子宫内膜异位症患者异位病灶组织FoxM、CDK表达观察

李佩，穆丹，陈利平

监利市人民医院妇产科，湖北监利433300

子宫内膜异位症（EMs）指子宫内膜组织在子宫体之外部位生长，是妇科常见良性疾病，在育龄期女性中发病率为10%~15%，且呈逐年上升趋势［1-2］，可引发月经紊乱、痛经、盆腔痛、难治性不孕等，严重影响患者身心健康及生活质量［3］。既往研究显示，EMs虽然属于良性病变，但具备局部种植、浸润性生长、远处转移等类似恶性肿瘤的特点，其发病与遗传、内分泌、免疫、炎症等因素有关，但其确切发病机制尚不明确［4-5］，探讨其发生机制是当前研究热点课题。叉头框转录因子M1（FoxM1）在细胞增殖、迁移及血管生成等过程中发挥关键调控作用；细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）是关键细胞周期相关蛋白，可诱导细胞增殖过程；两者均与恶性肿瘤细胞增殖过程关系密切［6-8］，而EMs发生机制与恶性肿瘤存在相似之处，推测FoxM1、CDK6可能参与EMs的病理过程，既往研究中鲜有FoxM1、CDK6与EMs关系的探讨。我们观察了EMs患者异位病灶组织FoxM1、CDK6表达的变化，分析了EMs异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达之间的关系及与患者病理分期、临床分型的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2019年2月—2021年1月在监利市人民医院妇产科就诊的EMs患者105例（观察组），年龄23~46（32.78±6.19）岁，体质量指数（BMI）为（23.27±2.56）kg/m2，月经周期（30.18±3.19）d，月经持续时间（5.51±0.95）d。纳入标准：术后病理学结果证实为EMs；6个月内无激素类药物使用史；月经规律；临床资料完整。排除标准：合并内分泌疾病、免疫性疾病、其他严重器质性病变、恶性肿瘤者；妊娠及哺乳期女性。依据《子宫内膜异位症的诊治指南》中的分期标准［9］可分为：Ⅰ期11例，Ⅱ期27例，Ⅲ期58例，Ⅳ期9例；依据EMs病理分型可分为：卵巢型86例，深部浸润型19例。另外选取同期行子宫切除手术的105例子宫肌瘤患者为对照组，年龄23~46（33.73±6.52）岁，BMI（23.41±2.51）kg/m2，月经周期（30.26±3.24）d，月经持续时间（5.32±1.07）d。两组基线资料比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。本研究经医院伦理委员会批准（LD2018-113），研究对象均签署知情同意书。

1.2 组织中FoxM1、CDK6检测术中分别收集观察组异位病灶组织及对照组健康子宫内膜组织，用生理盐水冲洗，纱布蘸干，10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm连续切片，然后采用免疫组织化学染色法检测组织中FoxM1、CDK6。由经验丰富的两名病理科医师采用双盲法对染色结果进行独立评价。随机在每张切片上选取6个视野，每个视野计数100个细胞，以出现棕黄色或深棕色颗粒判定为阳性细胞，FoxM1定位于细胞质及细胞核，CDK6定位于细胞质及细胞膜，根据阳性细胞比例以及染色程度进行评分。阳性细胞比例评分：5%以下判为0分，5%~25%判为1分，26%~50%判为2分，51%~75%判为3分，75%以上判为4分；阳性细胞染色程度评分：未着色判为0分，棕黄色判为1分，深棕色判为2分。两项评分相乘得到总分，0~3分判为阴性表达，4分及以上判为阳性表达［10］。

1.3 统计学方法采用SPSS25.0统计软件。计量资料以xˉ±s表示，比较采用t检验；计数资料以例或百分率表示，比较采用χ2检验或Fisher's精确检验。采用Spearman分析EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达相关性。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组组织中FoxM1、CDK6表达比较观察组FoxM1、CDK6阳性分别为7、11例，对照组分别为34、37例，与对照组相比，观察组异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率高（χ2值分别为22.094、18.256，P均＜0.01）。观察组异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达见图1、图2。

