高速离心法消除脂血对临床常规生化检测项目的干扰分析

李宜铮，李丽莉，薛云松，周林华，李增安，王 芳，罗翔燕

云南省第二人民医院检验科，云南昆明 650000

影响临床生化实验室检测结果失真的常见检验前因素有标本溶血、脂血(乳糜血)、标本稀释、标本类型错误等，及时识别出检测的干扰因素并采取合适的应对措施对保证检测结果的可靠性具有重要意义。脂血是临床生化检验中常见的导致标本不合格的因素之一，不同程度的脂血会对生化检测结果造成不同的影响[1]。患者机体代谢原因及注射脂肪乳等都会造成脂血标本，因此，不同于其他不合格标本，往往退回重采标本的措施也无法避免脂血标本发生。在日常检验工作中，消除脂血对常规生化结果的影响具有实际意义。本研究采用高速离心法处理脂血标本，探讨高速离心前后常规生化项目检测结果是否有差异。

1 材料与方法

1.1标本来源 从2020年1-8月本院收治的患者中收集50份脂血标本，血清外观为乳白色，三酰甘油>16.05 mmol/L(试剂说明书的检测上限)，标本管为黄色血清管(含分离胶，无促凝剂)。

1.2仪器与试剂 雅培C-16000全自动生化分析仪、湘仪CTK120C自动脱盖离心机、湘仪H1850高速离心机。总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)检测试剂均为美国雅培制药有限公司产品(批号分别为36010UN19、36010UN19、41367UN19、54975UN19、51891UN19、33533UN19、28802UN19、55718UN19)，前清蛋白(PA)、总胆汁酸(TBA)、尿素氮(UREA)、载脂蛋白A1(APOA1)、载脂蛋白B(APOB)检测试剂均为中生北控生物科技股份有限公司产品(批号分别为92637098、92685089、92618098、92651133、926532133)，总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)检测试剂均为日本和光纯药工业株式会社产品(批号分别为ER325、ER330)，肌酐(CREA)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂蛋白a(LPa)检测试剂均为积水医疗科技(中国)有限公司产品(批号分别为844RLQ、838RKQ、840RLQ、829RHQ)。

1.3检测项目 检测项目包括TP、ALB、PA、TBIL、DBIL、TBA、AST、ALT、ALP、GGT、UREA、UA、CREA、GLU、HDL-C、LDL-C、APOA1、APOB、LPa共19项指标。

1.4检测方法 仪器参数设置按照仪器和试剂说明书进行。质控品为伯乐生命医学产品(上海)有限公司多项生化质控品，包括中值(批号45832)和高值(批号45833)两个水平，检测当天仪器状态正常，本研究检测项目的质控结果均在控，无失控和警告。收集门诊和住院部患者生化检测标本，常规离心后进行检测，再将脂血血清高速离心后取下层清亮血清检测相同项目，整个过程在2 h内完成。将标本管置于离心机，3 500 r/min常规离心法离心10 min，分离血清测定。高速离心法将常规离心后的血清分离至EP管中，15 000 r/min离心10 min，弃去上层悬浮的脂质，吸取下层的清亮血清进行测定。HDL-C、LDL-C检测原理为直接法，APOA1、APOB、PA检测原理为免疫比浊法，LPa检测原理为胶乳凝集比浊法，TP检测原理为双缩腺法，ALB检测原理为漠甲酚绿法，AST、ALT检测原理为速率法，GGT检测原理为左旋-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺底物法，ALP检测原理为磷酸对硝基苯法，TBIL、DBIL检测原理为钥酸氧化法，TBA检测原理为循环酶法，UREA检测原理为酶耦联速率法，UA检测原理为尿酸酶法，CREA检测原理为酶法，GLU检测原理为己糖激酶法。

2 结 果

高速离心法离心后，APOA1、APOB、LPa、TP、ALB、PA、DBIL、UA、CREA、GLU的检测结果与常规离心法离心后检测结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。而两种不同离心方法离心后的HDL-C、LDL-C、AST、ALT、GGT、ALP、TBIL、TBA、UREA检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两种离心方式的生化项目检测结果比较

离心方法PA(mg/L)AST(U/L)ALT(U/L)GGT(U/L)ALP(U/L)TBIL(μmol/L)常规离心法11.29±3.1135.02±21.0933.41±4.5583.55±18.5486.28±28.1811.87±2.13高速离心法284.59±47.4034.8±21.3234.53±3.9783.37±17.7386.04±28.5014.24±6.19P<0.0010.3710.2850.5160.2940.154

离心方法DBIL(μmol/L)TBA(μmol/L)UREA(μmol/L)UA(μmol/L)CREA(μmol/L)GLU(mmol/L)常规离心法3.98±1.295.19±2.534.89±1.36399.37±109.4672.06±22.557.28±3.37高速离心法4.64±1.285.19±2.594.91±1.35412.82±112.6874.63±22.787.44±3.40P<0.0010.9110.121<0.001<0.001<0.001

