喉癌患者癌组织P53 Cdc2蛋白与放疗预后的关系

刘祥鹏 陈佳文 曹春华 江丽仕

喉癌是临床上发病率较高的恶性肿瘤，病理类型以鳞癌为主。喉癌病因复杂，普遍认为与吸烟、饮酒、空气污染、病毒感染及性激素等有关，影响患者生存情况。P53是人体的抑癌基因，既往研究表明，P53蛋白在喉癌患者中表达异常，其阳性率与疾病严重程度有关，亦与喉癌复发相关。Cdc2是细胞中的周期调节基因，当Cdc2表达水平异常或紊乱后，会引起细胞异常分化并引起癌变。目前喉癌在临床上仍缺乏有效的治疗方法，基于P53、Cdc2蛋白在喉癌的发生、发展中发挥的重要作用，其有望成为喉癌治疗的新靶点。本研究探讨喉癌患者P53、Cdc2蛋白的表达情况及其与放疗预后的关系，旨为喉癌治疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年5～12月郴州市第一人民医院收治的喉癌患者160例，其中男85例，女75例；年龄43～72岁，平均(58.67±5.39)岁；身体质量指数20～26 kg/m，平均(23.15±2.41)kg/m；肿瘤部位：声门上型41例，声门型101例，声门下型18例；病理分级：高分化67例，中分化71例，低分化22例；肿瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期94例，Ⅲ～Ⅳ期66例。

纳入标准：符合喉癌诊断标准，均经病理确诊；病灶标本与正常组织标本完整；患者均进行了放射治疗，随访资料完整。排除标准：行放化疗、生物免疫治疗者；精神异常、应激反应强烈或伴有凝血功能异常者；伴有全身感染性疾病或妊娠期哺乳期者。

1.2 方法 比较所有患者病灶组织及癌旁正常组织(距离病灶≥3 cm)P53、Cdc2蛋白表达的差异；同时比较不同性别、年龄(≥60岁、<60岁)、肿瘤直径(≥3 cm、<3 cm)、分化类型(高分化、中分化、低分化)、肿瘤分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、肿瘤部位(声门上型、声门型、声门下型)等患者P53、Cdc2蛋白阳性率的差异；患者行放射治疗后随访24个月，统计其复发、转移及死亡情况，并对P53、Cdc2蛋白表达情况与预后进行相关性分析。

1.3 P53、Cdc2蛋白检测及阳性标准 采用免疫组织化学法测定病灶组织、正常组织中P53、Cdc2蛋白阳性率。判定标准：参考半定量方法对结果进行判读，对每个切片常规取5个不同的高倍视野，分别从阳性细胞百分率(1～4分)、阳性强度(0～3分)等方面进行评分，将细胞阳性率与染色强度相乘，阴性(-)为0分，弱阳性(+)为1～2分，中度阳性(++)为3～5分，强阳性(+++)为6～8分。

2 结果

2.1 患者病灶组织与正常组织P53、Cdc2蛋白阳性率比较 160例患者中，病灶组织P53、Cdc2蛋白阳性率分别为92.50%(132/160)、80.0%(128/160)，高于正常组织的19.38%(31/160)、23.13%(37/160)，差异有统计学意义(

χ

=6.291、7.241，

P

=0.031、0.029)。免疫组化染色结果显示，P53、Cdc2蛋白在喉癌组织中呈高水平表达，且多定位于细胞膜与细胞质中，而其在正常组织中表达水平较低。见图1。

图1 P53、Cdc2蛋白免疫化学染色(×200)

2.2 不同临床病理特征患者P53、Cdc2蛋白阳性率比较 不同肿瘤直径、分化类型、肿瘤分期患者喉癌组织中P53、Cdc2蛋白阳性率比较，差异有统计意义(

P

<0.05)。见表1。

表1 不同临床病理患者P53、Cdc2蛋白阳性率比较

2.3 P53、Cdc2蛋白阳性率与预后的相关性 所有患者放疗后随访24个月，32例(20.00%)复发，29例(18.13%)转移， 47例死亡(29.38%)。Pearson 相关性分析显示，P53、Cdc2蛋白表达阳性率与复发(

r

=0.681、0.713，

P

<0.001、<0.001)、转移(

r

=0.725、0.583，

P

<0.001、<0.001)、死亡(

r

=0.701、0.602，

P

<0.001、<0.001)均呈正相关性。

3 讨论

喉癌发病率占恶性肿瘤的1%～22%，放射治疗能获得较好的结果，但部分患者放疗后预后较差，再加上治疗过程中缺乏有效的预测、评估方法，导致患者5年生存率较低。因此，寻找新的肿瘤标志物、新的治疗靶点对改善患者预后，提高其生存期意义重大。本文探讨喉癌患者P53、Cdc2蛋白阳性表达情况及其与放疗预后的关系，以其为喉癌治疗提供新的靶点。

P53基因属于与人类紧密相关的致癌基因，亦是人类肿瘤突变频率较高的抑癌基因(几乎存在于所有肿瘤中)。临床上将P53基因分为野生型和突变型两种，前者能诱导细胞凋亡，而后者则能抑制细胞凋亡。突变型P53与肿瘤的发生、生长调控及凋亡存在紧密联系，能作为免疫系统的靶抗原，引起免疫系统失耐受，从而产生P53抗体。本研究中，喉癌患者病灶组织中P53、Cdc2蛋白阳性率显著高于正常组织(

P

<0.05)，表明P53、Cdc2蛋白在喉癌组织中呈高表达，该结果与李建华等研究结果相符。不同肿瘤直径、分化类型、肿瘤分期患者喉癌组织中P53、Cdc2蛋白阳性率比较，差异显著(

P

<0.05)，提示可以通过P53的表达情况，反映患者的疾病严重程度和进展情况，指导临床治疗。Cdc2属于Ser/Thr蛋白激酶家族重要成员之一，能调节细胞周期并发挥正性调控作用。但当Cdc2失调控后，则会引起肿瘤的发生、发展。研究表明，喉癌细胞增殖过程中，肿瘤细胞周期调控机制破坏，导致细胞生长失控、分化受阻，并引起凋亡异常。而Cdc2是细胞周期调控的中心环节，在细胞生长和分化过程中发挥重要作用。本组所有患者放疗后随访24个月，32例(20.00%)复发，29例(18.13%)转移，47例死亡(29.38%)；Pearson相关性分析显示， P53、Cdc2蛋白表达阳性率与复发、转移、死亡均呈正相关性，表明P53、Cdc2蛋白阳性表达越高，患者复发、转移及死亡等发生风险越高。此与陈国群的研究相似，可能是由于P53、Cdc2蛋白能参与实体瘤的发生、发展有关，其表达水平能评估患者疾病严重程度，亦可评价患者预后。

综上所述，P53、Cdc2蛋白在喉癌患者癌组织中呈高表达，其阳性表达情况与患者放疗后预后相关，有望成为喉癌治疗的新靶点。