经典名方身痛逐瘀汤药材精准炮制方法的研究

朱志飞 刘有志 吴月峰 陈定芳 唐总德 周琦人 李冰杰 刘健康 周晋 贺福元

〔摘要〕 目的 對身痛逐瘀汤中各药材进行最佳炮制工艺研究，为身痛逐瘀汤“物质基准”的制备工艺研究提供实验基础。方法 以道地药材为原料，测定各药材2020版《中华人民共和国药典》中指标成分以及浸出物的含量，并以此为单因素考察指标，从喷水量、喷淋次数、闷润时间、切制规格、干燥温度和炒制时间、炒制温度等多方面进行考察，取最相关因素进行方差分析，以及建立单成分炮制火候模型，最终确定最佳炮制工艺。结果 经过单因素和正交实验综合得，当归药材的最佳炮制工艺为初步净制后，闷润时间2 h，切制1～2 mm，60 ℃干燥;甘草药材的最佳炮制工艺为初步净制后，蒸制时间30 min，切制1～2 mm，80 ℃干燥;牛膝药材的最佳炮制工艺为初步净制，闷润时间1.0 h，切制7～8 mm，70 ℃干燥;秦艽药材的最佳炮制工艺为初步净制后喷秦艽重量0.5倍的水3次，闷润0.5 h，切制9～10 mm，70 ℃干燥;羌活药材的最佳炮制工艺为初步净制，喷羌活重量0.8倍的水3次，闷润2.5 h，切制7～8 mm，50 ℃干燥;川芎药材的最佳炮制工艺为初步净制，浸泡时间2 h，润软12 h后，切制9～10 mm，50 ℃干燥;地龙的最佳炮制工艺，即加地龙重量2倍水，淘洗时间2 min，切制3～4 mm，80 ℃干燥;桃仁的最佳炮制工艺即沸水烫时间5 min，冷水浸泡冷却1 min，80 ℃干燥;红花药材的炮制为取红花原药材，除去杂质、花萼及花柄，筛去灰屑，制得红花炮制品;香附药材的炮制为除去毛须及杂质，碾碎，得香附炮制品;没药药材的炮制为拣净杂质，大颗粒的没药碾碎为小颗粒，即得没药的炮制品;五灵脂药材为清炒，具体炮制火候模型为。对最佳炮制工艺下炮制的炮制品进行性状、水分及指标成分含量鉴定，12味饮片含量及性状鉴定均符合2020版《中华人民共和国药典》中水分含量的标准，15批饮片质量初步符合标准。结论 本实验确定的身痛逐瘀汤中12味药材的炮制工艺可行，可为身痛逐瘀汤物质基础的制备工艺提供依据。

〔关键词〕 身痛逐瘀汤;经典名方;炮制;工艺研究;单因素;正交设计;炮制火候模型

〔中图分类号〕R283       〔文献标志码〕A       〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.08.011

A Study on the Precise Processing Method of the Classical Prescription Shentong Zhuyu Decoction

ZHU Zhifei1，2，3， LIU Youzhi1，2，3， WU Yuefeng1，2，3， CHEN Dingfang1，2，3， TANG Zongde1，2，3， ZHOU Qiren1，2，3，

LI Bingjie1，2，3， LIU Jiankang1，2，3， ZHOU Jin1，2，3*， HE Fuyuan1，2，3*

（1. College of Pharmacy， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Hunan Key

Laboratory of Druggability and Preparation Modification of TCM， Changsha， Hunan 410208， China; 3. Laboratory of Supramolecular Mechanism and Mathematic-Physics Characterization for Chinese Materia Medica， Hunan

