Geminin表达水平与脑胶质瘤病人预后的关系

王孝安 陈一楠 程传东 计 颖

胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤，复发率高，病死率高，预后差[1]。Geminin表达失衡参与多种肿瘤病理过程[2～4]。研究报道Geminin 表达水平与胶质瘤病理分级相关[5]。本文探讨Geminin 表达水平与脑胶质瘤病人预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2014 年1 月～2017 年1 月手术切除经术后病理证实的脑胶质瘤标本90 例。纳入标准：术后病理证实为胶质瘤；临床资料完整。排除标准：既往脑部手术史；往脑卒中、颅脑损伤病史，合并其他神经系统疾病；术前放、化疗史；术后随访期因胶质瘤以外原因死亡。同时取50 例同期因颅脑损伤内减压术中切除非肿瘤脑组织作为对照组。

1.2 Geminin mRNA 水平的测定 采用荧光定量PCR法测定Geminin mRNA表达量。使用Trizol试剂提取总RNA，采用逆转录试剂盒反转录为cDNA。以cDNA为模板配置PCR反应体系并以U6作为内参进行PCR 扩增。Geminin 上游引物5'-TCGAAGCTAAGCGCTAGCG-3'，下游引物5'-TCGAACGTAATCGATGCT- 3'；U6 上 游 引 物5'- TCGAACGTAAGCTGAGCTG-3'，下游引物5'-TCGAACGTAGCAAGCTGAG-3'。PCR 反应条件为：94 ℃变性15 s、60 ℃退火30 s，45个循环；72 ℃延伸5 min。以2-△△Ct法进行量化分析。根据脑胶质瘤组织Geminin mRNA 表达水平中位数分为高表达组和低表达组。

1.3 术后随访 随访时间截止2020年1月1日或者病人死亡，包括门诊、电话随访等，记录生存情况。

1.4 统计学方法 应用SPSS 19.0软件进行分析；计量资料以±s表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验；采用多因素Cox比例回归风险模型分析死亡的影响因素；采用Kaplan-Meier曲线分析Geminin mRNA表达水平与胶质瘤病人生存期的关系；P＜0.05 为差异有统计学意义

2 结果

2.1 脑胶质瘤组织Geminin mRNA 的表达水平 脑胶质瘤组织Geminin mRNA 表达水平（1.19±0.35）明显高于非肿瘤脑组织[（0.87±0.20）；P＜0.05]。

2.2 随访结果90 例胶质瘤病人随访32～55 个月，中位随访时间41 个月。随访期间，死亡80 例，存活10例。

2.3 脑胶质瘤术后死亡的影响因素 单因素分析结果显示，性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、术前KPS评分与病人死亡无明显关系（P＞0.05，表1），而WHO分级、肿瘤切除程度、术后治疗方法、Geminin mRNA表达水平与病人死亡有关（P＜0.05）。多因素Cox 比例回归风险模型分析结果显示，WHO分级Ⅲ～Ⅳ级、肿瘤未全切除、Geminin mRNA高表达是脑胶质瘤术后死亡的独立危险因素（P＜0.05，表2），而术后放化疗是脑胶质瘤病人术后存活的保护性因素（P＜0.05，表2）。

表1 本文90例胶质瘤术后死亡危险因素的单因素分析（例）

表2 本文90例胶质瘤术后死亡危险因素的多因素Cox比例回归风险模型分析（例）

2.4 Geminin mRNA 表达水平与脑胶质瘤病人生存期的关系Kaplan-Meier 生存曲线显示，低表达组中位生存期较高表达组明显延长（P＜0.05，图1）。

图1 Kaplan-Meier 曲线分析Geminin mRNA 表达水平与胶质瘤病人生存期的关系

3讨论

胶质瘤的发生、发展是复杂的多因素过程，可能涉及多个基因的表达变化，因此，探讨对胶质瘤发展及治疗结局具有重要作用的分子及其作用机制具有重要的临床意义。本文结果显示，脑胶质瘤组织Geminin 呈高表达，是病人术后死亡的独立危险因素；Geminin高表达的胶质瘤病人生存期明显缩短。

Geminin 对细胞周期时相中重要事件具有调节作用，如对DNA 复制、中心体复制以及神经发育的调控[2，6]。在正常细胞中，Geminin 与Cdt1 联合调控细胞周期[7，8]。研究发现抑制Geminin 表达，可通过DNA 损伤介导的细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖[9]。Arbi等[3]发现Geminin是细胞器中心体扩增的主要调控因子，推测Geminin 通过扩增细胞中心体，促进脑胶质瘤细胞增殖。田薇等[5]报道Geminin 在脑胶质瘤组织中异常表达，与病理级别有关。本文结果显示Geminin可作为脑胶质瘤手术预后评估指标。

总之，脑胶质瘤组织Geminin 呈高表达，是影响病人生存结局的独立危险因素。这提示Geminin 可能是脑胶质瘤发生机制探索及治疗的新靶点之一。