顶空-气相色谱法测定醋氯芬酸中的残留溶剂

王南南, 刘发贵

(1.沂南县检验检测中心，山东 临沂 276000；2.鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276000)

药物中的残留溶剂定义为在原料药或辅料的生产及在制剂制备过程中使用或产生而又未能完全去除的有机溶剂[1-2].残留溶剂没有疗效[3]，但当产品所含的残留溶剂水平高于限定值时，会对后续的产品产生影响，甚至对人体、环境存在危害.因此必须将残留溶剂控制在规定限度内[4]，以符合产品规范、药品生产质量管理规范(GMP)、人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH)及药典标准的要求[5].

醋氯芬酸是一种新型、强效解热、镇痛、抗关节炎药物，临床上应用广泛[6-8].由于醋氯芬酸具有羧酸基，呈一定酸性，且沸点较高，高温下易分解.因此，使用直接进样的气相色谱法进行检测时，会出现较多的样品降解未知峰，同时系统存在不同程度的物质残留峰，严重影响检测.而且长时间运行，也会导致进样口污染.为此，本文建立了一种采用顶空-气相色谱法(HS-GC)测定醋氯芬酸中残留溶剂的方法.此方法为检测高沸点、呈酸(碱)性、气相色谱系统易残留的物质提供了一定的参考.

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

气相色谱仪，Agilent 7890B，配FID检测器(美国安捷伦)；电子分析天平，Mettler Toledo，MS205DU；色谱柱：DB-624 30 m×0.32 mm，1.8 μm(美国安捷伦).

异丁烯(溶于异丙醚中，分析级，TCI)；甲醇(色谱级，Merck)；叔丁醇(分析级，TDEIA)；乙酸甲酯(分析级，国药集团)；N,N-二甲基甲酰胺(色谱级，Merck)；醋氯芬酸(自制，批号：181001C，181002C).

1.2 色谱条件

6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱；初始温度40 ℃，保持3 min，以20 ℃/min的速率升温至240 ℃，保持5 min；进样口温度240 ℃；分流比为20∶1；载气为氮气；检测器(FID)温度250 ℃；流速为2 mL/min.顶空平衡温度80 ℃，平衡时间30 min.

1.3 溶液配制

空白溶剂：N,N-二甲基甲酰胺.

对照品溶液：分别称取异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇各适量，精密称定，加溶剂稀释制成每1 mL中约含异丁烯0.01 mg、甲醇0.3 mg、乙酸甲酯0.5 mg和叔丁醇0.3 mg的混合溶液，精密量取2 mL，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液.

供试品溶液：取醋氯芬酸样品(批号：181001C)约200 mg，精密称定，置顶空瓶中，精密加入溶剂2 mL使溶解，密封，作为供试品溶液.

测试溶液：取醋氯芬酸样品(批号：181001C)约200 mg，精密称定，置顶空瓶中，精密加入对照品溶液2 mL使溶解，密封，作为测试溶液.

2 结果与讨论

2.1 残留溶剂分析

在分析醋氯芬酸生产工艺的基础上，经前期试验，确定本生产工艺条件下，醋氯芬酸可能存在的残留溶剂有4种，分别是异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇.除异丁烯外，其他3种均为ICH相关指导原则明确需要控制的溶剂.异丁烯常温条件下为气体.目前国内外报道的常见原料药中存在常温为气体的物质主要为氯代烷，异丁烯相关报道较少.

异丁烯的危害多见于窒息、弱迷醉和弱刺激.长期较低浓度接触的情况下，可能会出现头痛、头晕、乏力的不适.因此应控制异丁烯在醋氯芬酸中的残留量，其限度的确定参考毒理学数据的相关资料[9].

2.2 专属性

取空白溶剂、对照品和供试品溶液,分别依照本法测定.试验结果表明，空白溶剂对各溶剂测定无干扰，供试品溶液色谱图中无未知峰.残留溶剂峰之间的分离度大于2.0，方法专属性良好.试验结果如表1所列.

表1 专属性

2.3 定量限和检测限

取异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇对照品溶液逐级稀释，以S/N约为10和3，分别作为定量限和检测限.异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇的定量限分别为0.042、2.407、1.001、1.834 μg/mL，检测限分别为0.013、0.722、0.300、0.550 μg/mL.

2.4 线性与范围

分别取各溶剂的对照品储备液适量，配制各溶剂一系列的梯度浓度，进行试验.以色谱峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线.结果各溶剂在试验范围内，质量浓度和峰面积线性关系良好(r均大于0.999).结果如表2所列.

表2 线性试验结果

2.5 精密度

由不同分析实验人员于不同日期使用不同的仪器，分别取对照品和测试溶液进行试验，按外标法计算测试溶液中各残留溶剂的含量.结果异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇含量的RSD分别为4.3%、3.8%、4.8%和4.6%(n=12)，表明该方法精密度良好.

2.6 准确度

参照“1.3溶液配制”，分别配制含各溶剂3个梯度浓度(限度的80%、100%、120%)的测试溶液进行试验，结果异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇回收率RSD值分别为6.9%、4.2%、4.5%、4.9%(n=9)，具体结果如表3所列.试验结果表明本法准确度良好.

表3 加标回收率试验结果

2.7 耐用性

通过改变初始柱温、进样口温度和流速，考察色谱条件发生微小变化时，各溶剂测定结果的变化.结果异丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇的测得含量RSD值分别为7.8%、6.6%、7.7%和8.7%，表明本法的耐用性良好.

3 实际样品检测

取空白溶剂、对照品和两批次供试品溶液分别依照本法测定，以外标法计算各批次样品中残留溶剂的含量，具体结果如表4所列.试验结果表明，两批次样品中残留溶剂的含量均合格.

表4 样品检测结果

4 结论

目前，药品中残留溶剂的控制愈加受到重视.如何更加快捷、准确的检测药物中残留溶剂，是每一名制药人不断努力的目标.本文采用HS-GC法建立了醋氯芬酸中残留溶剂检测的方法，避免了直接进样法带来的一系列问题，如易残留、温度高、易降解等.经系统的方法学验证，结果表明本法的专属性良好、准确度高，可用于醋氯芬酸中残留溶剂的测定.同时本法为首次应用于醋氯芬酸中异丁烯残留量的检测方法，这为其他药物中异丁烯的检测提供了较好的参考.