高海拔地区肺部感染患儿血清维生素A水平变化及其与免疫细胞的关系

张轩，侯静，冶秀兰，袁馥梅，董允，刘成梅，王兆建，李建华，曹海霞，马艳艳，

1 青海大学研究生院，西宁810000；2 青海大学附属医院中心实验室；3 青海大学附属医院儿科

肺部感染是儿童常见的感染性疾病之一，虽然相关临床医学研究取得了一定的进步，但目前仍是导致5 岁以下儿童死亡的主要原因［1］。我国因肺部感染致死的病例占全世界的7%，死亡绝对数占西太平洋地区的2/3，其中75%的患儿是婴幼儿，85%的患儿在农村和边远地区［2］。青海高寒、低氧的高海拔气候特点、饮食习惯，使儿童肺部感染发生率较高，病程相对较长、症状相对较重［3］。营养状态是感染性疾病发生发展不可忽视的因素之一。孕期适量增加维生素A（VA）可降低低体质量新生儿出生率［4］，也对维持呼吸道上皮细胞的完整性，肺组织的发育、损伤修复及机体的免疫系统功能有重要作用［5］。VA 水平与儿童肺部感染及感染程度相关［6］，但高海拔地区患儿血清VA 水平及其与免疫细胞的关系报道较少。因此，本研究对此做了探讨，为高海拔地区儿童肺部感染的预防和诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2018年11月—2020年5月就诊于青海大学附属医院儿科并确诊肺部感染的患儿21 例（肺部感染组），男8 例、女13 例，年龄0～14 岁，平均住院时间10 d。纳入标准：①均符合肺部感染的诊断标准［7］；②年龄0～14 岁。排除标准：贫血、营养不良；合并其他呼吸系统疾病、自身免疫病、先天性遗传代谢病；近3个月内使用过激素类药物、丙种球蛋白及VA、VE制剂；合并心、肝、肾等其他系统严重急慢性疾病。同期选择门诊体检儿童32例（正常对照组），男 20 例、女 12 例，年龄 0～14 岁。纳入标准：近1个月内未发生急慢性呼吸系统、消化系统感染性疾病；年龄 0～14 岁；近 3 个月内未使用 VA、VE制剂。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。两组家属均知情同意，本研究经青海大学附属医院医学伦理委员会批准（P-SL-20190025）。

1.2 血清VA 检测 采用高效液相色谱法。采集两组空腹肘静脉血2 mL，置于抗凝管中，室温避光保存1 h，3 500 r/min 离心10 min（离心半径为20 cm），取血清置于新的EP 管中，冷藏保存待测，采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件：XTerraTMRP18色谱柱3.9 mm×150 mm、5 μm，XTerraTMRP18 预柱3.9 mm×20 mm、5 μm；柱温30 ℃；流动相：甲醇—水90∶8；流速：1 mL/min；于292 nm和325 nm同时进行双波长检测；进样量20 μL。VA 缺乏的诊断标准［8］：血清VA水平＜0.3 mg/L。

1.3 免疫细胞检测 采用流式细胞术。采集两组空腹肘静脉血1 mL，置于抗凝管中冷藏保存待测。每个流式管中加入外周血样本100 μL，分别加入抗体 CD3（20 μL）、CD4（20 μL）、CD8（5 μL）、CD19（5 μL）、CD16（5 μL）、CD56（5 μL）避光孵育15 min；每管加入红细胞裂解液1 mL，混匀室温避光孵育15 min；925 r/min离心5 min（离心半径20 cm），弃掉上清液；加入PBS 清洗后用PBS 500 μL 重悬。用流式细胞仪检测 CD3+T 细胞、CD4+T 细胞、CD8+T 细胞、CD3-CD19+B 细胞、CD3-CD16+CD56+自然杀伤细胞（NK）百分比，计算CD4+/CD8+。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 统计软件。计量资料符合正态分布用表示，比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。指标间相关性采用Spearman线性相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清VA 水平比较 肺部感染组、正常对照组血清 VA 水平分别为（0.21 ± 0.07）、（0.34 ±0.06）mg/L，比较差异有统计学意义（P＜0.05）；肺部感染组、正常对照组VA 缺乏分别为18 例（85.7%）、7 例（21.9%），比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 两组淋巴细胞亚群水平比较 两组CD4+/CD8+、CD3-CD16+CD56+NK 细胞水平比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。与正常对照组比较，肺部感染组 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞水平低，CD3+T 细胞、CD3-CD19+B细胞水平高（P均＜0.05）。见表1。

