HPLC同时测定和胃消痞丸中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和黄芩苷的含量

宋 青，郑 晖，黄锦燕

（淄博市食品药品检验研究院，山东 淄博 255086）

和胃消痞丸是在伤寒论名方“半夏泻心汤”的基础上加减而成，由红参、茯苓、黄连、黄芩、干姜、姜半夏、砂仁、炒六神曲、陈皮、枳实、白芍、厚朴、蒲公英、炙甘草、大枣15味药组成，具有消痞除胀，和胃止痛功效，用于慢性胃炎，胃及十二指肠溃疡，症见心下痞满，脘腹胀痛，呕恶不欲食，舌苔黄腻，脉弦滑之寒热虚实夹杂之证，现行标准中无含量测定项，难以全面控制本制剂的内在质量。

作者参考相关文献[1-11]，选择柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷作为陈皮、枳实、黄芩的指标成分，建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定和胃消痞丸中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和黄芩苷的含量。该方法专属性强，操作简便，结果准确，为更好控制药品质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20A系列高效液相色谱仪（日本SHIMADZU公司，包括DGU-20A 脱气机，SIL-20自动进样系统，SPD-20A紫外检测器，CTO-20A柱温箱，LCsolution色谱工作站）；Mettler Toledo MS205DU十万分之一电子天平（瑞士梅特勒公司）；恒温数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BWS-10恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）。

1.2 试药

和胃消痞丸（淄博市中医医院），批号：20210101，20210102，20210103：对照品：柚皮苷（批号 110722-201815，含量 91.7 %）、橙皮苷（批号 110721-202019，含量 95.3 %）、新橙皮苷（批号 111857-201804，含量 99.4 %）、黄芩苷（批号 110715-201821，含量 95.4 %），均由中国食品药品检定研究院提供。乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 混合对照品溶液的制备 精密称取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，并稀释，制成浓度分别为柚皮苷42.59 μg/ml、橙皮苷25.73 μg/ml、新橙皮苷39.60 μg/ml、黄芩苷39.57 μg/ml混合对照品溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，剪碎，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300 W，频率45 kHz）2 h，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺分别制备不含陈皮、枳实的阴性样品，不含黄芩的阴性样品，再按“2.1.2”项下的方法操作，分别制得阴性对照溶液。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：依利特 Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1 %磷酸溶液（12:88）；流速：1.0 ml/min；检测波长：283 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μl。

在上述色谱条件下，分别吸取上述混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图。结果供试品色谱中目标峰与其他组分分离效果良好，分离度均大于1.5，理论塔板数均不低于4000。色谱图见图 1。

图1 HPLC色谱图

2.3 线性关系考察

分别精密吸取“2.1.1”项下的混合对照品溶液各1，3，6，10，15，20，30 μl，依次注入液相色谱仪，按“2.2”项下的色谱条件进行测定。分别以对照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程。结果见表1。

表1 4个成分的线性关系

2.4 精密度

精密吸取“2.1.1”项下的混合对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱峰的峰面积，计算。结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷RSD分别为0.5 %，0.4 %，0.6 %，0.3 %；结果表明精密度良好。

2.5 供试品溶液稳定性

取同一份供试品溶液，分别在制备后0，4，8，12，16，20，24 h，按“2.2”项下的色谱条件进行测定，记录峰面积，计算。结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷RSD分别为0.8 %，0.6 %，0.5 %，0.6 %；表明供试品溶液在24 h内稳定，能够满足测定需要。

2.6 重复性

取同一批样品（批号为20210103），按“2.1.2”项下供试品溶液制备方法，平行制备6份；按“2.2”项下色谱条件测定，并计算各待测成分的含量。结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷的含量平均值分别为2.64，1.35，2.11，2.12 mg/g，RSD分别为0.7 %，1.0 %，0.8 %，0.3 %。结果表明方法重复性良好。

2.7 回收率

精密称取“2.6”项下已测知含量的样品（批号为20210103）0.5 g，共取6份，分别加入“2.1.1”的混合对照品溶液25 ml，精密加入甲醇25 ml，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2”项下色谱条件测定，计算。结果见表2。

表2 4个成分回收率试验结果（n=6）

2.8 样品测定

取3批样品，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，“2.2”项下色谱条件进行测定，外标法计算各成分的含量，结果见表3。

表3 和胃消痞丸中4个成分的含量测定结果/mg·g-1 （n=3）

3 讨论

3.1 流动相的选择

参考文献[12]，尝试了乙腈-0.1 %磷酸溶液、乙腈-0.2 %磷酸溶液、乙腈-0.3 %磷酸溶液及甲醇-0.5 %醋酸溶液等不同流动相组合，以乙腈-0.1 %磷酸溶液分离度最佳，峰形最好。

3.2 波长的选择

4个成分在283 nm处均有最大吸收或者接近最大吸收波长，故选择283 nm作为检测波长。

3.3 供试品溶液的制备方法的考察

对比超声与加热回流提取方式，随着超声时间的延长，测得结果与回流无显著性差异，且超声提取比回流提取方法简便快捷，并有利于样品分散，决定采用超声提取法。