伦敦沙门菌的流行与耐药性分析

付莎莎，孙先谱，孙 凡，徐正中，2，焦新安，2，陈 祥，2

沙门菌是全球范围内影响最广的人兽共患病原菌之一，广泛分布于人类、动物、食品和环境中，通过食物链、环境等多种途径传递，危害人类健康[1]。据报道，全球每年大约有9 400万肠胃炎患者，其中因沙门菌而死亡的有15.5万人[2-3]。现已报道2 610种不同血清型的沙门菌[4]，伦敦沙门菌最先报道于20世纪40年代[5]，为E1群沙门菌，它是除鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌外引起肠道感染的常见血清型之一[6]。1980年匈牙利报道了伦敦沙门菌通过生肉和肉类制品进行传播，这些菌株表现为多重耐药，而在1976-1978年间收集的伦敦沙门菌为敏感菌株[7]。2000年，韩国报道了一起由伦敦沙门菌污染婴儿配方奶粉引起的肠胃炎暴发，导致了31名婴幼儿病例。近年来，国内外报道了多起由伦敦沙门菌引起的食源性疾病[8-10]，沙门菌食物中毒血清型变迁趋势不容忽视。邹志云等从220名健康食品从业人员中分离出17株伦敦沙门菌，耐药率和多重耐药率均在80%以上[11]。Yang等从218株沙门菌中鉴定出20株伦敦沙门菌，其中12株(60%)表现出耐药性，10株(50%)表现为多重耐药[12]。

本研究通过聚合酶链式反应(PCR)、生化与血清型鉴定，从不同宿主来源样品中分离到135株伦敦沙门菌，通过测定伦敦沙门菌对18种抗菌药物的最小抑菌浓度，分析其总体耐药性和多重耐药情况。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 2016-2018年共分离135株伦敦沙门菌，采集自江苏、新疆、河南、上海、山东5个省(市、区)，分别从猪(120株)、人(13株)、犬(1株)、鸡(1株)样品中获得。依据生化实验和肠毒素stn检测[13-16]，判断分离株是否为沙门菌。使用商品化抗血清(中国宁波天润生物制药有限公司、丹麦SSI)对每个菌株进行血清型鉴定[17]。参照国家标准(GB/T 4789.4-2016)方法及考夫曼怀特表对沙门菌进行血清型分型[18]。

1.2 抗菌药物敏感性实验 采用琼脂稀释法，测定135株伦敦沙门菌对18种抗菌药物的敏感性：磷霉素(FOS)，氨苄西林(AMP)，呋喃妥因(NIT)，头孢唑啉(CFZ)，环丙沙星(CIP)，头孢噻肟(CTX)，氟苯尼考(FFC)，阿米卡星(AMK)，四环素(TET)，氨曲南(ATM)，庆大霉素(GEN)，氯霉素(CHL)，美罗培南(MEM)，链霉素(STR)，喹乙醇(OLA)，多粘菌素E(CL)，萘啶酸(NAL)，复方新诺明(SXT)。大肠杆菌ATCC 25922作为质控菌。

1.3 数据分析 除链霉素参考国家抗菌药物耐药性监测系统(NARMS)、多粘菌素E参考欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST)外，其余参照美国临床标准委员会(CLSI)的药敏标准[19]。

使用SPSS 25.0统计软件，采用卡方检验比较不同宿主来源和不同环节菌株对抗生素耐药率之间的差异。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 菌株的分离与鉴定 135株伦敦沙门菌采集自江苏(14株)、新疆(4株)、河南(76株)、上海(40株)、山东(1株)5个省(市、区)。其中，来源猪的菌株有120株，分离自养殖环节(40株)、屠宰环节(76株)的猪粪便样品和市场环节的猪龙骨(1株)、猪排(1株)、猪皮(1株)、猪肉馅(1株)；人源菌株有13株，来自体检人员的粪便样品；来源犬和鸡的菌株各有1株，分别来自宠物犬的粪便和市场环节的鸡翅。见图1。所分离菌株的样品来自于外观健康个体。

JS：Jiangsu; SH：Shanghai; XJ：Xinjiang; SD：Shandong; HN：Henan图1 菌株的地理分布和宿主来源Fig.1 Geographical distribution and host source of isolates

135株菌株经琼脂糖凝胶电泳检测，PCR产物片段大小均为260 bp。参照API 20 说明书进行细菌生化鉴定，结果判读表及食品数据库显示135株菌株均为沙门菌。使用沙门菌属诊断血清试剂盒进行血清型鉴定，分离株与O10因子、一相鞭毛H∶V和二相鞭毛H∶6发生凝集反应[20]。成功分离、鉴定出135株伦敦沙门菌。

2.2 伦敦沙门菌总体耐药性分析 18种抗菌药物敏感性实验表明，135株伦敦沙门菌至少对1种抗生素表现耐药。其中，分离株对四环素(95.6%)耐药率最高，其次是链霉素(93.3%)、氨苄西林(87.4%)，菌株对氯霉素(68.9%)、复方新诺明(68.9%)和氟苯尼考(63.7%)处于中等耐药水平，都在50%以上。氨曲南(8.9%)和头孢噻肟(11.1%)抑菌效果较好，耐药率在10%左右。伦敦沙门菌对阿米卡星、多粘菌素、呋喃妥因和美罗培南敏感，没有检测到耐药菌株。见表1。

