HPLC法测定野菜马兰中青蒿素含量

石雪萍，余 芳，胡紫琼

(江苏经贸职业技术学院 健康学院，江苏 南京 211168)

青蒿素(Artemisinin)是从复合花序植物黄花蒿叶中提取得到的一种无色针状晶体。青蒿素是继乙氨嘧啶、氯喹、伯氨喹之后最有效的抗疟特效药，世界卫生组织称之为“世界上唯一有效的疟疾治疗药物”。青蒿素主要用于治疗疟疾，除此以外，许多文献还报道其具有抗炎、抗脓毒症、抗肿瘤、放疗增敏、抗菌增敏、抗组织纤维化以及治疗其他寄生虫病等作用。青蒿素的测定有碘量法、薄层扫描等方法。

马兰，菊科马兰属植物，又称马兰头、鸡儿肠、马菜、田边菊等。马兰属于野生生长的植物，在田野、路边、山坡上都有分布。现如今人工栽培的马兰在市场上普遍可见，其营养成分与野生马兰会有些许差别。但不管是野生的还是种植的马兰，经常食用都会有一定的保健作用。

马兰与青蒿同属菊科植物，预实验表明马兰含有青蒿素的成分。本研究采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC)测定马兰中青蒿素的含量，并检验该方法的准确度。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1 材料

青蒿素对照品(南京森贝咖生物科技有限公司，纯度≥98%)，甲醇(色谱纯)，0.2%NaOH，乙醇，石油醚(30～60 ℃)，蒸馏水。

1.1.2 仪器设备

电子不锈钢水浴锅：郑州市亚荣仪器有限公司；电子天平：上海精密科学仪器有限公司；安捷伦1200高效液相色谱仪：美国安捷伦科技有限公司；SZF-06A粗脂肪测定仪(索氏抽提器)：上海洪纪仪器有限公司。

其他：定性滤纸(15 cm×8 cm),脱脂棉,容量瓶(50、100、250 mL),移液管(1、2、5、10 mL),洗耳球,洗瓶,烧杯,100 mL量筒,离心管。

1.2 实验方法

1.2.1 索氏提取法提取马兰中的青蒿素

取一张大小适宜的长方形定性滤纸，将其卷成直径约2 cm的圆筒，将滤纸筒的一端折到筒中，制成圆筒的底部，取少许脱脂棉放入筒内，用脱脂棉细线扎起来。

将马兰试样用粉碎机粉碎(不用太碎)，称取2.0 g于滤纸筒内，在马兰试样上放上一层脱脂棉，并将滤纸筒的顶端纸边折入筒内，使整个滤纸筒高约4 cm。

搭好索氏提取器，水管是下进上出。将滤纸筒装入索氏提取器，连接用无水乙醇洗涤过并烘干的平底烧，安装冷凝器，装好后在其上口放一漏斗，将100 mL石油醚经过漏斗转移到抽提器中。在(50±1) ℃的水浴锅中恒温加热，经过8次回流虹吸，提取时间为2 h，停止加热。取下冷凝器，将平底烧瓶内的提取液转移至100 mL容量瓶并用石油醚定容，再转移至100 mL试剂瓶中，贴上标签。

1.2.2 HPLC法测定马兰中青蒿素的含量

1.2.2.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(75∶25)；检测波长：260 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL；柱温：35 ℃。

1.2.2.2 系统适用性试验

取马兰供试品溶液，以转速13000 r·min-1离心3 min，按上述1.2.2.1色谱条件进样分析，记录色谱图。理论板数以青蒿素峰计算不应高于4500，色谱峰对称因子均在0.95～1.05，青蒿素峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。

1.2.2.3 标准曲线的绘制

将0.1 mg·mL-1的青蒿素对照品溶液通过0.45 μL的膜过滤至进样瓶，放入仪器，分别以5、10、15、20 μL 的进样量进样。根据所测得的色谱峰，记录色谱峰的出峰时间和峰面积。青蒿素对照品色谱图见图1。

图1 青蒿素对照品色谱

以青蒿素进样量(y)对峰面积值(x)进行线性回归，得回归方程为y=9.1756x+14.964。结果表明，青蒿素的进样量在0～20 μL，与峰面积呈良好线性关系。青蒿素液相标准曲线见图2。

图2 青蒿素液相标准曲线

1.2.2.4 精密度试验

取浓度为0.1 mg·mL-1的青蒿素对照品溶液，用0.45 μL的膜过滤至进样瓶，连续进样6次，每次进样量为20 μL，分别记录色谱峰的出峰时间和峰面积，根据数据计算一日内精密度；以同样步骤连续进样5 d，记录出峰时间和峰面积，根据数据计算日间精密度。结果显示，日内精密度的RSD=0.95%，日间精密度的RSD=0.96%，表明该仪器的精密度良好。

1.2.2.5 稳定性试验

分别吸取浓度为0.1、0.2、0.3 mg·mL-1的青蒿素对照品溶液，用0.45 μL的膜过滤至进样瓶，于0、3、6、9、12 h分别进样，记录出峰时间和峰面积。结果显示，RSD分别为0.63%、0.50%和0.55%，表明对照品溶液在12 h内稳定性良好。

1.2.2.6 加样回收率试验

将青蒿素标准溶液和马兰供试品溶液分别以1∶0.5、1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5的比例混合，并用0.45 μL的膜过滤，分别加入五个进样瓶，进样量都为20 μL。以上述进样条件进行测定，记录相应的出峰时间和峰面积。根据数据计算青蒿素的回收率，结果见表1。

表1 加样回收率

2 青蒿素含量测定

取马兰供试品溶液通过0.45 μL的膜过滤至进样瓶，并放入HPLC仪器内，进样量为40 μL，以上述进样条件进行测定，记录出峰时间和峰面积，测定样品马兰中青蒿素的含量。计算3次测定结果的平均值，马兰中青蒿素的含量为0.285 mg/g。马兰样品色谱图见图3，青蒿素含量测定结果见表2。

图3 马兰样品色谱

表2 HPLC法测定青蒿素含量

3 结论

HPLC法是经分离后测定的一种方法，将青蒿素类似物分离，排除了干扰，可以更有效地对青蒿素进行测定。这种方法的精密度、稳定性、加样回收率的试验结果均较好，适用于马兰中青蒿素含量的测定。