University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China）

〔Abstract〕 Objective To study the best processing technology of Shentong Zhuyu Decoction， and to provide experimental basis for the preparation technology of Shentong Zhuyu Decoction. Methods Genuine medicinal materials was used as raw materials， the determination of the content of index components and extracts in Chinese Pharmacopoeia 2020 edition of medicinal materials was taken as the single factor index， and the water spraying amount， spraying times， moistening time， cutting specifications， drying temperature and frying time， frying temperature and other aspects were investigated. The most relevant factors were selected for variance analysis， and the single component processing fire model was established. Finally， the best processing technology was determined. Results Through single factor and orthogonal experiments， the best processing technology of Danggui （Angelicae Sinensis Radix） was as follows： after preliminary purification， moistening time was 2 hours， cutting 1～2 mm， drying at 60 ℃; the best processing technology of Gancao （Glycyrrhizae Radix Et Rhizoma） was as follows： after preliminary purification， steaming time was 30 minutes， cutting 1～2 mm， drying at 80 ℃; the best processing technology of Niuxi （Achyranthis Bidentatae Radix） was as follows： preliminary purification， moistening time was 1 hour， cutting 7～8 mm， drying at 70 ℃; the best processing technology of Qinjiao （Gentianae Macrophyllae Radix） was as follows： spray water 0.5 times the weight of Qinjiao （Gentianae Macrophyllae Radix） three times， moistening 0.5 hours， cutting 9～10 mm， drying at 70 ℃; the best processing technology of Qianghuo （Notopterygii Rhizoma Et Radix） was as follows： spray water 0.8 times the weight of Qianghuo （Notopterygii Rhizoma Et Radix） three times， moistening 2.5 hours， cutting 7～8 mm， drying at 50 ℃; the best processing technology of Chuanxiong （Chuanxiong Rhizoma） was as follows： initial purification， soaking for 2 hours， moistening for 12 hours， cutting 9～10 mm， drying at 50 ℃; the best processing technology of Dilong （Pheretima） was adding 2 times of Dilong （Pheretima） weight water， washing time was 2 minutes， cutting 3～4 mm， drying at 80 ℃; the best processing technology of Taoren （Persicae Semen） was boiling water for 5 minutes， soaking in cold water for 1 minute， drying at 80 ℃; the processing technology of Honghua （Carthami Flos） medicinal material was taking safflower raw material， removing impurities， calyx and flower stalk， screening ash to get Honghua （Carthami Flos） processed products; the processing technology of Xiangfu （Cyperi Rhizoma） medicinal material was picking up the impurities and grinding them to obtain Xiangfu （Cyperi Rhizoma） processed products; the processing of Moyao （Myrrha） medicinal material was sorting out impurities， and grinding the large particles of Moyao （Myrrha） into small particles to obtain Moyao （Myrrha） processed products; Wulingzhi （Faeces Trogopterori） medicinal materials were stir-fried， and the specific processing model was  . The properties， moisture content and index component content of processed products processed under the best processing technology were identified. The results showed that the content and properties of 12 decoction pieces were in accordance with the standard of water content in Chinese Pharmacopoeia 2020 edition， and the quality of 15 batches of decoction pieces was in line with the standard. Conclusion The processing technology of 12 herbs in Shentong Zhuyu Decoction is feasible， which can provide the basis for the preparation of material basis of Shentong Zhuyu Decoction.

〔Keywords〕 Shentong Zhuyu Decoction; classic famous prescription; processing; process research; single factor; orthogonal design; processing fire syndrome model

