预充式导管冲洗器中添加剂在氯化钠注射液中的迁移研究*

李永贵，张锡霞，赵琦，胡瑞瑞，王晶，尹弢△，毋立华

(1.山东省药学科学院 山东省化学药物重点实验室，济南 250101；2.山东省荣军总医院，山东 济南 250000；3.山东省食品药品审评查验中心，济南 250014)

1 引 言

预充式导管冲洗器是一种新型封管液，内充0.9%的氯化钠注射液，临床上可代替传统的生理盐水、肝素稀释液等封管液使用，操作简单、安全高效，在临床上得到广泛应用[1-2]。它由聚丙烯套筒、推杆、盖帽及溴化丁基胶塞等组成。聚丙烯材料具有很好的灭菌适应性、透明度、药物适应性以及较强的阻隔性能，已广泛应用于药品包装。由于其在成型、储存和使用过程中，会因热、光、电场、射线、金属离子或化学介质等作用而老化，因此，生产过程中加入适量的添加剂(如抗氧剂、抗酸剂等)，以提高其稳定性。常用的抗氧剂有抗氧剂1010( 四(3，5—二叔丁基—4—羟基)苯丙酸季戊四醇酯)、抗氧剂168(三(2，4—二叔丁基)亚磷酸苯酯)等，抗酸剂为水滑石(水合铝酸碳酸镁)。溴化丁基胶塞主要由陶土、镁强粉、白炭黑及添加剂抗氧剂BHT(2，6—二叔丁基对甲酚)等经过硫化处理制备而成[3-6]。

聚丙烯配件与溴化丁基胶塞均属于与药品直接接触的材料，在接触过程中，其添加剂均有迁移到药品中的风险，从而导致药品不良反应及临床使用风险的增加。《化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则》中明确要求，需要对与药品直接接触的包装材料中的添加剂进行控制。欧洲药典也对聚丙烯材料中抗氧剂及水滑石用量作了要求，其中，抗氧剂用量不超过0.3%，水滑石用量不超过0.5%，相当于铝元素不超过0.04%，镁元素不超过0.12%。游离硫含量是评价溴化丁基胶塞配方与硫化程度的重要指标，《国家药包材标准》“挥发性硫化物测定法”(YBB00302004-2015)及国内外相关文献也有检测方法报道[7-10]。本研究在相关研究基础上建立了HPLC法检测预充式导管冲洗器中抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT和硫，以及ICP-MS法检测铝、镁元素的迁移量。通过检测加速试验样品中上述添加剂的迁移量，对预充式导管冲洗器安全性进行评估，为其临床使用安全提供数据支持。

2 仪器及试药

液相色谱仪(日本岛津公司，配LC-20AT泵、SPD-M20A型PDA检测器)；ICP-MS(PE公司NEXION2000)；电子天平(Sartorius BT125D)；超纯水机(上海杲森仪器设备有限公司)；甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司)；乙腈(色谱纯，天津赛孚瑞科技有限公司)；四氢呋喃(色谱纯，天津市光复科技发展有限公司)；硝酸(CMOS级,国药集团)；固相萃取小柱(规格：60 mg/3 mL , Agela Technologies PEP-SPE )；预充式导管冲洗器(规格：10 mL)。

对照品：抗氧剂1010(纯度：100%，AccuStandard，Lot：5692-01)；抗氧剂168(纯度：100%，AccuStandard，Lot：5690-01)；抗氧剂BHT(纯度：99.5%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，Lot：119389)；硫(纯度：99.0%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，Lot：106536)；铝单元素标准物质(1 000 μg/mL，国家有色金属及电子材料分析测试中心)；镁元素标准物质(1 000 μg/mL，国家有色金属及电子材料分析测试中心)；Ge、In、Re、Sc多元素内标溶液(100 μg/mL，国家有色金属及电子材料分析测试中心)。

3 方法与结果

3.1 抗氧剂及硫检测方法验证[11-13]

3.1.1色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm×150 mm，5 μm， Inertsil ODS -3)， 以甲醇为流动相，检测波长为280 nm，柱温35℃，流速1.0 mL/min，进样体积20 μL，抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫分离度大于1.5。

3.1.2溶液制备 配样溶剂：四氢呋喃：乙腈为50：50。

对照品储备液：精密称取抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫适量用乙腈溶解并稀释成每1 mL中含有100.55 μg抗氧剂1010、100.05 μg抗氧剂168、 99.80 μg抗氧剂BHT及49.75 μg硫的混合溶液。

混合对照溶液：精密量取对照品储备液2 mL置10 mL量瓶中，乙腈稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液：取预充式导管冲洗器中氯化钠注射液10 mL，以2～3 mL/min速度通过固相萃取小柱，依次用5 mL甲醇、3 mL四氢呋喃洗脱，收集洗脱液用配样溶剂稀释至刻度，摇匀。

