lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200对萎缩性胃炎患者继发胃癌的预测价值探究

刘梁英，万晓强，石钢，李显梅，赵晓莉

胃癌是最为常见的消化系统恶性肿瘤，据不完全统计，胃癌发病率、病死率高居所有恶性肿瘤首位[1-2]。我国胃癌发病率一直居高不下，每年新增病例不断上升，并逐渐趋于年轻化，引起广大专家学者的关注[3-4]。通常胃癌患者发病初期无明显临床症状，早期诊断率相对较低，确诊时病情已发展至中晚期，临床治疗难度增大，严重威胁患者生活质量以及预后，因此对胃癌发病危险因素进行研究，做到提前预防、早期诊断，对胃癌的预防和治疗具有重要意义[5-6]。有研究表示，萎缩性胃炎为胃癌癌前疾病，具有较高的病情发展为胃癌的危险，因此对萎缩性胃炎、胃癌患者早期诊断、治疗，对胃癌的预防以及控制胃癌病死率具有重要意义[7]。本研究中对胃癌、胃炎患者lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达进行检测，旨在探究lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200对萎缩性胃炎患者继发胃癌的风险预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年8月至2020年10月重庆红十字会医院、重庆市急救医疗中心收治的胃炎患者150例进行前瞻性研究，其中，男69例，女81例；年龄25～67岁，平均年龄(46.2±16.8)岁。其中非萎缩性胃炎患者68例，包括男33例，女35例，年龄25～66岁，平均年龄(45.5±16.4)岁；萎缩性胃炎患者82例，包括男36例，女46例，年龄27～67岁，平均年龄(46.9±15.9)岁，其中包括轻度患者27例、中度患者36例、重度患者19例。选取同期重庆红十字会医院、重庆市急救医疗中心收治的胃癌患者80例，包括男43例，女37例，年龄45～72岁，平均年龄(58.5±10.8)岁，其中包括淋巴结转移患者41例，无淋巴结转移患者39例；Ⅰ、Ⅱ期患者35例，Ⅲ、Ⅳ期患者45例；依据分化程度可分为高分化38例，中分化25例，低分化17例。本研究所有研究对象均知情同意，并获医院伦理委员会批准。

纳入标准：①胃炎患者均符合中华医学会对胃炎的诊断标准[8]，胃癌患者符合中华医学会对胃癌的诊断标准[9];②年龄均>18岁。

排除标准：①病历资料不全者；②心、肝、肾、肺等功能不全者；③3个月内接受过相关治疗者；④并发其他消化系统疾病患者；⑤接受过放化疗治疗胃癌患者；⑥沟通障碍者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集、病理学检查 采集所有研究对象静脉血5 mL，以离心半径为5 cm、转速3 000 r/min的离心机离心处理10 min，分离上层血清，使用促凝管-80 ℃环境中保存。胃镜下取所有胃炎患者胃黏膜组织进行病理学诊断，黏膜萎缩分级：轻度：原有腺体数减少1/3以内，中度：原有腺体数减少1/3～2/3之间，重度：原有腺体数减少2/3以上；上皮内瘤变分级：低级别上皮内瘤变：轻、中度异型增生，高级别上皮内瘤变：重度异型增生、原位癌。取胃癌患者活检组织做病理诊断，制作标本，4%中性福尔马林固定、石蜡包埋，厚度3 μm，连续切片作原位杂交。

1.2.2 原位杂交 取待测标本，4%中性福尔马林固定、石蜡包埋、切片，厚度5 μm。将切片置于70 ℃烤箱中烤2 h后取出。待测标本脱蜡、水化处理后置于3% H2O2中10 min，使用无菌蒸馏水洗涤3次。37 ℃环境下，在待测标本上滴加胃蛋白酶溶液消化15 min，PBS液洗涤3次，5 min/次，使用无菌蒸馏水冲洗1次。切片滴加20 μL预杂交液，37 ℃恒温箱孵育120 min，将多余液体去除。使用杂交液稀释地高辛标记的寡核苷酸探针(8 μg/mL)，切片滴加20 μL杂交液后盖上原位杂交盖玻片，置于37 ℃恒温箱杂交过夜。拿掉盖玻片后使用37 ℃ 2.0×SSC、0.5×SSC、0.2×SSC分别洗涤5 min后滴加封闭液，37 ℃环境中孵育0.5 h，去除多余液体后滴加鼠抗地高辛(生物素标记)，37 ℃环境中孵育1 h后使用PBS液清洗3次，5 min/次，滴加SABC后37 ℃环境中孵育20 min，使用PBS液清洗3次，5 min/次，DAB显色，切片置于苏木素中2 min，无菌蒸馏水冲洗4次，1%盐酸酒精分化，不同梯度酒精脱水，封片处理，显微镜下观察。

1.2.3 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达检测 Western blot法检测lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达。取50 μg蛋白煮沸变性，SDS-PAGE凝胶电泳，切开凝胶后转膜Western封闭液封闭待测蛋白和内参蛋白1.5 h，1∶1 000添加待测蛋白抗体、1∶2 000添加内参抗体后过夜孵育，Western洗涤液洗涤，1∶5 000添加稀释山羊抗兔IgG，孵育1 h后洗涤。显色、曝光、成像以内参条带灰度值与蛋白比值为结果统计分析。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 胃炎、胃癌患者lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达比较

如表1、图1、图2所示，与非萎缩性胃炎患者比较，萎缩性胃炎患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异具有统计学意义(P<0.05)；与非萎缩性胃炎、萎缩性胃炎患者比较，胃癌患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 胃炎、胃癌患者lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达比较