身痛逐瘀汤出自王清任的《医林改错》，由《丹溪心法》的趁痛散加味而成，为五逐瘀汤之一，为痹症有瘀者设计的主要方剂。该方由秦艽一钱（3 g）、羌活一钱（3 g）、川芎二钱（6 g）、红花三钱（9 g）、没药二钱（6 g）、当归三钱（9 g）、五灵脂二钱（6 g）、香附一钱（3 g）、牛膝三钱（9 g）、地龙二钱（6 g）、甘草二钱（6 g）、桃仁三钱（9 g）12味中药组成，主含环烯醚萜、黄酮、香豆素、倍半萜、二萜、三萜、生物碱、植物甾醇类、氰苷、酚酸类等及挥发油化合物，具有活血行气、祛风通络、利痹止痛之功效，主治气血闭阻经络所致的肩痛、臂痛、腰痛、腿痛或周身疼痛、经久不愈证候，对关节炎、腰椎管狭窄、腰肌劳损、神经根型颈椎病、疼痛、腰椎间盘突出症均有很好的作用。近年药理学研究[1]表明，该方具有抗血栓、镇痛抗炎、抗脑血缺、神经保护、免疫调节、抗风湿、抗癌疼痛等方面的作用，极具有研究意义。经典名方研发的关键在于能否研制出符合质量要求的古代经典名方“物质基准”，以作为复方制剂质量控制的复方对照品，然而，中药物质基准受到产地、气候等环境和加工炮制等制剂制备方法等因素影响，如要研制出均一、稳定的复方对照品，即关键在于药材质量、中药炮制等要素的研究[2-3]。此前作者已经对身痛逐瘀汤中各药材的炮制方法进行古今文献考察，确定了12味药材的基原、道地性以及炮制方法，所以本文采用单因素实验与正交实验法相结合确定身痛逐瘀汤各药材最佳炮制工艺，以道地药材为原料，测定各药材2020版《中华人民共和国药典》中指标成分以及浸出物含量，并以此为单因素考察指标，从喷水量、喷淋次数、闷润时间、切制规格、干燥温度和炒制时间、炒制温度等多方面进行考察，取最相关因素进行方差分析，以及建立单成分炮制火候模型，最终确定最佳炮制工艺，为身痛逐瘀汤“物质基准”的制备工艺研究提供实验基础。

1 仪器与试药

1.1  主要仪器

ACQUITY UPLC H-Class型超高效液相色谱仪（美国Waters公司）;101-3AB型恒温干燥箱（北京中心伟业仪器公司）;MA110型分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）;P3942-1000型移液器（美国Labnet公司）;CS-50 型高速多功能粉碎机（浙江永康天祺盛世工贸公司）;SHZ-D（Ⅲ） 型循环水真空泵（巩义市予华仪器有限公司）;XMTD-4000 型水浴锅（北京光明医疗仪器公司）。

1.2  主要试药

秦艽为龙胆科植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.的干燥根;川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 的干燥根茎;桃仁为蔷薇科植物桃Prunus persica （L.） Batsch 的干燥成熟种子;红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花;甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎;羌活为伞形科植物羌Notopterygiumincisum Ting ex H. T. Chang的干燥根茎;没药为橄榄科植物地丁树Commiphora myrrha Engl.的干燥树脂;当归为伞形科植物当归Angelica sinensis （Oliv.） Diels的根;五灵脂为鼯鼠科动物橙足鼯鼠Trogopterus xanthipes Milne-Edwards的干燥糞便;香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎;牛膝为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根;地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum （E. Perrier）的干燥体;均为15批次，经湖南中医药大学药学院石继连教授按《中华人民共和国药典》2020年版一部有关项下鉴定，见表1[4]。

标准品均购自上海源叶生物科技有限公司，龙胆苦苷（批号：Y30J9Q66926）、甘草苷（批号Z13J11X108109）、阿魏酸（批号：H27J7L16718）、原儿茶酸（批号：H21J9Z64031）、肌苷（批号：TJ0623XA13）、苦杏仁苷（批号：Z28A6L2815）、羟基红花黄素A（批号：R31A9F69105）、麝香草酚（批号：TN1112CB14）、紫花柴胡苷（批号：W07A10Z94862）、α-香附酮（批号：Z08A10L94945）、β-蜕皮甾酮（批号：T02A9F57640），纯度均≥98%。

