艾条灸和雷火灸对原发性痛经大鼠扭体反应及血清PGF2α含量影响的对比研究

罗秋平，朱东发，刘川，唐茂林，潘莉

（贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025）

0 引言

痛经是指与经期相关的小腹疼痛、坠胀及伴有腰酸的妇科症状，分为原发性痛经和继发性痛经[1]。原发性痛经（primary dysmenorrhea, PD）的临床检查生殖系统无器质性病变，前列腺素（prostaglandin,PG）水平升高是主要异常改变[2]。PD的发病率高，占痛经的90%[1]，其周期发作的特点给患者带来了巨大的精神压力及生活负担。艾条灸可有效缓解原发性痛经症状，主要通过热效应发挥温通止痛的疗效，操作简便，价格低廉[3]。雷火灸作为灸法中的一种，与普通艾条灸相比，同等条件下的平均热力比普通艾条灸高出10℃以上[4]，同时雷火灸可产生红外效应可以更好地起到温经通络止痛的目的[5]。因此，本研究将专门针对原发性痛经人群，建立实验性痛经动物模型，观察普通艾条灸与雷火灸对原发性痛经大鼠动物模型扭体反应及血清PGF2α含量影响的疗效差异，为临床使用雷火灸治疗原发性痛经提供参考和依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

本实验采用清洁级SD雌性大鼠，性成熟、未交配体，体质量约为（240±20）g，购自斯贝福（北京）生物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）2018-0012。饲养在温度为（23±1）℃，相对湿度为（45±5）%环境中，期间日光灯光照，12h/12h昼夜交替，普通清洁级大鼠饲料，自由饮水。整个实验过程严格有关动物使用以及伦理学规定进行操作。大鼠适应性喂养1周后，通过阴道涂片美蓝染色，确定大鼠的动情周期阶段。将处于动情间期的32只大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、雷火灸组，每组8只。

1.2 实验材料与仪器

艾条（贵州安迪药械有限公司），雷火灸条（湖北博康医药科技有限公司），己烯雌酚注射剂（天津金耀药业有限公司），缩宫素注射液（马鞍山丰原制药有限公司），PGF2α酶联免疫吸附测定试剂盒（伊莱瑞特生物科技有限公司）；离心机(Thermo Fisher Scientific，美国)；多功能酶标仪 (Molecular Devices，美国 )；低温冰箱（DW-86L386，青岛 Haier集团）。

1.3 造模方法

按参考文献[6-8]方法进行大鼠痛经模型制备。除正常组外，其余各组采用己烯雌酚结合注射缩宫素法制备原发性痛经大鼠模型。即皮下注射己烯雌酚，第1天及第10天每日注射0.5mg/只，第2天至第9天每日注射0.2mg/只，正常组皮下注射等量0.9%氯化钠溶液。模型组及艾灸组、雷火灸组于末次治疗1h后，腹腔注射缩宫素2U/只，正常组腹腔注射等体积生理盐水。

1.4 治疗方法

艾灸组采用普通清艾条灸、雷火灸组使用雷火灸条，进行灸法治疗，每日1次、每次15min，连续10天。大鼠穴位定位依据余曙光、徐斌《实验针灸学》[9]大鼠取穴标准，关元：脐下约25mm处腹中线上，仰卧取位；三阴交：后肢内踝尖直上10mm；太冲：后肢足背第1第2跖骨间凹陷处。参考文献[10]艾灸方法：先将大鼠关元、三阴交、太冲处毛去除，艾灸组点燃艾条放置在离大鼠皮肤2-3cm处，每穴灸15min，雷火灸组点燃雷火灸条放置在离大鼠皮肤2-3cm处，每穴灸15min。正常组、模型组同样抓取但不做治疗。

1.5 观察指标及检测方法

扭体反应观察[11]：最后一次治疗后1h，除空白组外，其余各组大鼠腹腔注射缩宫素2U/只，注射缩宫素后立即开始计时，记录 30 min 内每只大鼠的扭体次数。

血清中PGF2α含量检测：扭体反应观察后的大鼠，注射2%戊巴比妥钠进行麻醉，于腹主动脉取血6-8mL，将取到的血液静止2h，3500r/min离心10min，取血清，放于-80℃冰箱，待检。用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中的PGF2α水平表达情况。严格按试剂盒说明书步骤进行操作。

