孕晚期妇女B族链球菌PCR检测结果分析及其对妊娠结局的影响

孙春涛，盛优静

B族链球菌(GBS)又称为无乳链球菌，为兼性厌氧革兰氏阳性球菌，主要寄居于人类阴道和直肠中[1-2]。20世纪60年代发现B族链球菌能使新生儿出现严重感染[3]，进而引起脑膜炎、败血症、肺炎等死亡率极高的疾病[4]。B族链球菌属于孕妇围产期危害性非常高的致病菌，也是孕产妇生殖道感染的致病菌[5]，一旦形成，会出现产褥感染、早产、泌尿道感染等。此外还和孕妇胎膜早破、新生儿肺炎、胎儿生长受限等有关[6-7]，近年来受到了广泛的关注[8]。本文探讨孕晚期妇女B族链球菌PCR检测结果，为孕晚期妇女B族链球菌的感染情况提供了数据支持；并降低围生期孕妇感染和减少新生儿发病风险，提高母婴预后质量，采取积极有效的防治措施提供了依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2016年6月-2019年3月于宁夏回族自治区妇幼保健院就诊的446例产检和分娩孕晚期妇女作为研究对象，年龄在19～37岁，平均为(27.22±1.35)岁，分娩经验：40例(8.97%)经产妇、406例(91.03%)初产妇。所有孕妇近期均未使用抗生素和性交。

1.2 方法

1.2.1 标本采集：两根无菌棉拭子置于孕产妇阴道下1/3的位置，旋转一圈，将分泌物取出；两根无菌棉拭子插入孕产妇肛门，在括约肌上采集直肠分泌物，将采集的标本进行细菌培养和PCR检测。

1.2.2 细菌培养：采集所有研究对象的生殖道标本行B族链球菌培养 ,使用安图公司 B族链球菌显色培养基进行筛查 ,对显色为紫色的菌落进行分离培养，然后将培养基置于5%的CO2培养箱中培养18～24 h,培养温度控制在35 ℃ ,完成上述培养操作后,对菌落 (圆形、表面光滑、有乳光、灰白色)用3%过氧化氢进行触酶试验,对触酶试验呈阳性者不作任何干预 ,对阴性者行CAMP试验，CAMP 试验阳性则判为B族链球菌筛查阳性。

1.2.3 实时荧光定量PCR检测：将采集到的样本置于PCR专用采集管内，24 h内实施检测操作。检测前将样本置于涡旋振荡器混匀，吸取样本1 000 μL加入离心管内14 000 r离心5 min，弃去上清液，在沉淀中加入1 mL灭菌清洗液，震荡重悬，再次离心5 min处理，弃去上清液，加入三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸50 μL，高速漩涡震荡，时间为5 min，在95 ℃环境下，加热2 min，冰浴5 min，离心1 min，取5 μL上清液加入PCR反应管中进行扩增[4]。

1.3 观察指标：观察446例产检和分娩孕晚期妇女B族链球菌-DNA检测结果和细菌培养基本情况，观察菌落颜色、形态，观察触酶试验、CAMP实验结果。

1.4 统计学方法：采用SPSS 19.0统计软件，采用χ2检验分析B族链球菌-DNA检查为阴性、阳性与细菌培养结果之间的差异，以及对妊娠结局的影响，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 446例产检和分娩孕晚期妇女B族链球菌-DNA检查和细菌培养情况：446例产检和分娩孕晚期妇女经过B族链球菌细菌培养后，阳性标本为17例(3.81%)，阴性标本为429例(96.19%)，经B族链球菌-DNA检查，阳性标本为39例，其中2例为假阳性，阴性标本为407例,以PCR法联合细菌培养法为金标准，细菌培养法检测灵敏度45.95%，特异性100%；PCR法检测灵敏度100%，特异性为99.51%。

2.2 两种方法检测结果：两种方法检测阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 446例孕晚期妇女B族链球菌-DNA检查和细菌培养情况[n(%)]

2.3 分娩晚期妇女B族链球菌-DNA检查结果与妊娠结局的关系：B族链球菌检查结果对妊娠结局产生影响(P<0.05)，B族链球菌阳性的妊娠期妇女更容易发生早产、宫内感染及产后出血，见表2。

表2 B族链球菌-DNA检测对妊娠结局影响情况[n(%)]

3 讨论

随着医疗水平的不断提升，针对B族链球菌的检测越来越受到重视，本研究选用的检测方法为细菌培养和PCR。比较这两种检测方法发现，B族链球菌-DNA阳性检出率明显高于细菌培养阳性检出率，与黄永建[9]等的研究结果一致。在实施细菌培养检测时会出现漏检，在接种培养皿时受到环境、保存条件等影响，部分B族链球菌会出现死亡，从而影响检出率；而实施荧光PCR检测时，对于死亡的B族链球菌也能检测到，因此，针对孕晚期妇女B族链球菌检测时，PCR检测方案的应用价值极高，值得优先选用[10]。在本研究中，B族链球菌阳性孕产妇发生宫内感染、早产及产后出血的发生率明显高于阴性孕产妇。同时，GBS对胎膜及绒毛具有较强的穿透力，造成胎膜早破及胎盘绒毛感染，从而造成胎儿宫内感染及新生儿早发性疾病。阳性孕妇宫内感染率的显著增加使早产和产后出血的发生率也明显高于阴性孕妇。近年来，国内也逐渐注重GBS的筛查及治疗，对于GBS感染阳性患者，国内目前主要通过使用抗生素来进行治疗，预防新生儿感染的发生。但是，在临床中仍有一部分患者未定期产检及筛查GBS，这主要是由于国内围产保健相关知识未得到普遍宣教及落实。因此积极开展孕晚期GBS筛查，对GBS定植者采取积极、规范的抗生素治疗方案可减少GBS定植导致的不良妊娠结局，减少新生儿GBS的感染率。B族链球菌PCR检测拥有较高特异性、敏感度，因此PCR检测可应用于检测妊娠晚期孕妇B族链球菌的感染。