落新妇根药材中岩白菜素定性定量方法研究

周丽丽 徐 皓

（长春市食品药品检验中心，吉林 长春 130000）

近年来，中医学在临床治疗中得到越来越多的应用，传统中药、中成药相关质控工作越来越受重视。落新妇根为虎耳草科植物落新妇的根茎，味辛、性温。中医理论中本品有散瘀镇痛、清热解毒之效，常用于治疗跌打损伤、蛇毒咬伤、风热感冒等[1]。现代药理学分析指出，落新妇根药材中主要有效成分为岩白菜素，对此落新妇根药材质控主要围绕岩白菜素开展[2]。目前，常规中药材质控方法包括薄层色谱鉴别、高效液相色谱法等，通过定性定量分析对药材质量进行有效把控[3]。但临床关于落新妇根药材内岩白菜素质控研究尚少。本文为进一步探索相关质控方法，使用薄层色谱法及高效液相色谱法对落新妇根完成质控研究，以期为相关质控工作提供理论指导，具体如下。

1 材料及设备

美国Agilent 1260高效液相色谱仪，梅特勒电子分析天平，精度为0.1 mg，型号MS105DU；上海超声波仪器厂生产的CQ-250超声清洗器；苏州南光电子科技有效公司提供的XP-213型显微镜；对照品岩白菜素为中国食品药品检测研究院提供；硅胶为青岛海洋化工厂提供；水为实验室自备蒸馏水。以甲醇作为色谱纯，其他各种试剂作为分析纯。落新妇根药材为吉林省地区范围内采集。

2 方法及结果

2.1 落新妇根的薄层色谱鉴别 取10批落新妇根各1 g，研磨至粉末状各置于有塞试管内，每个试管中加入甲醇10 mL，浸泡≥12 h后完成过滤，取适量滤液作为样品溶液，再取岩白菜素对照品，加入适量甲醇配制为0.5 mg/mL溶液，即得对照品溶液。后依照薄层色谱法将对照品溶液及样品溶液各取5 µL，分开点在同一硅胶G薄板上，以三氯甲烷（CHCl3）-乙酸乙酯（C4H8O2）-甲醇（CH3OH）（5∶4∶2）作为展开剂，展开至11 cm后取出，静置晾干后喷以浓度为1%混合溶液[浓度为1%铁氰化钾+浓度为1%三氧化铁（比例1∶1）]进行显色，于正常阳光下检视，观察本次供试品色谱与对照品色谱相同位置均呈现出同样的蓝色斑点。

2.2 供试品溶液制备方法 精密称取样品粉末（过三号筛）0.1 g，置于50 mL量瓶内，加入30%的甲醇适量，超声0.5 h后常规室温下放冷，再加入30%甲醇稀释至刻度，摇匀后，弃去初滤液，收集续滤液，使用滤孔为0.45 µm滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.3 色谱条件 使用日本岛津公司所生产的色谱柱，规格为4.6 mm×150 mm，5 µm，二极管阵列检测器，检测波长设置为275 nm以甲醇-水，比例20∶80为流动相，流速控制为1.0 mL/min，控制柱温30 ℃，进样量控制在20 µL。

2.4 线性关系研究 精密量取岩白菜素对照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、8 mL、10 mL分别置入5个10 mL量瓶内，加30%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取5个量瓶中溶液各20 µL，逐次注入高效液相色谱仪，并逐次完成测定，设峰面积为纵坐标，设对照品浓度作为横坐标完成曲线回归，计算后所获得回归方程为：Y=28159x+50585，r=0.9999，表明在0.025～0.250 mg/mL浓度范围内岩白菜素对照平与峰面积有良好的线性关系。

2.5 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液，进样次数控制为6次，每次进样量保持10 µL，完成测定后求得其峰面积积分值的相对标准偏差为0.43%，表明进样精密度较高。

2.6 稳定性实验 取同一供试品溶液，选取0 h、3 h、6 h、9 h、12 h时间取样10 µL，注入液相色谱分析仪完成含量测定，计算得相对标准偏差为2.1%，表明供试品溶液与在12 h内相对稳定。

2.7 重复性实验 取同一批样品，依照此前2.2中记录供试品制备方法制备6份供试品溶液，测得溶液岩白菜素含量为7.991 mg/g，相对标准偏差为1.8%，表明重复良好。

2.8 加样完成回收率实验 精密称取已确定岩白菜素含量的药材样品10份，各加入岩白菜素对照品1 mg，依照前文2.2中供试品相关制作方法制备所需回收率供试品溶液，其测定结果见表1。2.910批样品含量测定 取10批落新妇根样本以上述2.2所述供试品溶液制作方法制备，测定其岩白菜素含量，具体结果见表2。

表1 本次加样回收试验结果

表2 10批样品含量测定结果

3 讨 论

医药质控作为临床医药质量监督的重中之中，质控环节明确受检药物的有效成分含量是确保该批药材具有临床使用价值，保障患者入院可获得有效治疗的前提。近年来，我国中医药被广泛用于临床，相关中药质控工作越来越受重视[4]。落新妇根作为临床常用中药材，在多种疾病治疗中可起到良好的治疗效果。本药的主要成为岩白菜素，关于本药材的质控活动即需围绕岩白菜素检测开展定性定量研究[5]。

目前，各类药品质控活动中定性定量研究方法较多。如纸层析技术具有快速、简便等优点，在多种中药成分的分离中具良好应用效果；柱层析为去除提取物中糖、矿物质等成分的有效方法；薄层分析则是质控活动中常用于分离药材之中有效成分的传统且普遍的方法之一，也是目前定性分析中主要方法；高效液相色谱法在多种中药有效成分定量分析中有着分析时间短、分辨率高且无热分解的优点；高速逆流色谱法作为一种无载体液液分配色谱，在分离柱内无须加入固态载体，可有效排除载体对分离过程的影响；光谱分析法具有鉴别速度快等优点[6-8]。

落新妇根内有效成分岩白菜素的定性定量研究较少，在如何确定定性定量方法上依然需要深入摸索[9-12]。对此本文以薄层色谱法与高效液相色谱法作为定性定量方法，对岩白菜素进行定性定量分析，结果提示薄层色谱法在落新妇根定性分析中，供试品与对照品均呈现蓝色斑点。本文所采取的展开剂及其他薄层色谱条件较为合理，而薄层色谱法在落新妇根药材岩白菜素的定性分析中具有精准定性效果。

高效液相色谱法是目前应用最广的定量分析方法。相关文献在关于岩白菜素的高效液相色谱法的研究中指出，对比30%乙醇、95%乙醇、60%甲醇，浓度在30%的甲醇作为提取溶剂可获得最佳检测效果，在此条件下检测的岩白菜素含量较其他提取溶剂显著更高。本次研究遂采用30%甲醇作为提取溶剂进行定量分析，而在检测波长的选取环节，岩白菜素药典内推荐波长为275 nm，经研究验证在此波长处岩白菜素达到最大吸收，遂选取275 nm为本次检测波长。后续实验环节依次进行精密度实验、稳定性实验、重复性实验、回收率实验，实验结果提示为本次所用定性定量分析法具有较高准确性、可重复性、回收率高的优点。

综上所述，在落新妇根岩白菜素的定性定量分析中，采用薄层色法及高效液相色谱法具有多重优点，具体操作方案可以本次操作方法为指导，用于落新妇根药品质量监控。