荷叶方中药酵素体外降血脂活性研究

惠洁，张存莉

（1.西北农林科技大学，陕西杨凌 712100；2.延安职业技术学院，陕西延安 716000；3.陕西五丁生物科技有限公司，陕西汉中 724400）

食用植物酵素是以食品加工的植物为主要原料，添加或不添加辅料，经微生物发酵，制成的一种含有特定生物活性成分可供人类食用的酵素产品［1］。食用植物酵素富含大量短链脂肪酸、淀粉酶、超氧化物歧化酶、乳酸、醋酸及少量乙醇等代谢产物和酚类、黄酮类等生物活性成分［2-4］，具有清除自由基、抗氧化、抑菌、解酒护肝、润肠通便、调节免疫、促进新陈代谢及净化血液等生理功能[5-7]。发酵食物对健康有益，不仅可以改变原料的营养成分，促进生物活性化合物的生物合成，还可以优化人体肠道微生物菌群，提高免疫力[8]。

本研究以谭芳等人[9]提出的改善痰湿体质的药膳方组方荷叶方为原料，采用乳酸菌和酵母菌先后发酵的方式发酵荷叶方浓缩液，利用胆酸盐结合试验对荷叶方中药酵素的体外降血脂活性进行研究，为荷叶方的进一步开发利用提供理论依据，为寻找廉价的药食同源植物活性物辅助高脂血症的治疗和预防提供研究思路。

1 材料与方法

1.1 试验材料

荷叶、陈皮、山楂，市售。

1.2 试剂与仪器

葡萄酒高活性干酵母，安琪酵母有限公司；乳酸菌（植物乳杆菌）、醋酸菌，台湾亚芯生物科技有限公司；甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、考来烯胺，国药集团。

LDZX-50KBS 型高压灭菌锅，上海申安医疗器械厂；UV-1801 型紫外分光光度计，日本岛津公司；ME204E/02 型精密和分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；SW-CJ-2FD 型超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；DHP-9052B 型电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司；BPG-9056A型精密鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；TG16-W 型微量高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 荷叶方中药酵素的制备

取荷叶、陈皮、山楂，配伍质量比例为10 ∶5 ∶5，按适当比例加水蒸煮，将活化好的乳酸菌、酵母菌醋酸菌先后接种到待发酵液中进行发酵。

1.3.2 体外降血脂活性研究

参照钱雅雯等人[10]的测定方法，先分别绘制甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐的标准曲线。配置甘氨胆酸钠 标 准 溶 液（0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、2.0 μg/mL、2.5 μg/mL）和牛磺胆酸钠 标 准 溶 液（0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、1.5 μg/mL、2.0 μg/mL、2.5 μg/mL）。取不同浓度的标准溶液2 mL 分别置于不同具塞试管中，精密加入质量分数为60%的硫酸溶液8 mL，混匀，70 ℃水浴加热20 min，迅速冰浴5 min 后，紫外可见分光光度法于387 nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，胆酸盐含量为横坐标，绘制甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐的标准曲线。

分别移取3 mL 样品两份，考来烯胺（1 mg/mL）3 mL 两份于4 个100 mL 三角瓶中，每个三角瓶分别加入胃蛋白酶溶液（10 mg/mL）3 mL 和的HCl 溶液（0.01 mol/L）1 mL，在37 ℃的恒温振荡器内振荡1 h（模拟胃消化环境），用NaOH 溶液（0.1 mol/L）调节pH 至6.3。随后，加入胰蛋白酶溶液（10 mg/mL）4 mL，37 ℃下恒温振荡器振荡1 h（模拟肠道环境），一份样品三角瓶中加入甘氨胆酸钠（0.4 mmol/L）4 mL，一份考来烯胺中加入甘氨胆酸钠（0.4 mmol/L）4 mL；另一份样品三角瓶中加入牛磺胆酸盐（0.5 mmol/L）4 mL，另一份考来烯胺溶液中加入牛磺胆酸盐（0.5 mmol/L）4 mL。在37 ℃的恒温振荡器内振荡1 h，于4 000 r/min 离心20 min，取上清液，用比色法于387 nm 处测定吸光度值，每个样品平行测定3 次，按照标准曲线计算剩余甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐含量，所加入甘氨胆酸盐或牛磺胆酸盐总量减去剩余量所得差值与总量的比值即为结合率，以百分比表示。计算公式如式（1）所示。

2 结果与分析

2.1 甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠的标准曲线

如图1 所示，甘氨胆酸钠标准曲线为y=0.510 6x+0.033 5（R2=0.999），线性关系良好；牛磺胆酸钠标准曲线为y=0.464 4x+0.100 0（R2=0.993），线性关系良好。

图1 甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠标准曲线

2.2 荷叶方中药酵素体外降血脂活性分析

荷叶方中药酵素发酵前后及考来烯胺（1 mg/mL）与甘氨胆酸钠和牛黄胆酸钠的结合率如图2 所示。从图2 可知，荷叶方发酵前与甘氨胆酸钠结合率为55.08%，发酵后结合率达到63.53%，增加了0.15 倍；考来烯胺（1 mg/mL）结合率为45.41%。发酵前与牛磺胆酸钠的结合率为36.39%，发酵后结合率达到63.51%，结合率增加了0.75 倍；考来烯胺（1 mg/mL）结合率为34.17%。结合率越高，说明其降胆固醇的效果越好，这也证实了荷叶方中药酵素具有较好的体外降血脂活性。

图2 荷叶方中药酵素发酵前后及考来烯胺（1 mg/mL）与胆酸盐的结合率

3 结论

荷叶方经微生物发酵后与甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠的结合率均得到提高，且高于考来烯胺（1 mg/mL）与胆酸盐的结合率，具有较好的体外降血脂活性。