表1 两组淋巴细胞亚群水平比较（）

表1 两组淋巴细胞亚群水平比较（）

组别肺部感染组正常对照组n 21 32 t P CD3+T细胞（%）62.19±11.74 51.50±14.77-2.787＜0.05 CD4+T细胞（%）36.46±9.05 48.93±9.42 4.786＜0.05 CD8+T细胞（%）26.86±11.83 37.35±8.84 3.687＜0.05 CD4+/CD8+1.56±0.61 1.41±0.50-0.987＞0.05 CD3-CD19+B（%）18.73±6.33 11.51±6.14-4.138＜0.05 CD3-CD16+CD56+NK（%）8.04±4.12 8.52±5.91 0.323＞0.05

2.3 肺部感染组血清VA 水平与淋巴细胞亚群的相关性 肺部感染组血清VA 水平与CD4+T 呈正相关（r=0.451，P＜0.05），与CD3+T 细胞、CD8+T 细胞、CD4+/CD8+、CD3-CD19+B 细胞、CD3-CD16+CD56+NK无相关性（r分别为-0.177、0.380、-0.114、-0.200、0.017，P均＞0.05）。

3 讨论

肺部感染是儿童的常见病、多发病，反复肺部感染可引起多种并发症，严重者可影响儿童的生长发育。研究表明，儿童肺部感染高发可能与儿童免疫调节功能发育不完善、营养物质缺乏、环境污染等有关［9］。VA 作为促进儿童生长发育的重要营养素，出生后未补充VA 的儿童发育迟缓风险是服用VA 补充剂儿童的2.402倍［10］。全球普遍存在VA 缺乏，我国VA 营养状况也不容乐观，尤其是农村及偏远地区。调查发现，我国农村青少年及儿童VA 缺乏率为24.28%，边缘缺乏率为18.75%［11］。四川甘孜州高原藏区 2～3 km 海拔高度 0～6 岁儿童 VA 缺乏率为43.34%［12］。本研究结果显示，肺部感染组血清VA水平显著低于正常对照组、VA缺乏率高于正常对照组。这提示VA 水平与儿童肺部感染有一定相关性，与既往研究［6］结果一致。

研究发现，VA能够性促进气道上皮细胞增殖和分化，维持纤毛的正常皮表型和功能，对正常黏膜免疫功能有重要作用［13］。VA 缺乏会使呼吸道黏膜上皮细胞发生角化和鳞状化，使其生物完整性破坏，同时气道黏膜产生分泌型IgA 减少，从而影响呼吸道局部防御功能［14］。此外，VA及其代谢产物能够促进肺泡、肺间质的发育，肺表面活性物质相关蛋白形成，并且在肺损伤修复中起重要作用［15］。肺部感染患儿急性期VA 消耗增加、视黄醇结合蛋白合成减少、尿中排泄增加，并且部分肺炎患儿伴有消化道症状，VA 摄入及吸收减少，使VA 水平进一步降低形成恶性循环。因此，加强监测肺部感染患儿VA 水平，及时补充VA有利于疾病恢复。

T 细胞免疫是机体清除病原微生物及体内坏死细胞最有效的防御反应。根据淋巴细胞表面抗原分子类型，T 淋巴细胞主要分为 CD3+、CD4+、CD8+T 细胞，CD4+T 细胞能够通过分泌 IL-2 活化 Th1、Th2、CTL 及NK，同时在B 细胞的增殖活化、辅助体液免疫应答中起重要作用［16］。CD8+T 细胞可以高效、特异性地杀伤病原体的细胞。CD4+/CD8+是反映机体细胞免疫状态平衡的指标［17］。研究发现，VA能够增强T 细胞的增殖、分化、成熟，调节T 细胞亚群以及促炎和抗炎免疫之间的平衡，同时可诱导B 细胞表达，并调控由B淋巴细胞介导的免疫球蛋白产生，增强机体体液免疫［18］。肺部感染患儿CD4+T 细胞水平低于正常儿童，且VA 水平与CD4+T 细胞呈正相关，国内研究［19］也证明了这一观点。但本研究发现，肺部感染组CD3+T 细胞、CD3-CD19+B 细胞比例高于正常对照组，CD8+T细胞水平低于正常对照组，同时未发现VA 水平与CD3+T 细胞、CD8+T 细胞及CD4+/CD8+的相关性。这与部分平原地区研究结果不一致，但目前关于高海拔地区VA 水平与儿童免疫功能相关性的临床研究较少。以上结果差异可能与高海拔地区儿童生活环境有关，且本研究样本量较少，有待进一步扩大样本量或联合多中心共同调查验证。临床可通过测定免疫细胞水平评估患儿血清VA 水平，及时补充VA，提高儿童肺部感染的诊断率及治愈率。

综上所述，青海地区肺部感染患儿血清VA 水平降低，这可能是高海拔地区儿童肺部感染发生率高的影响因素之一。建议在临床中加强对肺部感染患儿血清VA、免疫细胞水平的监测，为肺部感染患儿的预防、诊断及治疗提供新的思路，提高治愈率。