图1 观察组异位病灶组织中FoxM1表达（免疫组织化学染色，400×）

图2 观察组异位病灶组织中CDK6表达（免疫组织化学染色，400×）

2.2 EMs异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达与患者临床分期、病理分型的关系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期EMs患者异位病灶组织中FoxM1阳性分别为2（18.18%）、6（22.22%）、19（32.76%）、7例（77.78%），CDK6阳 性 分 别 为2（18.18%）、7（25.93%）、21（36.21%）、7例（77.78%），不同分期EMs患者异位病灶组织中FoxM1阳性表达率相比，χ2=9.658，P=0.017；CDK6阳 性 表 达 率 相 比，χ2=8.806，P=0.028。卵巢型、深部浸润型患者异位病灶组织中FoxM1阳性分别为23（26.74%）、11例（57.89%），CDK6阳性分别为24（27.91%）、13例（68.42%），不同分型EMs患者异位病灶组织中FoxM1阳性表达率相比，χ2=6.897，P=0.000；CDK6阳性表达率相比，χ2=11.193，P=0.001。

2.3 EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达相关性EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达呈正相关（r=0.512，P=0.000）。

3 讨论

EMs依据异位病灶部位可分为卵巢型、深部浸润型、腹膜型等，其中卵巢最易被侵犯，是EMs最为典型的分型，深部浸润型指病灶浸润深度在5 mm及以上的特殊类型，可累及盆腔［11］。部分EMs患者无典型临床症状，加之目前缺乏有效的特异性生物标志物，故临床诊断需依靠腹腔镜检查，EMs患者手术治疗费用高昂且术后存在复发风险。目前尚无确切有效的根治方法，以上因素导致EMs的诊疗极具临床挑战性，探究EMs的发生机制显得尤为关键［12-13］。

细胞周期包括DNA合成前期的G1期、DNA合成期的S期、DNA合成后期的G2期，有丝分裂期的M期，细胞过度增殖是肿瘤的主要发生原因之一，其分子机制为细胞周期调控失常，异位的子宫内膜能够在宫腔外种植、转移，依赖于细胞增殖能力的增强［14-15］。在衰老及正常终末分化组织中FoxM1呈低表达或不表达，在多种恶性肿瘤中FoxM1呈高表达，参与肿瘤的侵袭、转移，是近年来恶性肿瘤领域的热点研究分子［16-17］。研究发现，FoxM1在细胞有丝分裂过程中发挥重要作用，其异常表达可引起纺锤体缺陷，进而使有丝分裂过程延迟，最终参与宫颈癌细胞增殖过程［18］。CDK6是G1期重要调控因子，可促进细胞周期从G1期向S期转变，其基因定位于人染色体7q21［19］。研究发现，CDK6与子宫内膜相关疾病密切相关；子宫内膜癌病灶组织中CDK6表达较子宫肌瘤病灶组织高，CDK6可通过影响肿瘤细胞增殖过程参与子宫内膜癌的病情演变［20-21］。本研究发现，与对照组相比，观察组异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率较高，且不同分期、分型EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率存在差异，提示FoxM1、CDK6参与EMs的发生、发展，随着EMs患者病情加重，FoxM1、CDK6表达升高，分析原因是，高表达的FoxM1可破坏细胞骨架结构完整性，促进子宫内膜细胞发生迁移、浸润，进而增强异位子宫内膜的增殖能力，使得子宫内膜细胞能够在肌层种植及增殖，最终导致EMs的发生［22］；CDK6可能通过影响细胞增殖过程参与EMs的发生及演变。新近研究显示，CDK6能够稳定并激活FoxM1，进而维持G1~S期基因的正常表达，使活性氧维持低水平，从而对细胞衰老发挥抑制作用［23］。本研究发现，EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达呈正相关，提示FoxM1、CDK6可能共同损伤子宫内膜基底层的防御功能，促使子宫内膜细胞侵袭肌层，导致EMs发生，并参与病情的发生发展。

综上所述，FoxM1、CDK6在EMs患者异位病灶组织中阳性表达率较高，两者共同参与EMs的发生及病情演变，且具正相关关系，可能为EMs的临床诊治工作提供一定参考依据。本研究也存在一定局限性，未对FoxM1、CDK6影响EMs患者病情的具体机制进行深入探究，且为小样本研究，可能存在一定结果偏差，有待进一步研究工作的开展。