琼脂包裹法在小标本病理制片过程中的应用体会

杨 瑞，明 健

随着临床上各种内窥镜、粗针穿刺等微创技术的广泛应用，病理科经常会接收到越来越多小标本的病理诊断，如胃镜、肠镜、气管镜、鼻咽镜等的活检组织及乳腺等实体肿瘤的粗针穿刺组织等[1]，这些小标本可以提供很多临床信息，对疾病的诊断和治疗发挥着重要作用。小标本体积过小，形状不规则，目前大多数医院病理科常采用滤纸包裹法进行脱水制片，但在脱水过程中极易发生小标本组织的收缩，或是包埋的组织不在同一平面上及耗时较长等一系列缺陷[2-3]。近年来本科室采用琼脂包裹法对小组织标本处理，取得非常满意的效果，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源及分组收集北部战区总医院(和平院区)活检小标本，包括胃镜、肠镜、膀胱镜活检组织及一些粗针穿刺组织等，共收集56例标本，并随机分为琼脂包裹法组28例，传统滤纸包裹法组28例(表1)。

表1 两种方法取材方法的小标本组织块数量

1.2 琼脂配制方法将电磁炉锅中加入约2/3体积清水并置于电磁炉上加热，同时取200 mL蒸馏水放入烧杯中，并加入8 g琼脂粉(北京奥博星生物公司)，将烧杯放入电磁炉锅中不断搅拌加热至沸腾，5 min后加入5 mL伊红溶液(珠海贝索生物公司，1vial×500 mL)，继续搅拌(加入琼脂及伊红后总体积约210 mL)，10 min后用吸管吸出所有琼脂并分装入5 mL塑料试管中置于冰箱冷冻室(-20 ℃)内冷冻保存，备用。

1.3 制片过程

1.3.1取材 (1)琼脂包裹法取材前将冷冻的装有琼脂的塑料试管2～3管从冰箱取出，放入装有200 mL水的烧杯(容量200 mL)中，加热至沸腾后停止加热，从烧杯中取出，冷却5 min后至黏稠状态备用(琼脂溶液保存使用时限24～48 h为佳)。取材开始是将标本盒中小标本镊子夹持下直接放置于包埋盒中央并测量组织直径，吸管吸出适量琼脂缓慢滴加在组织上，将全部组织包裹于琼脂中，盖上包埋盒盖为取材结束，注意多块组织放在一起，平铺于同一平面，不能重叠在一起，琼脂完全冷却后，放入脱水筐中。(2)滤纸包裹法取材开始是将标本盒中小标本镊子夹持下直接放置于滤纸中央，包裹完滤纸为取材结束，注意仔细摆放好组织并小心缓慢折叠滤纸以免挤压组织。记录两种方法取材方法的小标本组织块数量(表1)及消耗时间，之后两组标本均按照大组织脱水程序进行脱水。

1.3.2包埋 脱水后琼脂包裹法标本的琼脂变成透明状，将包裹组织的琼脂块从包埋盒中取出(组织包裹镶嵌于琼脂中，可以将琼脂块看做一块组织)，按照大块标本组织常规程序进行包埋。滤纸包裹法标本将滤纸打开，把组织逐一用镊子夹出来进行包埋，记录有效组织的个数及有无收缩(较未脱水组织直径缩小2 mm为标准判断)。

1.3.3切片 由于配制琼脂时加入了伊红溶液，因此琼脂内组织呈红色，切片时有利于辨认，切片方法按照常规程序进行，并与取材时组织块数量进行核对。

1.3.4染色 与传统滤纸包裹脱水法程序完全一致。

1.4 统计学方法采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法在取材、包埋、切片过程中的比较本实验中两组小标本在取材、包埋、切片过程中过程比较发现(表2)，在取材、包埋、切片三个步骤中琼脂包裹法耗时较短，组织收缩、切片不全或过切(组织切片不全为组织未切至最大切面，过切为已经切掉最大切面)病例数明显少于滤纸包裹法，差异有统计学意义(P<0.05)。切片耗时差异主要体现在因琼脂包裹法包埋时所有组织被琼脂固定于同一平面内，而滤纸包裹法包埋时可能造成个别组织漂浮而与其他组织未处在同一平面的情况，因此切片需消耗些时间核对组织数量及是否切全等状况。

表2 两种方法在制片过程中各个环节的比较

2.2 两种方法在组织细微结构镜下观察的比较本组中2例结肠低级别管状腺瘤小标本分别采用琼脂包裹法与滤纸包裹法切片，结果发现2例镜下组织结构清晰(图1、2)，两种方法常规HE染色镜下结构图像无明显差别，色泽鲜艳，细胞核与细胞质染色对比清晰，透明度好。

图1 琼脂包裹法小标本切片镜下细微结构图 图2 滤纸包裹法小标本切片镜下细微结构图

3 讨论

小标本是指直径<2 mm的点状、粒状组织，或者直径1 mm、长径<2 cm的组织[4]，是经多种内窥镜下钳取或粗针穿刺所获取，可以进行组织形态学检查、分子病理学检查及基因检测，给临床疾病的精确诊断和精准治疗提供重要的信息。但由于标本较小，传统的滤纸包裹法进行脱水制片过程中极易出现组织收缩、切片不全或过切等现象[5]，从而导致标本信息的缺失，给临床工作造成一定麻烦。如何弥补传统方法的不足，更好的为临床服务是目前亟待解决的问题。

琼脂粉是用藻类植物为原料，不溶于冷水和醇，其形成的琼脂具有凝固性，稳定性的特点。本实验采用的软琼脂包裹脱水法是将同一患者的多个小标本组织同时镶嵌在冷凝后的软琼脂中，使之融合为一个整体再进行制片的方法。

实验发现传统滤纸包裹法脱水后可能存在组织收缩变小、滤纸包裹不紧组织从中漏出、夹取困难、不易辨认等情况而耗费时间。包埋时也可能造成个别组织漂浮而与其他组织未处在同一平面的情况，并且切片时需消耗些时间核对组织数量及是否切全等状况。因可能组织未处于同一平面，切片时会造成有的组织切不全，有的则过切甚至全部切完。而琼脂包裹法中组织被包裹于琼脂中并在取材时平铺在同一平面上，可避免上述情况的发生。

因新方法将组织包裹于琼脂中，因此可以降低组织丢失的可能性，且传统方法可能出现滤纸包裹不紧组织从中漏出、夹取困难、不易辨认等情况，因此操作需极为谨慎。镜下观察两组间的组织细微结构均清晰显现，无明显差异。

综上所述，作者认为琼脂包裹法非常适合在小标本制片过程中应用，其可以在不影响病理检查结果的基础上，弥补传统方法的一系列缺陷，使制片过程更加流畅、快捷，提高了工作效率，值得在内镜活检及穿刺活检小标本制片过程中推广使用。