MTHFR基因多态性与中国男性不育关系的meta分析

周 青 刘帅妹 张瑞金 石 慧 林 宁 吴玉璘

江苏省卫生健康发展研究中心(南京，210036)

育龄人群中不孕不育夫妇的发生率高达10%～15%，其中男性因素占40%～50%，严重影响人们生活质量和家庭幸福[1]。超过50%的男性不育原因不明，为特发性男性不育[2-3]。研究发现，亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-MTHFR)基因多态性的发生，改变酶活性引起体内叶酸代谢异常，产生高同型半胱氨酸血症和DNA低甲基化，导致男性精子发生异常，功能受损而不育[4]。目前对MTHFR与中国男性不育的关系研究尚有争议，为进一步评估两者关系，本文基于先前诸多研究进行meta分析。

1 资料与方法

1.1 文献检索

利用中英文数据库Pubmed、中国知网、万方数据库等，搜索有关MTHFR基因多态性与中国男性不育关系病例-对照研究文献。搜索中文关键词MTHFR(C677T)、亚甲基四氢叶酸还原酶、基因多态性、男性不育；英文搜索关键词：MTHFR(C677T)、polymorphisms、methylenetetrahydrofolate reductase、male infertility。检索时间从建库至2020年12月18日，同时阅读参考文献进行追溯，使获得的文献尽可能详尽，限定语种为中文和英文。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①关于MTHFR(C677T)基因多态性与中国男性不育关系病例-对照研究；②研究对象为中国男性，且病例无输精管缺如、泌尿生殖道感染、睾丸炎等疾病；③对照组为健康男性，有自然生育史；④数据齐全包含CC、CT和TT在病例和对照两组分布频数；排除标准：①非中英文研究型文章；②数据重复和质量不可靠的文章(NOS<5分)；③综述类和meta分析类文章；④对照组基因型的分布不符合哈迪温伯格(H-W)平衡定律，且影响结果稳定性。

1.3 资料提取

两位研究者分别按照纳入标准和排除标准独立进行文献的筛选和资料的提取，遇到分歧可讨论或与第3位经验丰富研究者进行协商。提取的资料包括发表时间、作者、地区、样本量、基因分型方法、基因型的分布频数。

1.4 文献质量评价

两位研究者分别根据文献质量评价表(NOS)对纳入文献的方法学质量进行评价，并交叉核对，总分为9分，NOS≥5分文献质量良好。

1.5 统计学分析

采用State软件计算95%可信度区间(95%CI)和比值比(OR)，评估MTHFR(C677T)基因多态性与中国男性不育的关系。3种基因型包括CC、CT和TT，分别计算等位基因模型T比C、杂合比较模型CT比CC、纯合比较模型TT比CC、显性比较模型(CT+TT)比CC 和隐性比较模型TT比(CC+CT)。P<0.05具有统计学意义。采用I2和Q检验进行异质性检测，若I2<50%则采用固定效应模型Mantel-Haenszel，反之采用随机效应模型DerSimonian和Laird合并OR值，且I2≥50%则表示存在明显异质性，需进行亚组分析和敏感性分析寻找异质性的来源[5-6]。最后采用Egger线性回归法和Begg秩相关法计算评估发表偏倚情况，P>0.05表示不存在发表偏倚[7]。

2 结果

2.1 文献检索

检索中英文相关文献共153篇，剔除重复数据11篇，获得142篇。根据纳入和排除标准，剔除12篇meta分析，9篇综述，47篇研究外国人群文献，54篇研究非MTHFR(C677T)位点文献，1篇研究心脏病文献，最终纳入文献共19篇[8-26]。见表1。

2.2 文献质量

19篇纳入文献质量良好，NOS均≥5分，见表1。

表1 MTHFR(C677T)基因纳入文献的基本情况

2.3 文献分析

T比C、TC比CC、TT比CC、TT比(CC+CT)和(TT+CT)比CC 5种遗传基因模型结果分析提示MTHFR(C677T)基因多态性与中国男性不育发生存在明显相关性。根据基因分型的方法分为荧光定量PCR、PCR-RFLP、PCR和其他(SNaPshot、Sequencing和Taqman-MGB)亚组进行行分析，前3组结果有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 MTHFR (C677T)基因多态性与男性不育相关性分析

2.4 异质性分析

MTHFR(C677T)纯合比较模型TT比CC，等位基因模型T比C，显性比较模型(CT+TT)比CC，隐性比较模型TT比(CC+CT) ，I2>50%表示存在高度异质性，采用随机效应模型进行合并计算，并通过基因分型方法进行亚组分析发现，TT比CC模型异质性主要来源于PCR组，T比C 模型异质性主要来源于PCR-RFLP、PCR和荧光定量PCR组，TT比(CC+CT) 模型异质性主要来源于PCR-RFLP，(TT+CT) vsCC 模型异质性来源于PCR和荧光定量PCR。

2.5 敏感性分析

通过敏感性分析一一剔除文献重新合并计算，发现Xie 等[23]报道的文献是主要的异质性来源，剔除后异质性下降，I2<50%。剔除不符合哈迪温伯格平衡的胡斐等[18]报道文献，重新合并计算各模型效应量无明显改变。

2.6 发表偏倚

通过Begg漏斗图和Egger线性回归法，5种基因遗传模型的漏斗图均对称，且Egger检验结果P>0.05，说明不存在发表偏倚。见表3和图1。

表3 MTHFR(C677T)基因多态位点Egger检验结果

图1 MTHFR(C677T)基因多态性漏斗图(T比C)

3 讨论

近年来，研究显示MTHFR基因多态性的发生会增大男性不育的风险，然而由于研究方法、地域差异和样本量不同等原因，导致结果不一致。

本研究共纳入19篇文献，观察组和对照组分别为5602例和4521例，5种遗传模型结果显示MTHFR(C677T)基因多态性发生与中国男性不育存在明显相关性，与Ren等[27]报道结果一致。按照基因分型方法进行亚组分析发现，荧光定量PCR、PCR-RFLP和PCR 结果均提示MTHFR(C677T)基因多态性发生增加中国男性不育的风险，而其他组结果提示不存在相关性，可能是因为不同实验方法对基因分型结果存在影响，导致异质性较大。敏感性分析发现Xie 等[23]报道的文献是主要的异质性来源。对纳入文献进行哈迪温伯格平衡检验，发现胡斐等[18]报道文献不符合哈迪温伯格平衡定律，剔除该文献重新合并计算，5种遗传模型合并效应量无明显改变。通过Begg漏斗图和Egger检验，5种遗传模型漏斗图均对称，且P>0.05，说明不存在发表偏倚，结果可靠。

本次研究尚有不足：样本量太小，研究人群局限于中国汉族男性，研究人群叶酸摄入量、各地区生活环境、饮食习惯、纳入人群吸烟情况以及年龄等信息无法获取，对结果均可能产生影响。

综上所述，MTHFR(C677T)基因多态性可能会增加中国男性不育的风险。MTHFR基因多态性与中国男性不育的关系还需扩大样本量，对全国不同民族、地区、生活环境以及饮食习惯等进一步研究，以为临床提供更可靠数据。