1.6 统计方法

2 结果

2.1 对原发性痛经大鼠扭体反应的影响

除正常组外，30min内其余各组均有扭体反应；与正常组相比，模型组大鼠扭体次数明显增多（P<0.01）；与模型组相比，艾灸组和雷火灸组大鼠扭体次数明显减少（P<0.01）；雷火灸组大鼠扭体次数少于艾灸组。见表1。

表1 各组大鼠30min内扭体次数比较（±s）

表1 各组大鼠30min内扭体次数比较（±s）

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，P<0.01。

组别 数量（n） 30min内扭体次数正常组 8 -模型组 8 17.88±1.69**艾灸组 8 9.88±1.11##雷火灸组 8 8.38±1.73##

2.2 各组大鼠血清PGF2α含量变化比较

与正常组相比，模型组大鼠血清PGF2α含量显著升高（P<0.01）；与模型组相比，艾灸组和雷火灸组大鼠血清PGF2α含量显著降低（P<0.01）；雷火灸组大鼠血清PGF2α含量少于艾灸组。见表2。

表2 各组大鼠血清中PGF2α含量比较（pg/mL，±s）

表2 各组大鼠血清中PGF2α含量比较（pg/mL，±s）

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01。

组别 例数n 前列腺素PGF2α(pg/mL)正常组 8 106.25±5.36模型组 8 201.25±7.19**艾灸组 8 157.50±6.50##雷火灸组 8 148.63±7.12##

3 讨论

原发性痛经在中医属“经行腹痛”，痛证的发作病因分为“不通”及“不荣”。“不通”者实，胞宫气血运行不畅，与气滞、血瘀、寒凝等有关；“不荣”者虚，冲任胞宫失于濡养，与气血不足等有关，大多数患者的痛经发作与“不通”关系密切，其中辨证为寒凝证占大多数[12]。基于经络腧穴理论，本研究中选取的关元、三阴交及太冲为原发性痛经的高频用穴[13]，关元为任脉与足三阴经交会穴，属近部取穴，有培元固本，温通胞脉的疗效，现代研究中，关元穴与子宫的传入神经纤维有密切的神经基础联系[14]。三阴交是足肝脾肾三阴经的交会穴，可同时三经气。月经以血为基础，气为血之帅，血为气之母，调经则需气血通调，太冲为肝经的原穴，有理气活血的作用。

扭体反应主要指观察大鼠腹部收缩向内陷，躯干与后肢呈伸展状态，臀部与单侧肢体内旋情况，可用于代表痛经大鼠的疼痛症状[7]，是本研究成功制备痛经模型的依据，同时可反映治疗后疼痛的改善情况，作为行为学指标。本研究中，模型组、艾灸组、雷火灸组的每分钟扭体反应客观地反映了模型制备成功，而治疗后与模型组比较，艾灸组、雷火灸组的扭体反应次数明显减少；且雷火灸组扭体次数少于艾灸组，这表明雷火灸与传统艾条灸均可有效改善原发性痛经的疼痛症状，而雷火灸的疗效更优。

目前认为原发性痛经发生的主要原因是前列腺素增多，前列腺素主要包括PGE2和PGF2α。PGF2α的受体位于螺旋小动脉壁上，高浓度的PGF2α在经期时使子宫平滑肌收缩痉挛，减少子宫血流，子宫因此而缺血，盆腔神经末梢受到化学、物理刺激，痛阈降低出现痛经[2]。因此子宫血流情况是痛经发作的关键环节。有研究证实，灸法可降低原发性痛经患者的血清PGF2α含量从而改善痛经症状[15]，主要通过对穴位进行温热刺激达到改善子宫微循环的作用[16]，同时灸法的温度越高，镇痛效应越好[17]。本实验研究结果示，艾条灸和雷火灸均可有效减少大鼠血清中PGF2α水平，而雷火灸的减少情况更优。这说明雷火灸在艾绒的基础上多加了沉香、木香、干姜等药物，丰富的药力因子使雷火地发挥了高温及红外照射的优势，通过减少大鼠血清PGF2α水平，抑制子宫平滑肌收缩痉挛，改善子宫微循环，从而达到更好的止痛效果。

综上，传统艾灸及雷火灸均能缓解原发性痛经的症状与发病，但雷火灸药物产生的热辐射及红外照射的温热作用能较明显减少大鼠血清中前列腺素PGF2α水平，表现出较强的镇痛疗效。可进一步开展雷火灸对于治疗原发性痛经的其他证型及改善原发性痛经其他相关客观指标的研究，从而进一步增加雷火灸法治疗原发性痛经的科学依据。