对于不同宿主来源的135株伦敦沙门菌，有129株伦敦沙门菌表现为多重耐药，多重耐药率达到95.6%。在120株猪源沙门菌中，有114株表现为多重耐药，主要集中在4耐(20.0%，24/120)和9耐(26.7%，32/120)。其他来源的菌株多重耐药率均为100%。

2.4 伦敦沙门菌在4个环节中的耐药性及多重耐药性分析 134株伦敦沙门菌分别从养殖环节(40株)、屠宰环节(76株)、市场环节(5株)和人的体检样品(13株)中分离出来(犬来源菌株不计入4个环节)。4个环节的伦敦沙门菌均对氨苄西林、四环素、链霉素、氯霉素和复方新诺明等具有较高的耐药性，对阿米卡星、美罗培南、呋喃妥因和多粘菌素的耐药率均为零，抑菌效果很好。养殖环节分离的菌株对于环丙沙星和萘啶酸的耐药率较低，分别为2.5%和17.5%，人体检样品分离株的耐药率高于60%。市场环节菌株对氨曲南、头孢唑啉和头孢噻肟的耐药率均为零，体外抑菌效果较好。人体检样品分离菌株的耐药率达到30%～40%，耐药现状较为严重。不同环节的菌株对于大多数抗生素耐药率差别较大，如庆大霉素(χ2=120.994,P<0.01)、氟苯尼考(χ2=36.757,P<0.01)，菌株在养殖环节耐药率最高，其次是屠宰环节，人的体检样品相对较低。

其中养殖环节多重耐药菌株最多，主要集中在9耐(75%)。屠宰环节93.4%的菌株为多重耐药菌株，主要集中在4耐、5耐和6耐；市场环节的菌株只有5株，但有4株表现为多重耐药，主要集中在5耐和6耐；从人的体检样品分离出的菌株多重耐药率达到100%，多重耐药现象严重。

2.5 伦敦沙门菌主要多重耐药表型分析 伦敦沙门菌多重耐药严重，95.6%菌株表现为多重耐药，且多重耐药谱十分广泛，本研究一共鉴定出38种多重耐药表型(表2)。其中29株(21.5%)多重耐药表型为AMP-CHL-FFC-FOS-GEN-OLA-STR-SXT-TET，为最常见多重耐药谱，有22株(16.3%)表现为AMP-STR-SXT-TET。

表2 135株伦敦沙门菌多重耐药表型Tab.2 Multidrug resistance phenotype of 135 Salmonella London strains

此外，有3种耐药表型同时在猪源菌株与人源菌株中发现，分别为：AMP-CHL-STR-SXT-TET、AMP-CHL-FFC-STR-SXT-TET、AMP-CFZ-CHL-CIP-FFC-NAL-STR-SXT-TET。鸡源菌株只有1种耐药表型AMP-CHL-CIP-NAL-TET，且同时在猪源菌株中被发现。

3 讨 论

在全球范围内，沙门菌是引发食源性疾病的首要致病菌[21]。鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是公认的引起食源性疾病的优势血清型，但近年来伦敦沙门菌作为仅次于鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的常见血清型[22-24]，数量不断增多[25]。因此，及时对伦敦沙门菌的耐药和流行情况进行检测和监测，将对食品安全与公共卫生具有重要意义。

本研究从健康宿主中成功分离、鉴定出135株不同宿主来源的伦敦沙门菌。其中，近90%菌株来源于猪，与现有报道相一致[12,26-28]。此结果表明伦敦沙门菌已成为人类健康的潜在威胁，人类很容易因误食污染的猪肉制品而感染伦敦沙门菌。除此之外，伦敦沙门菌的常见宿主还有14岁以下的儿童[24,29]、食品从业人员[11]、动物源性食品[30-31]等。上述文献显示伦敦沙门菌主要通过污染肉制品、动物内脏、水产品等进行传播，进入人体后主要定居在肠道中，其释放的毒素可引发人体出现恶心、腹泻、发热、头痛等症状。

总体耐药性分析显示，伦敦沙门菌普遍对氨苄西林(87.4%)、链霉素(93.3%)、四环素(95.6%)和复方新诺明(68.9%)耐药率高，对头孢噻肟(11.1%)耐药率较低，与江苏省无锡市[11]、贵州省[32]的报道相一致。但与其不同的是，在无锡市和贵州省的研究中伦敦沙门菌对萘啶酸均敏感，但在本研究中出现耐药性(28.9%)。

同时，伦敦沙门菌的多重耐药率较高，对于不同宿主来源及不同环节多重耐药率均达到90%以上，相应的多重耐药谱较多。

不同环节分离的伦敦沙门菌中，养殖环节的耐药率最高。人体检样品中的所有菌株均为多重耐药菌，这可能是由于人类位于食物链的顶端，通过食物链、亲密接触等将耐药性传播给人类，这与韩国江原道发现的因农场动物感染伦敦沙门菌致最后感染婴儿的研究报道一致[8]。

总之，耐药性伦敦沙门菌的暴发流行及耐药谱的扩展成为公共健康的潜在威胁，对伦敦沙门菌的耐药性进行监测，为沙门菌的防治提供科学指导。