3 讨 论

常规生化检验(肝功、肾功、血糖、血脂)是临床医生在为门诊和住院患者诊疗过程中开具的最常见检验项目。近年来，随着人民群众生活水平的提高，由于饮食摄入过多脂质和代谢紊乱造成的高脂血症患者不断增加，在日常检验工作中血清外观呈“奶白色”的乳糜血越来越常见。同时，某些需要静脉注射脂肪乳的患者也会出现类似问题。当标本中三酰甘油水平过高，外观表现为奶白色时，其中的大量乳糜微粒(CM)会对入射光产生散射，对生化项目检测结果产生影响，甚至导致出现负值结果或无法测出结果[2-3]，需要检验人员给予额外关注以消除干扰。临床实验室常用的几种消除脂血对检测结果影响的方法包括生理盐水稀释法、高速离心法、有机溶剂(乙醚)抽提法、干化学法[1-5]。生理盐水稀释法对于结果正常或检测值较低的项目会产生较明显的误差，通常只适用于对总三酰甘油和总胆固醇进行低倍数(3倍)稀释后检测。乙醚抽提法会对部分项目的检测过程产生干扰[5]，并有可能对实验室工作人员的健康产生不利影响，而且乙醚属于危险化学品，在安全储存方面也有额外的要求。干化学法消除脂血对检测结果的影响效果比较明显，但需要实验室额外购置相应的仪器，且干化学法检测成本较高，实验室需增加预算，同时还需要进行仪器间比对等工作。高速离心法操作简单、快速，能较好地满足临床生化实验室的日常工作需求。本研究针对TP、ALB、PA、TBIL、DBIL、TBA、AST、ALT、ALP、GGT、UREA、UA、CREA、GLU、HDL-C、LDL-C、APOA1、APOB、LPa共19项指标，比较常规离心法和高速离心法离心后的检测结果，分析高速离心法对消除脂血对常规生化检验项目的影响所具有的实用价值。

本研究结果显示，APOA1、APOB、LPa、TP、ALB、PA、DBIL、UA、CREA、GLU这10项指标在高速离心法离心后检测结果均有变化，与常规离心法比较，差异有统计学意义(P<0.05)。而高速离心法离心后HDL-C、LDL-C、AST、ALT、GGT、ALP、TBIL、TBA、UREA的检测结果无明显变化，与常规离心法离心后检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，提示高速离心法降低脂血标本中CM的干扰后，对保证部分生化检测结果准确性有一定意义。从各项目检测的方法学可看出，脂血对免疫比浊法的检测结果有明显干扰，颜彦等[6]的研究也得出同样的结论。另外，TP、ALB、GLU这3项为单试剂单波长的检测项目，高速离心法离心后检测结果与常规离心法离心后检测结果比较，差异也有统计学意义(P<0.05)，提示可能是单试剂检测对脂血的抗干扰能力较弱。本研究结果与部分文献报道结果稍有区别[7-10]，可能的影响因素有：(1)各个研究使用的检测系统不尽相同，仪器和试剂的性能参差不齐，干扰机制和抗干扰能力也有较大差异；(2)对脂血标本的高速离心程序没有标准化，处理过程不够详尽；(3)本研究所选取的50份脂血标本(常规离心法离心后血清乳白色，检测三酰甘油>16.05 mmol/L)属于高度脂血标本，与轻度脂血、中度脂血标本结果可能有差异。

高速离心法处理脂血操作性强，简便易行，对消除脂血对部分生化检测项目的干扰有较好的实用价值，对保证临床实验室检测结果的可靠性有帮助。在临床实验室的日常工作中，许多情况下无法简单地将脂血标本判定为不合格标本而退回标本，重新采集标本，例如，由于患者自身病理状态造成的脂血、部分急诊患者需要评估当前的机体指标、门诊患者采血后无法召回时，检验人员只能使用现有条件对标本进行处理后以发出相对准确的检测报告[8-9]，高速离心法处理脂血标本不失为一个简单实用的方法。另外，分析脂血标本对不同生化检测项目的干扰程度，对比不同的仪器、试剂和检测方法(包括波长、反应杯材质、吸光度或浊度的检测间隔时间等)对检测结果的影响，能够给日常检验工作提供更多的参考价值，如实验室在选择检测系统时对其抗干扰的能力给予额外的关注，实验室可根据自身情况配置2套或以上不同检测原理的检测系统，以便减少干扰，同时实验室还应针对在用检验系统的性能，加强对工作人员相关操作能力的培训[10]。在自动化程度越来越高的流水线检测系统中，通过对检测结果的综合分析，识别出受到干扰的标本进行复检，对临床诊疗过程十分重要。检验人员应对检验前质量控制的重要性提高认识，建立规范、合理、高效的标准化处理流程，及时将脂血标本识别出来，以减少其对检测结果的干扰，为临床提供更准确的报告。