2.2 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达与胃癌患者病理特征关系

如表2所示，与无淋巴结转移患者比较，有淋巴结转移患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异有统计学意义(P<0.05)；与Ⅰ、Ⅱ期患者比较，Ⅲ、Ⅳ期患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异有统计学意义(P<0.05)；与高分化患者比较，中分化患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异具有统计学意义(P<0.05)；与中分化患者比较，低分化患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表2 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达与胃癌患者病理特征关系

2.3 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃癌中表达相关性

如图3所示，对lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃癌中表达相关性进行分析，lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃癌中表达呈负相关(r=-0.380，P=0.001)。

图3 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃癌中表达相关性

2.4 不同严重程度萎缩、上皮内瘤变的lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达比较

如表3所示，与轻、中度萎缩患者比较，重度萎缩患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异有统计学意义(P<0.05)；与低级别上皮内瘤变患者比较，高级别上皮内瘤变患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，lncRNA BC200表达较高，差异有统计学意义(P<0.05)。

表3 不同严重程度萎缩、上皮内瘤变的lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达比较

2.5 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200对萎缩性胃炎患者继发胃癌的风险预测价值

如表4、图4所示，与lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200单项检测相比，两项联合检测对萎缩性胃炎患者继发胃癌的风险预测的灵敏度较高，特异度较低，具有统计学差异(P<0.05)。

表4 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200对萎缩性胃炎患者继发胃癌的风险预测价值

图4 lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200对萎缩性胃炎患者继发胃癌的风险预测价值ROC曲线图

3 讨论

萎缩性胃炎是一种较为常见的消化内科疾病，具有胃黏膜组织薄、肌层增厚、黏膜上皮腺体减少或不典型增生等临床特征[10-11]。萎缩性胃炎患者主要临床表现为食欲较差、身体消瘦、腹部胀痛等，严重影响患者身体健康和生活质量[12]。临床医学将发生于机体胃黏膜组织的恶性肿瘤统称为胃癌，主要临床表现为食欲低下，上腹部疼痛，病情发展至晚期会出现身体消瘦、贫血现象[13-14]。中老年人群为胃癌症状的高发群体，随着我国人口老龄化的不断发展，胃癌症状发病率呈现连年上升趋势。胃癌具有发病率高、恶性程度较高、治疗难度较大、病死率高的特点，越来越多的专家学者开始致力于胃癌发病机制、临床治疗的研究[15-16]。马振东等[17]在研究中表示，萎缩性胃炎为常见的胃癌癌前病变，若得不到及时有效的治疗，病情具有较高发展为胃癌的风险。

越来越多的专家学者们通过分子生物学、基础医学等途径对胃癌症状发病机制进行研究，旨在寻找新的胃癌的治疗靶点。近年来非编码RNA(ncRNA)称为恶性肿瘤发病机制、临床治疗的主要研究方向。长链非编码RNA(lncRNA)为ncRNA的重要组成部分，在许多疾病发生发展过程中均发挥重要作用。大量研究表示，lncRNA参与机体免疫功能变化，还与肿瘤组织的发生发展密切相关，lncRNA为肿瘤诊断以及患者预后预测的重要标志物[18-22]。lncRNA TPT1-AS1是lncRNA家族的重要组成成员，位于13号染色体，具有影响细胞侵袭、增殖的生物学特性。有学者在研究中表示，lncRNA TPT1-AS1在肿瘤疾病中属于一种保护性基因，其表达水平的高低与肿瘤组织分级具有一定的相关性。现有研究显示，lncRNA TPT1-AS1在宫颈癌、前列腺癌等恶性肿瘤中具有影响疾病进展的作用，但是关于lncRNA TPT1-AS1表达变化与胃癌发生发展相关性的研究还鲜有报道[23-24]。本文研究结果显示，相比胃炎患者，lncRNA TPT1-AS1在胃癌中表达较低，说明lncRNA TPT1-AS1在胃癌中呈现异常低表达。本文研究中还对不同病理特征胃癌患者lncRNA TPT1-AS1表达进行比较，结果显示，淋巴结转移、病理分期较高、低分化胃癌患者lncRNA TPT1-AS1表达较低，说明lncRNA TPT1-AS1表达变化与胃癌患者临床病理特征具有一定相关性，可能参与胃癌的发生发展。

lncRNA BC200是lncRNA家族的重要组成成员，其表达变化与肿瘤细胞的侵袭、增殖能力密切相关。有研究表示，lncRNA BC200在肿瘤组织中呈现异常高表达，并且能够释放于血液中，能够作为恶性肿瘤诊断、预后评估的标志物[25]。孟腾等[26]在研究中表示，lncRNA BC200在肺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中均呈异常表达，并且其表达变化与上皮间质转化具有一定相关性，与肿瘤组织细胞侵袭、转移具有密切联系，但是关于lncRNA BC200表达变化与胃癌发生发展相关性的研究还相对较少。本文研究结果显示，相比胃炎患者，lncRNA BC200在胃癌中表达较高，说明lncRNA BC200在胃癌中呈现异常高表达。本文研究中还对不同病理特征胃癌患者lncRNA BC200表达进行比较，结果显示，淋巴结转移、病理分期较高、低分化胃癌患者lncRNA BC200表达较高，说明lncRNA BC200表达变化与胃癌患者临床病理特征具有一定相关性，可能参与胃癌的发生发展。

本文研究还发现，lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃炎患者不同严重程度萎缩、上皮内瘤变中表达异常，且lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃癌中表达呈负相关性，说明lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达变化在胃癌发生发展过程中具有一定相关性，共同参与胃癌的发生发展。

综上所述，lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200在胃炎患者不同严重程度萎缩、上皮内瘤变中表达出现明显异常，且与胃癌患者病理特征密切相关，检测lncRNA TPT1-AS1、lncRNA BC200表达对萎缩性胃炎患者继发胃癌的风险具有一定的预测价值。