乙腈、甲醇为色谱纯（德国默克公司）;磷酸（重庆川东化工有限公司）;甲酸、乙酸（国药集团化学试剂有限公司）为分析纯;怡宝纯净水、0.22 μm微孔滤膜。

2 煎出物及指标成分的含量测定

2.1 煎出物的测定

按照2020版《中华人民共和国药典》中水溶性浸出物热浸法测定[5]，取炮制后饮片经电子天平称重约2～4 g，并用100 mL量筒量取蒸馏水100 mL，共同置于圆底烧瓶（250 mL）中，轻轻摇匀后静置5 min，称定重量记录数据，连接电热套，加热至沸腾，微沸状态下保持1 h。取下圆底烧瓶，放冷1 h，再称定重量，用蒸馏水补足减失重量，摇匀，抽滤后精密量取滤液25 mL，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，经水浴锅上蒸干，再放置于105 ℃烘箱干燥3 h，后快速转移进干燥器冷却30 min，再在电子天平中精密称定重量，按照干燥品计算供试品中煎出物含量（%）。

煎出物含量=×100%

2.2  供试品溶液的含量测定色谱条件

按照2020版《中华人民共和国药典》及相关文献下当归、甘草、秦艽、羌活、川芎、地龙、红花、香附、桃仁、没药、五灵脂项下色谱条件进行供试品溶液测定[5]。

2.3  供试品和对照品溶液的制备

分别精密称取龙胆苦苷（秦艽）、羟基红花黄色素A（红花）、阿魏酸（川芎和当归）、β-蜕皮甾酮（牛膝）、甘草酸（甘草）、苦杏仁苷（桃仁）、紫花前胡苷（羌活）、麝香草酚（没药）、原儿茶酸（五灵脂）、α-香附酮（香附）、肌苷（地龙）1.0、1.1、1.3、1.1、1.0、1.4、1.3、1.5、1.1、1.2、1.0 mg，依此加入甲醇定容至5 mL，分别制成质量浓度约为 0.2 g/L的对照品溶液。

2.4  线性关系考察

分别吸取“2.2”项下11种对照品，依次稀释不同倍数浓度，按“2.1”项下进样，以浓度（μg·mL-1）为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，得到11个成分的回归方程。见表2。

2.5  方法学验证

2.5.1  精密度  取“2.2”项下的制备的标准品溶液，按“2.1”项下条件进样，重复进样6次，计算各成分含量并计算RSD，结果RSD在1.52%～3.05%之间，精密度良好。

2.5.2  稳定性  取“2.2”项下的制备的标准品溶液，按2.1项下条件进样，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，计算各成分含量并计算RSD，结果RSD在0.38%～5.46%之间，稳定性良好。

2.5.3  加样回收率  精密称取已知含量的样品6份，加入“2.2”项下的制备的标准品溶液1 mL，再按“2.1”项下条件下制备供试品溶液进样，测定各成分含量并计算加样回收率，结果加样回收率在99.67%～106.58%之间，回收率良好。

3 单味药材最佳炮制方法确定

3.1  当归、甘草、牛膝、秦艽、羌活、川芎、桃仁及地龙药材的最佳炮制方法确定

对当归、甘草、牛膝、秦艽、羌活、川芎、桃仁、地龙药材（取药材约100 g，共5组，每组20 g）进行单因素考察，对不同喷水量、闷润时间、切制厚度、干燥温度、干燥时间、燀制时间、淘洗时间等因素的考察，按“2.1”项下测定并计算得出煎出率，平行测定3次，取平均值，由上述单因素考察中煎出率的结果可知，喷水量、闷润时间、切制规格、干燥温度等因素对药材煎出率影响较大，并根据煎出率含量高低确定3个水平进行正交试验，选用L9（34）正交表，安排药材的炮制，得到饮片，测定炮制后正交饮片的《中华人民共和国药典》中的指标成分，进行加权综合评分，并进行正交试验方差分析，得到生当归的最佳炮制工艺为A1B1C3，即闷润时间2 h，切制1～2 mm，60 ℃干燥;生甘草的最佳炮制工艺为A3B1C2，即蒸制时间30 min，切制1～2 mm，80 ℃干燥;生牛膝的最佳炮制工艺为A2B1C2，即闷润时间1.0 h，切制7～8 mm，70 ℃干燥;生秦艽的最佳炮制工艺为A2B3C3，即喷水量为秦艽重量的0.5倍，闷润0.5 h，切制9～10 mm，70 ℃干燥;生羌活的最佳炮制工艺为A3B3C1，即喷水量为羌活重量的0.8倍，闷润2.5 h，切制7～8 mm，50 ℃干燥;生川芎的最佳炮制工艺为A2B3C1，即浸泡时间2 h，润软12 h后，切制9～10 mm，50 ℃干燥;生地龙的最佳炮制工艺为A1B2C3，即加地龙重量2倍水，淘洗时间2 min，切制3～4 mm，80 ℃干燥;生桃仁的最佳炮制工艺为A3B1C3，即沸水烫时间5 min，冷水浸泡冷却1 min，80 ℃干燥。