3.1.3专属性实验 分别取3.1.2项下配样溶剂、混合对照品溶液、供试品溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。结果表明，在该条件下，配样溶剂对检测无干扰，抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫分离度良好，见图1。

图1 对照品溶液HPLC图谱

3.1.4定量限与检测限 量取3.1.2项下对照品溶液，加乙腈稀释成不同浓度梯度的溶液，分别取20 μL注入液相色谱仪，测得抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫定量限分别为10.06、20.01、3.99、4.97 ng(S/N≈10)，检测限分别为3.02、6.00、1.20、1.49 ng(S/N≈3)。

3.1.5线性实验 精密量取对照品储备液20、50 μL及0.1、0.5、1、2、3、4 mL，分别置10 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液1—8。精密量取上述溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标做线性回归，结果见表1。

表1 线性关系测定结果

3.1.6精密度实验 精密量取混合对照溶液20 μL，连续进样6次，记录色谱图及峰面积，计算抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫峰面积的RSD分别为0.47%、0.54%、0.19%、1.02%。

3.1.7溶液稳定性实验 精密量取混合对照溶液分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样20 μL，记录色谱图及峰面积，计算抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫峰面积的RSD分别为1.10%、0.89%、1.06%、1.21%，表明对照品溶液室温放置24 h稳定。

3.1.8回收率实验 精密量取0.9%NaCl注射液10 mL，共6份，分别加入对照品储备液0.5 mL，混匀，均以2～3 mL/min的流速通过固相萃取柱，用5 mL甲醇及3 mL四氢呋喃依次洗脱，并收集洗脱液，用乙腈：四氢呋喃(50∶50)溶液稀释至10 mL，摇匀。分别取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，按外标法计算抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT、硫的平均回收率及RSD，结果见表2。

表2 回收率试验结果

3.2 铝、镁检测方法验证[8-15]

3.2.1检测条件 采用KED模式，射频功率：1 600 W，等离子体气流量：15 L/min，载气流量：0.98 L/min，辅助气流量：1.2 L/min，氦气流量：4.5 L/min，采样锥/截取锥：镍锥，数据采集次数：3次。

3.2.2溶液制备 内标溶液：精密量取Ge、In、Re、Sc多元素内标溶液20 uL置100 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，配成20 μg/L的溶液。

供试品溶液：精密量取本品2 mL置10 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀。

标准曲线溶液：分别量取镁(1 000 μg/mL)单元素标准溶液、铝(1 000 μg/mL)单元素标准溶液各100 μL置100 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀。作为对照品储备液。分别量取对照品储备液0、0.5、1、2、5、10 mL置100 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀作为标准曲线溶液。并用2%硝酸水溶液作为空白。

3.2.3定量限与检测限 取空白溶液连续测定11次，记录信号比值(CPS)，计算11次信号的SD值，根据公式检测限=3×SD/K；定量限=10×SD/K分别计算铝元素、镁元素的定量限分别为0.0170 、0.0223 μg/L，检测限分别为0.0051、0.0067 μg/L。

3.2.4线性实验 取标准曲线溶液，按照浓度顺序依次进样，分别以铝、镁元素的响应值与内标溶液响应值比值(CPS)为纵坐标，浓度C为横坐标，做线性回归，结果见表3。

表3 线性关系测定结果

3.2.5精密度实验 取线性溶液5连续测定6次，记录其信号比值CPS，计算RSD ，结果铝、镁元素的RSD分别为1.60%、1.49%。

3.2.6回收率实验 取氯化钠注射液2 mL置10 mL量瓶中，平行6份。分别加入铝、镁元素各0.5 μg用2%硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，作为回收率样品，按照3.2.1项下检测条件检测，计算铝、镁元素的平均回收率及RSD，结果见表4。

表4 回收率试验结果

3.3 样品检测

取装有氯化钠注射液的预充式导管冲洗器三批，置加速条件下(温度40℃±2℃，RH25%±5%)考察6个月，分别在0、3、6月取样，检查抗氧剂、硫及铝、镁元素含量，结果见表5。

表5 迁移试验结果

4 结论

本研究方法可以有效地分离抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT，同时对硫也有很好的分离度。加速试验6个月结果表明，三批样品均未检测出抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫，按照检测限计算抗氧剂1010、抗氧剂168、抗氧剂BHT及硫的检出量分别为1.5、3.0、0.6、0.75μg/支，远低于欧洲药典要求聚丙烯材料中抗氧剂检出量限度；铝元素、镁元素加速6月检出最大量分别为0.032、2.137 μg/支，均远低于欧洲药典限度要求。初步研究结果表明，预充式导管冲洗器中抗氧剂、硫及铝、镁元素向氯化钠注射液中的迁移量不影响药品的质量。