HIF-1α在肝细胞癌组织中的表达及意义

李红全 谭超华 李立 李成之 刘灿辉

肝细胞癌在世界范围内恶性肿瘤相关性致死因素中位居第三位，是临床常见的恶性肿瘤之一[1]。我国每年因肝细胞癌死亡的人数约有11万，肝细胞癌因肝外转移、肝内扩散、肿瘤侵袭，目前缺少有效的治疗措施。缺氧诱导因子-1（HIF-1）主要由α、β两个亚基组成，可介导病理性和生理性低氧性反应的关键性转录因子[2]。当氧分压处于正常范围内，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）可对癌变基因VHL产物p-VHL的形成进行抑制，进而诱发生成泛素型多聚体，出现水解。本研究选择2017年6月-2020年6月在笔者所在医院接受诊治的50例肝细胞癌患者，分析肝细胞癌组织中HIF-1α的表达及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年6月-2020年6月在笔者所在医院接受诊治的50例肝细胞癌患者设为研究组，纳入标准：符合世界卫生组织制定的肝细胞癌的诊断标准[3]；经临床病理学检查、影像学资料、临床特征确诊；均未予以放化疗治疗。其中男26例，女24例；年龄42～74岁，平均（56.8±3.1）岁；淋巴结转移26例；肝细胞癌分化程度：高分化24例，中分化14例，低分化12例。选择同期于笔者所在医院体检的50例健康者设为对照组，其中男25例，女25例；年龄42～74岁，平均（56.7±3.0）岁。两组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。本研究获得医院伦理委员会批准，研究对象均对本研究知情同意。

1.2 方法

HIF-1α检测：肝组织标本经福尔马林固定、乙醇脱水、二甲苯透明和石蜡包埋，全部标本做成连续病理切片，厚5 μm，65 ℃烤片2 h备用。二甲苯Ⅰ、Ⅱ各20 min脱蜡，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各6 min去除二甲苯。经免疫组织化学染色，PBS冲洗5 min；3%双氧水予以10 min封闭，抗原修复予以PBS沸腾法，10%山羊血清为封闭液，加入稀释较佳的一抗（1∶500），室温下孵育24 h；PBS冲洗液冲洗5 min后予以免疫组织化学试剂盒予以染色。试剂：上海麦生物代购HIF-1α鼠单抗（Abcam）、IHC试剂盒（Vector）。

1.3 观察指标及评价标准

比较两组HIF-1α阳性表达情况及表达量。分析肝细胞癌临床病理特征与HIF-1α阳性表达的关系。

切片染色阳性标准为棕黄色、淡黄色。强阳性（+++）：阳性细胞超过50%；阳性（++）：阳性细胞为25%～50%；弱阳性（+）：阳性细胞为1%～25%；阴性（-）：阳性细胞低于1%[4]。

1.4 统计学处理

本研究数据采用SPSS 19.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组HNF-1α阳性表达情况比较

研究组HIF-1α强阳性率、阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 两组HIF-1α阳性表达比较 例（%）

2.2 两组HNF-1α表达量比较

研究组HIF-1α阳性细胞为（64.7±5.5）%，高于对照组的（25.8±1.1）%，两组比较差异有统计学意义（t=49.04，P<0.05）。

2.3 肝细胞癌临床病理特征与HIF-1α阳性表达的关系

肝细胞癌中、低分化的患者HIF-1α阳性率显著高于肝细胞癌高分化的患者，差异有统计学意义（P<0.05）。肝细胞癌发生淋巴结转移的患者HIF-1α阳性率显著高于无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 肝细胞癌临床病理特征与HIF-1α阳性表达的关系 例（%）

3 讨论

约有90%的原发性肝癌为肝细胞癌，主要进行免疫、化疗、放疗为主的综合治疗方式，但晚期肝细胞癌常因肿瘤细胞扩散转移，临床治疗难度较大，预后较差。我国每年肝细胞癌的死亡人数高达11万左右，肝细胞癌的早期诊治、肿瘤标志物的表达水平对于评估肝细胞癌的进展、预后具有重要的临床价值。本研究观察了肝细胞癌组织中HIF-1α的阳性表达情况及临床意义。结果显示，研究组HIF-1α强阳性率、阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组HIF-1α阳性细胞为（64.7±5.5）%，高于对照组的（25.8±1.1）%，差异有统计学意义（t=49.04，P<0.05）；肝细胞癌中、低分化的患者HIF-1α阳性率显著高于肝细胞癌高分化的患者，差异有统计学意义（P<0.05）。肝细胞癌发生淋巴结转移的患者HIF-1α阳性率显著高于无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义（P<0.05），与谭松等[5]的研究结果基本一致。恶性肿瘤的病理发展过程的关键为生成肿瘤血管及肿瘤细胞对低氧的适应性。HIF-1是机体和哺乳动物中的转录因子，是异源二聚体核转录因子，由HIF-1α、HIF-β两个亚单位构成，其中HIF-1α为氧功能亚基、调节亚基，可对各种靶基因的表达进行调节[6]。在恶性肿瘤的低氧反应过程中，HIF-1α可促进癌细胞的转移、增殖，刺激生成肿瘤新生血管，维持肿瘤细胞代谢能量[7]；肝细胞癌的主要特征为肿瘤细胞的生长调控难度较大，癌细胞数目骤增，耗氧量升高，肿瘤病灶组织极易生成缺氧性微环境[8]。HIF-1α为缺氧型依赖因子，在肝细胞癌内出现广泛的阳性表达，可能与下述因素密切相关：Ser癌变基因的激活、P53癌变基因的失活等；病理组织血流动力学发生紊乱、结构异常，肿瘤细胞处于缺氧性微环境[9-10]；肝脏组织发生缺氧、缺血状态促使HIF-1α表达水平增高[11-12]。同时当肿瘤病灶组织体积较大时，极易生成新生血管，而HIF-1α的主要靶基因为血管内皮生长因子（VEGF），可刺激生成新生血管，诱发肝细胞癌转移。HIF-1是具有转录活性的核蛋白，具有相当广泛的靶基因谱，其中包括与缺氧适应、炎症发展及肿瘤生长等相关的近100种靶基因。当其与靶基因结合后，通过转录和转录后调控使机体产生一系列反应，有些反应尽管带有适应代偿性质，但也常给机体带来病理性损害，肿瘤加速生长等。

综上所述，肝细胞癌组织中HIF-1α阳性率及阳性细胞表达量均较高，同时与肝细胞癌淋巴结转移、肿瘤分化程度密切相关。