3.2  红花、香附及没药药材的最佳炮制方法确定

身痛逐瘀汤中红花、香附及没药的炮最佳炮制按《中华人民共和国药典》项下，为取红花原药材，除去杂质、花萼及花柄，筛去灰屑，制得红花炮制品;香附的炮制为除去毛须及杂质，碾碎，得香附炮制品;没药的炮制为拣净杂质，大颗粒的没药碾碎为小颗粒，即得没药的炮制品[5]。

3.3  五灵脂药材的精准炮制方法确定

根据多地炮制法规表明，清炒五灵脂根据炒制的时间、火力及程度要求不同分为炒黄、炒焦、炒炭。身痛逐瘀汤中五灵脂具体的炮制程度还需要考究，尤其是对其有效成分的理化性质产生影响的过程，即热力学与动力学两大方面。课题组前期[6-7]建立超分子主客体成分超分子“印迹模板”的定量火候数模型。根据化学反应动力学原理，对于单个成分的稳定性可采用Arrhenius公式与动力学方程表示，并根据火候的传统定义，火候的本质可定义为在单位温度下、单位时间内，物质质量的变量程度，是中药炮制火候的定量表征基础方法，据此可实现精确炮制的目标。

因此，本实验基于恒温条件下测定五灵脂中原儿茶酸的含量，经预实验后确定文火（90、110、130、150、170 ℃）、中火（180、200、210、220、230 ℃）、武火（240、250、270、280、300 ℃）温度和加热时间（20、25、35、45、60 s），制得炮制品。经“2.2”项下进行原儿茶酸含量的测定，得五灵脂炮制火候文火、中火及武火。中火炮制的五灵脂中的原儿茶酸含量高且较为稳定，所以将五灵脂中火的炮制火候含量带入公式，可得式（1）、（2），可进行药材五灵脂的精准炮制。

4 饮片质量检查

对上述在最佳炮制工艺下制备的12味药炮制品（编号S1～S15）进行性状鉴定，水分检查按照“2.2”项下条件和2020年版《中华人民共和国药典》四部下（通则0832）水分测定第二法—烘干法（甘草、地龙等药）以及第四法—甲苯法（当归、川芎、羌活、香附、没药、红花、桃仁等药），测定身痛逐瘀汤12味15批饮片（S1～S15）的水分和指标成分含量，结果见表3、图1。由结果可见，川芎的水分含量范围为10.44%～10.64%，秦艽的水分含量范围为6.68%～7.21%，桃仁的水分含量范围为4.59%～5.42%，没药的水分含量范围为7.33%～7.45%，当归的水分含量范围为6.93%～7.51%，香附的水分含量范围为10.01%～10.09%，牛膝的水分含量范围为9.65%～9.90%，地龙的水分含量范围为6.47%～6.64%，甘草的水分含量范围为7.02%～7.26%，红花的水分含量范围为8.75%～9.00%，五灵脂的水分含量范围为5.38%～5.80%，羌活的水分含量范围为5.62%～5.94%，12味饮片含量和饮片性状鉴定均符合2020版《中华人民共和国药典》的标准，表示15批饮片質量初步符合标准。

