提高蜂蜜中羟甲基糠醛检测精度的方法

黄丽芳，刘斯萍，杨丽娜，陈方定，易 伟，杨志怀

（1.井冈山市拾野山蜜发展有限公司，江西 吉安 343604；2.江西省江咨工程咨询有限公司，江西 南昌 330038；3.江西省养蜂研究所，江西 南昌 330045）

井冈山市拾野山蜜发展有限公司在生产中蜂成熟蜜时，对蜂场环境、养蜂生产、全自动分装的整个过程进行了高标准、严要求的监控。每年对生产的成熟蜜也进行全面检测，包括理化指标，微生物指标和十几种抗生素。在检测羟甲基糠醛含量的过程中发现，配制好的检测用溶液贮存时间的长短，对检测结果会有影响，为了确定影响的大小，找到规律和提高检测精度的方法，我们做了以下实验。

1 材料和方法

1.1 材料

实验用样品2 个，样品1 是2020 年8 月6 日本企业生产的拾野山蜜（中蜂成熟蜜）；样品2 是2019 年9 月8 日生产的拾野山蜜（中蜂成熟蜜）。

1.2 仪器设备和试剂

仪器设备：分光光度计（550 nm），水浴锅。

试剂：巴比妥酸，对甲苯胺，异丙醇，冰乙酸，无氧蒸馏水。

1.3 试验方法

一次性配制出可以检2 个样品共30 次的巴比妥酸溶液和对甲苯胺溶液。配制方法如下：

巴比妥酸溶液：称取500 mg 巴比妥酸于烧杯中，加70 mL 蒸馏水，置于热水浴上加热搅拌，使其溶解。冷却后移入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度。

对甲苯胺溶液：称取10.0 g 对甲苯胺，溶解于约50 mL 的异丙醇中，温热溶解后用异丙醇转移至100 mL 容量瓶中，加入10 mL 冰乙酸，冷却，再用异丙醇定容至刻度。溶液配制后贮存于暗处。

按以上方法再配2 次，将3 次配的溶液混合转移至300 mL 容量瓶中，贮存至暗处。

以上溶液配制完成后，马上按以下程序操作。

称取10 g 样品，溶于20 mL 无氧蒸馏水，并用无氧蒸馏水将样品溶液移入50 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。此样液为待测液，应立即进行下列测定。

分别吸取2.0 mL 样液于2 个试管中，并在每个试管中加入5.0 mL 对甲苯胺溶液，然后在一个试管中加入1 mL 无氧蒸馏水（作空白对照），另一个试管中加入1.0 mL 巴比妥酸溶液，两试管立即振摇混合，于分光光度计550 nm 波长下用1 cm 比色皿以空白为对照测定样品的吸光度，读取达到的最大吸光度。

结果计算：羟甲基糠醛（HMF)按下式计算：

X=A×19.2

式中：X—每100 g 样品中羟甲基糠醛的毫克数，mg/100 g；

A—吸光度。

按以上方法测出样品1 和样品2 的羟甲基糠醛含量后，做好记录，从这时起，每隔24 h测一次，直至测量结果误差越来越大为止。

2 结果与分析

表1 是溶液配制后贮存时间从0 至14 d，蜂蜜样品1 和蜂蜜样品2 的羟甲基糠醛检测结果。

表1 溶液配制后不同天数羟甲基糠醛检测结果

图1 是以对甲苯胺和巴比妥酸溶液配制后贮存时间为横坐标，以蜂蜜中羟甲基糠醛含量为纵坐标，形象地展示了随着贮存时间的延长，两个蜂蜜样品的羟甲基糠醛重复检验值的变化。

图1 溶液配制后不同天数羟甲基糠醛检测结果

从图1 可以看出，刚配好的溶液检测结果，一号样偏高，二号样偏低，而且误差很大。这也证明了检测标准“SN/T 0852-2000”要求对甲苯胺溶液配制后贮存于暗处24 h 后方能使用的原因。还可以看出从第3 天到第10 d，重复检验误差最少；10 d 后，测定的羟甲基糠醛值都有升高的趋势。

3 结论

根据这个实验结果，为提高蜂蜜中羟甲基糠醛检测精度，防止溶液配制后贮存时间的影响。我们规定：对甲苯胺溶液要配制后贮存于暗处48 h 后方能使用，贮存时间超过10 d 就必须废弃，不能再使用。