感染丙型肝炎病毒患者血清自身抗体检测的临床意义

谢冰鑫

（大连市公共卫生临床中心（大连市第六人民医院），辽宁 大连 116031)

人体免疫系统受病毒侵袭后会对免疫应答功能产生影响，使之发生紊乱，生成免疫抗体，以至于发生免疫反应[1-3]。患者在感染丙型肝炎病毒（HCV）后，体内出现自身抗体，导致肝脏病理损伤加剧，无法达到良好的临床诊疗效果，甚至影响预后[4-6]。当前，我国医疗行业发展速度非常快，该免疫现象日渐受到关注，亟待提出解决方法，将患者肝功能损伤概率降到最低，为临床应用提供指导和借鉴。本研究旨在研究感染HCV患者血清自身抗体检测的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 试验对象即2018年1～12月到本院治疗的90例HCV感染患者，HCV携带者、丙型肝炎、肝硬化各30例。HCV携带者中，男18例，女12例，年龄22～74岁，平均年龄（48.21±2.34）岁；丙型肝炎者中，男、女各15例，年龄31～79岁，平均年龄（55.32±3.21）岁；肝硬化者中，男17例，女13例，年龄22～77岁，平均年龄（49.52±3.41）岁。42例健康体检者中，男20例，女22例，年龄21～75岁，平均年龄（48.12±3.05）岁。两组基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），可比较。所有病例均排除自身免疫性疾病，均未应用免疫制剂。

1.2 方法 ①间接免疫荧光法：在ANA检测基质内，抗原即HEP-2细胞、猴肝组织的冰冻切片；SMA检测基质中，抗原为大鼠胃组织冰冻切片。发挥生物薄片技术作用，组合含细胞、组织的切片，形成反应区，按1∶100比例稀释血清，依次与各组织细胞孵育30 min，再添荧光二抗，仍将孵育时间控制为30 min，清洗，甘油封片，放置在显微镜下观测。若内含特征性绿色荧光，滴度在1∶100及以上，显示阳性。如果ANA滴度≥1∶320，需进行肝谱分析。②免疫印迹法：借助该方法，对LKM-1、LC-1等肝抗原自身抗体进行检测。检测膜条上覆各类抗原，在室温下放置，添加缓冲液，以1.5 mL为宜，把振荡孵育时间控制为5 min，倒掉液体，添加1.5 mL血清，该血清稀释比例1∶100，振荡孵育30 min，清洗3遍，NBT/BCIP显色，对阳性结果加以判断。③酶联免疫法：AMA-M2经酶联免疫吸附法检测，将样本、加酶结合物温育时间均控制为30 min，清洗，添加底物，温育15 min，添加终止液，把终止反应时间控制在30 min内，比色，按照定量检测方法，将标准曲线绘制出来，阳性数据即AMA-M2＞20 IU/mL。

1.3 观察指标 检测生化指标：丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酸酰基转酞酶（γ-GT）、总胆红素（TBiL）均使用特种蛋白分析仪BN-Ⅱ对RF进行检测，该操作需在说明书指导下进行。

1.4 统计学处理 采用SPSS 23.0统计学软件对数据进行分析。计量资料采用（）表示，组间比较行t检验；计数资料采用[n（%）]表示，组间比较行χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV感染者自身抗体检测情况 HCV感染组和健康体检组总阳性数比较，差异有统计学意义（χ2=21.696，P=0.000）；丙肝携带者、丙型肝炎、丙肝肝硬化总阳性数均显著高于健康体检组（χ2=15.785、13.873、22.019；P=0.000）。自身抗体ANA、ASMA、AMA-M2、RF的阳性率分别为32.22%、8.89%、11.11%、5.56%。见表1。

表1 HCV感染者自身抗体检测情况[n（%）]

2.2 HCV感染者ANA荧光模式分析 ANA阳性患者29例，荧光模式主要有颗粒型、胞质型及其他核型，所占比例分别为62.07%、27.59%、17.24%。见表2。

表2 HCV感染者ANA荧光模式分析[n（%）]

2.3 HCV感染者抗核抗体滴度分布 29例ANA阳性滴度，1∶100、1∶1 320、1∶3 200占比分别为82.76%、31.03%、3.45%；健康体检组2例都为1∶100 ANA均质型。两组差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 HCV感染者抗核抗体滴度分布[n（%）]

2.4 自身抗体阴性组与自身抗体阳性组的肝功能检测结果指标对比 丙肝自身抗体阳性组与阴性组的ALT、AST对比，差异无统计学意义（P＞0.05），丙肝自身抗体阳性组与阴性组的TBIL、γ-GT对比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 自身抗体阴性组与自身抗体阳性组的肝功能检测结果指标对比

3 讨 论

丙型肝炎作为常见传染病，在全世界范围内传播[7-9]。调查显示，全球感染患者高达1.7亿，而仅我国就有超4 000万人感染该病[10-11]。现如今，丙型肝炎病毒的相关研究取得了突破性进展，HCV感染者体内存在自身抗体，对组织器官产生影响，发生功能紊乱、病理损伤，使丙型肝炎患者的病毒血症加剧[12-13]。早在20世纪80年代末，自身免疫性肝炎患者血清内便已检测出抗病性感染病毒，初步证实HCV感染与自身免疫相关[14-16]。经研究证实，HCV感染能够经分子模拟，使自身免疫反应性CD8+T细胞被激活，发生自身免疫现象[17-18]。本研究结果显示，健康体检组的抗ENA抗体、ANA、RF等自身抗体阳性检测率明显比HCV感染者检出率低，提示HCV感染对机体内自身免疫反应有促进作用，经诱导可产生自身抗体，但不能忽略其与自身免疫之间的关系，HCV感染患者血清内自身抗体的阳性率随着病情的加剧而增加[19-21]。ANA的荧光模型主要有颗粒型和胞质型，各占62.07%和27.59%，证实慢性肝炎衍变的同时，细胞质内分布自身免疫变化。HCV感染者抗核抗体滴度分布情况说明HCV感染很大程度上增加了自身免疫性肝病发生率。自身抗体阳性的慢性HCV感染者肝功能受损程度显著高于自身抗体阴性者，指示HCV感染者体内存在自身抗体，会诱发丙肝病变，对肝组织造成损伤[22-24]。一旦感染HCV，会存在多类自身抗体，随着丙型肝炎的发展及病程的延长，很容易触发自身免疫。在感染过程中，还会通过多类渠道损伤机体免疫系统，甚至对机体免疫耐受性产生破坏，加剧患者的肝损伤[25-27]。而且对比分析自身抗体阳性、阳性的HCV感染患者肝功能状况，自身抗体阳性组的TBIL、γ-GT水平高于自身抗体阴性组，表明HCV感染与自身免疫性肝病密切相关。HCV感染者血清中自身抗体形成，分析原因可能是丙肝病毒作用于干细胞而释放各种抗原，抗原诱发机体产生自身抗体，进一步损伤肝组织[28-29]。

综上所述，在感染HCV后会触发患者体内的自身免疫反应，对组织产生影响，使之损伤。采取科学的方式将自身抗体检测工作落实到位，以此为前提，给出科学有效的治疗方案，达到良好的应用效果。临床需针对合并自身免疫性肝病HCV感染患者实施个体化治疗。