5 總结与讨论

经过单因素和正交实验综合得，生当归的最佳炮制工艺为A1B1C3，初步净制后，闷润时间2 h，切制1～2 mm，60 ℃干燥;生甘草的最佳炮制工艺为A3B1C2，即初步净制后，蒸制时间30 min，切制1～2 mm，80 ℃干燥;生牛膝的最佳炮制工艺为A2B1C2，初步净制，闷润时间1.0 h，切制7～8 mm，70 ℃干燥;生秦艽的最佳炮制工艺为A2B3C3，初步净制后喷秦艽重量0.5倍的水三次，闷润0.5 h，切制9～10 mm，70 ℃干燥;生羌活的最佳炮制工艺为A3B3C1，初步净制，喷羌活重量0.8倍的水三次，闷润2.5 h，切制7～8 mm，50 ℃干燥;生川芎的最佳炮制工艺为A2B3C1，初步净制，浸泡时间2 h，润软12 h后，切制9～10 mm，50 ℃干燥;生地龙的最佳炮制工艺为A1B2C3，即加地龙重量2倍水，淘洗时间2 min，切制3～4 mm，80 ℃干燥;生桃仁的最佳炮制工艺为A3B1C3，即沸水烫时间5 min，冷水浸泡冷却1 min，80 ℃干燥;红花药材的炮制为取红花原药材，除去杂质，花萼及花柄，筛去灰屑，制得红花炮制品;香附药材的炮制为除去毛须及杂质，碾碎，得香附炮制品;没药药材的炮制为拣净杂质，大颗粒的没药碾碎为小颗粒，即得没药的炮制品。五灵脂药材为清炒，具体炮制火候模型为。对最佳炮制工艺下炮制的炮制品进行性状、水分及指标成分含量鉴定，结果为川芎、秦艽、桃仁、没药、当归、香附、牛膝、地龙、甘草、红花、五灵脂及羌活的水分含量范围分别为10.44%～10.64%、6.68%～7.21%、4.59%～5.42%、7.33%～7.45%、6.93%～7.51%、10.01%～10.09%、9.65%～9.90%、6.47%～6.64%、7.02%～7.26%、8.75%～9.00%、5.38%～5.80%、5.62%～5.94%，12味饮片含量及性状鉴定均符合2020版《中华人民共和国药典》中水分含量的标准，表示15批饮片质量初步符合标准，可用于物质基准的制备。

“物质基准”制备用饮片需按古法炮制才能使用，然古法炮制方法粗放，大多原理不明[8-9]。通过中药炮制，可以起到减毒增效、药性改变、矫味矫嗅、便于制剂成型的作用。对于中药材物理性状的改变，如溶解性、粉碎性、药材制剂性的炮制原理易于探讨，主要是经过高温加热，经炒、煎、煮高温处理后中药材的组织结构遭到破坏，如结合水的逸出、大分子链的破裂、大分子的水解，从而改变中药材超分子主体的性质，便于其中成分的溶出;对于减毒增效、药性改变的炮制原理，如川乌、草乌、附子等毒性成分影响明确可以得到解释，但对于毒性成分不明确的中药就不易解释;对于炮制后四气、归经、升降沉浮的变化，特别是同一药材不同炮制程度的药效变化，如生姜、干姜、炮姜与姜炭质量变化，如果不从精确数学模型控制角度来研究炮制，就难以从本质阐明质量属性变化规律，更谈不上饮片质量稳定和溯源[10-17]。所以，本实验对身痛逐瘀汤中需要炒制的五灵脂进行精确数学模型研究，其余11味药均按照古法与2020版《中华人民共和国药典》相结合，确定了最佳炮制工艺，为身痛逐瘀汤下一步“物质基准”的制备提供实验基础，从而为阐明身痛逐瘀汤药材—饮片—“物质基准”的量值传递规律，实现“物质基准”质量稳定，以期为古代经典名方复方制剂研究奠定基础。

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