为浸出物、（R，S）-告依春、尿苷、腺苷、鸟苷的标准化值。

利用上式计算不同炮制工艺的板蓝根饮片的综合得分，并按结果高低进行排序（见表3），得分越高，表示此炮制工艺条件下的板蓝根饮片质量越好。由图2和表4可知，PC1主要反映了尿苷、腺苷、鸟苷和（R，S）-告依春的信息，PC2主要反映了浸出物的信息。不同炮制工艺的板蓝根饮片综合得分为：B4＞B2＞A3＞B5＞A4＞A2＞B6＞B3＞C4＞C3＞C2＞A1＞C1＞B1。结合外观性状，板蓝根饮片最优炮制工艺为润制12 h，切厚片，50℃干燥12 h。

表4 因子载荷矩阵

图2 主成分因子分析图

2.11 验证试验取板蓝根药材适量，采用“润制12 h，切厚片，50℃干燥12 h工艺”平行加工饮片样品3份，分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，尿苷、腺苷、鸟苷和（R，S）-告依春的平均峰面积分别为170 052、265 843、286 422、289 987（n=3）。同时按2015年版《中华人民共和国药典》板蓝根项下相关方法测定，水分、浸出物和（R，S）-告依春的平均含量分别为9.0%、36.9%、0.171%（n=3）。

3 讨 论

从外观性状判断，冷水浸泡4、8 h（A3、A4）和润制12 h（B6）的板蓝根饮片有明显异味，且切制时出现翘片，蒸制2、3 h（C3、C4）的板蓝根饮片切制时也出现翘片。原因可能是由于药材过度浸润，致使药材所吸水分过多，甚至造成药材变质发黏，不易切制[18]。上述5种炮制工艺条件下的板蓝根饮片水分、浸出物及（R，S）-告依春含量均符合2015年版《中华人民共和国药典》板蓝根项下相关要求，但其外观性状与标准存在一定差异，因此中药饮片炮制应关注外观性状，其是中药饮片质量评价的基础。

板蓝根中生物碱类成分（R，S）-告依春和核苷类成分尿苷、腺苷、鸟苷均具有明显的抗病毒活性，可干扰病毒核酸的合成[19-21]。本研究结果显示，不同炮制工艺的板蓝根饮片中尿苷、腺苷、鸟苷、（R，S）-告依春的峰面积及浸出物含量均比原药材有明显增加，其抗病毒活性成分的含量有较大提升，更有利于发挥临床疗效。饮片外观性状结合综合评分结果显示，润制法炮制的板蓝根饮片整体质量较好，可作为板蓝根饮片的最优炮制工艺。