双氯芬酸二乙胺乳胶剂的含量测定

林生文

（广东省食品药品检验所，广东 广州 510180）

双氯芬酸二乙胺[1]是双氯芬酸非金属离子盐，适合局部用药，是一种两亲性分子，和其他双氯芬酸盐相比，更容易透过疏水性的角质层和亲水性的表皮层。双氯芬酸二乙胺目前的制剂品种主要为双氯芬酸二乙胺乳胶剂和凝胶剂，质量标准需要进一步提高与统一。双氯芬酸二乙胺乳胶剂为解热镇痛类非处方药，对软组织疼痛有良好疗效[2]，可用于治疗膝关节骨性关节炎[3]，具有抗炎、镇痛作用。局部应用时，其有效成分可穿透皮肤到达炎症区域，缓解急慢性炎症反应，对因外伤或风湿病引起的炎症，可使炎性肿胀减轻、疼痛缓解，可用于缓解肌肉、软组织、关节的中度疼痛。双氯芬酸二乙胺乳胶剂现行国家标准为国家食品药品监督管理局药品试行标准[4]，以双氯芬酸二乙胺为对照品，采用高效液相色谱法测定含量，但不同剂型方法不统一。本试验中新建了双氯芬酸二乙胺乳胶剂的测定方法，统一了不同制剂的测定方法，同时解决了对照品缺乏的问题。现报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1200型液相色谱仪；Chemstation色谱工作站；梅特勒ME104E型电子天平。双氯芬酸钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100334-201003）；双氯芬酸二乙胺对照品、双氯芬酸二乙胺乳胶剂（批号为 X1146，X1326，X1854，规格为 20 g∶0.2 g，以C14H10Cl2NNaO2计，均由诺华制药有限公司北京分公司提供)；甲醇、乙腈均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5]

色谱柱:CNW C18柱（150mm ×4.6mm，5μm）；流动相:甲醇 -4%冰醋酸水溶液（70∶30），流动相使用前经0.45μm有机滤膜抽滤并脱气；流速:1.5mL /min；检测波长[4]:276 nm；柱温:40 ℃ 。

2.2 溶液制备[6]

取双氯芬酸钠对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1 mL中含0.25 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取本品 2.5 g（约相当于双氯芬酸钠25 mg），精密称定，置 100mL容量瓶中，加甲醇适量，超声30 min使溶解，放冷，用甲醇稀释刻度，摇匀，离心，取上清液，通过0.45μm滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验[7]:取双氯芬酸二乙胺适量，用水制成每1 mL中约含1 mg的溶液，取适量，置石英吸收池中，在紫外光灯（254 nm）下照射15 min，作为系统适用性试验溶液。按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，在与双氯芬酸二乙胺保留时间约0.8 min处出现一杂质峰，杂质峰和双氯芬酸二乙胺峰的分离度应不低于4.0，理论板数按双氯芬酸二乙胺峰计算应不低于5 000。见图 1。

图1 高效液相色谱图

标准曲线绘制:取双氯芬酸钠对照品125 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度。精密吸取上述溶液1，3，5，2，5 mL，置 50，50，50，10，10 mL 容量瓶中，配制成质量浓度为51.600～1 290.0μg/mL 对照品溶液，各进样 20μL，按拟订色谱条件测定峰面积。以对照品质量浓度为横坐标（C）、峰面积为纵坐标（A）进行线性回归，得线性回归方程 A＝116.724 8C-72.462 6，r＝0.999 9（n＝5）。结果表明，双氯芬酸钠质量浓度在 51.600～1 290.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取对照品溶液，重复进样6次，测定峰面积值。结果的 RSD为0.6%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一批供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，12，24 h时依法测定。结果的 RSD为0.8%，表明供试品在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品，分别平行称取6份，依法测定。结果的 RSD为1.2%，表明方法重复性良好。

加样回收试验[8]:取样品（批号为 X1146），分别制备质量浓度为标示浓度80%，100%，120%的供试品溶液各3份，依法测定。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝9）

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液及对照品溶液，分别精密吸取20μL，按拟订色谱条件进样测定峰面积，外标法计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

由于双氯芬酸二乙胺对照品难以购买，而双氯芬酸钠对照品易获得。本品的规格以双氯芬酸钠计，双氯芬酸二乙胺乳胶剂按双氯芬酸钠为标示量计算。本试验中采用双氯芬酸钠及双氯芬酸二乙胺为对照品测定3批样品，结果两种方法测定的含量基本一致。因此认为，本品可以采用较容易得到的双氯芬酸钠作为对照品，测定含量。

本试验中采用了4条色谱柱测定含量，分别为 CNW C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），Merck C18柱（125 mm ×4.6 mm，4 μm），Waters XBridge C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），安捷伦XDB-C18柱（150mm ×4.6mm，5 μm）。测定结果显示，此 4条色谱柱均适用于双氯芬酸二乙胺乳胶剂的含量测定。

本试验中尝试用甲醇和70%甲醇作为溶剂进行样品前处理，发现乳胶剂在甲醇溶液中溶解较好，辅料无干扰，溶液比较澄清，故选用甲醇作为溶剂。测定过程中考察了流动相，发现冰醋酸浓度较高时峰形较好。双氯芬酸二乙胺乳胶剂的测定采用水溶液破坏的方法，结果破坏试验方法重现性好、方法简单，解决了系统适用性试验需要对照品的问题。

参考文献:

[1]施 卉，吴 超，邱利焱，等.几种促进剂对双氯芬酸钠离子导入效果的比较[J].中国药学杂志，2006，41（12）:921-922.

[2]刘晓阳.双氯芬酸二乙胺乳胶剂治疗软组织性腰痛的疗效观察[J].临床医药实践，2011，20（7）:511-513.

[3]曹 红，范 里，赵胜豪.局部双氯芬酸二乙胺乳胶剂治疗膝关节骨性关节炎的疗效观察[J].临床医药实践，2011，20（7）:502-503.

[4]YBH07402009，国家食品药品监督管理局国家药品标准(试行)[S].

[5]王 勇，张海龙，周彦斌，等.高效液相色谱法测定双氯芬酸二乙胺乳胶剂有关物质[J].中南药学，2011，9（12）:909-912.

[6]徐灿辉，何维为.高效液相色谱法测定神风液中掺加的双氯芬酸钠[J].中国药业，2006，15（21）:37-38.

[7]杨仲文，陈玄玄.双氯芬酸二乙胺凝胶的紫外分光光度法测定[J].2003，34（9）:467-468.

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录29-附录 31.