甘肃省部分地区羔羊死亡病原调查

高生智，潘永红*，梁 斌，詹 芳，史万贵，李有全

（1.甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃 兰州 730030；2.中国农业科学院 兰州兽医研究所，甘肃 兰州 730030）

2019—2020年甘肃省部分地区的羊只出现了以贫血、高热、消瘦、出血和体表淋巴结肿大为主要特征的临床症状，呈点状散发，属地方性动物疫病，初步怀疑为羊泰勒虫病。为进一步了解临潭县、永靖县、华池县、榆中县等地区羊泰勒虫病病原感染情况，于2020年3—5月对以上4个县患病羊只进行了羊耳尖血涂片，并采集羊血液，一一对应编号，带回实验室进行血液涂片染色镜检和羊泰勒虫PCR检测。对镜检有典型虫体、有疑似虫体和部分镜检阴性血液涂片对应的全血样品进行羊泰勒虫PCR检测，结果表明：永靖县、榆中县、临潭县的羊泰勒虫病是吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫的混合感染，而华池县羊泰勒虫病是单一的尤氏泰勒虫感染，证实了临床怀疑诊断。现将试验总结如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血片 来自临潭县、永靖县、华池县、榆中县，每县90张。于羊耳尖采血推制血片，自然风干，甲醇固定，吉姆萨染色。

1.1.2 全血 来自临潭县、永靖县、华池县、榆中县，每县90份。于羊颈静脉采血，摇匀，带回实验室冻存待检。

1.1.3 血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒购自天根公司，批号20200618。

1.1.4 普通PCR试剂 引物两对，尤氏引物、吕氏引物；DNA聚合酶（premix Tap），DEPC水，dNTP，标准DNA（Marker），上样缓冲液，1%琼脂糖凝胶，常规电泳液。

1.1.5 移液器和枪头 2 μl、10 μl、50 μl、100 μl、200 μl、1 000 μl单道移液器，高压灭菌配套枪头。

1.1.6 其他 显微镜、生物安全柜、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统。

1.2 方法

1.2.1 血片 常规显微镜镜检。镜检20高倍以上野，发现5个以上典型虫体为有典型虫体；发现1～2个疑似虫体为有疑似虫体；未发现虫体为无虫。

1.2.2 全血 按试剂盒说明书提取DNA模板，普通PCR鉴定。

试验成立：电泳结束后，阳性对照样品应出现2条带，分别为303 bp和530 bp。阴性对照无扩增条带。否则，此次试验视为无效。

阳性判定：如果待检样品扩增产物在303 bp和（或）530 bp处出现条带，则为阳性。如出现2条带，则判定该待检样品为两种泰勒虫阳性；如出现1条带，则判定该待检样品为相对应的泰勒虫阳性。

阴性判定：如待检样品无扩增条带，判定为阴性。

2 结果

2.1 血片

如表1所示，通过检测发现4个地区患病羊只的虫体检出率不同，临潭县最高，为68.42%，华池县最低，为36.67%。

表1 4个地区虫体检出结果

2.2 全血

如表2所示，4个地区患病羊只虫体感染率不同，除华池县以外，其余3个县的患病羊只都同时感染2种泰勒虫。

表2 4个地区样本泰勒虫PCR检测结果

2.3 血片对应全血

从表3中可以看出，镜检有虫、PCR确认有泰勒虫的比例为45.90%（56/122），镜检有虫、PCR确认无泰勒虫的比例为16.39%（20/122），镜检无虫、PCR确认有泰勒虫的比例为27.87%（34/122），镜检无虫、PCR确认无泰勒虫的比例为9.84%（12/122），镜检与PCR结果一致率为55.74%（68/122），镜检与PCR结果不一致率为44.26%（54/122）。

表3 4个地区样本泰勒虫镜检结果 单位：个

3 分析与讨论

在华池县检测到尤氏泰勒虫，在榆中县、永靖县、临潭县检测到吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫，确认了榆中县、永靖县、临潭县羊泰勒虫病是吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫的混合感染；华池县羊泰勒虫病是单一的尤氏泰勒虫感染。调查4县平均阳性率为44.95%，优势虫种为尤氏泰勒虫，其次是吕氏泰勒虫。

羊泰勒虫病在甘肃分布广泛[1-4]，各地感染率、发病率、死亡率存在明显差异。此次镜检平均阳性率为62.3%（76/122），PCR平均阳性率为73.77%（90/122），镜检与PCR结果一致率为55.74%（68/122）。

在羊泰勒虫病流行病学调查中，长期沿用采血涂片染色镜检的方法是急性发病病例确诊的经典方法[1-4]，但在大规模流行病学调查时稍显不足，尤其是红细胞染虫率偏低时易出现漏检现象，血液涂片染色检查要求操作人员熟练掌握制片技术，熟悉羊泰勒虫、无浆体的虫体形态和大小，否则当出现混合感染时易造成误检漏检。此次4县镜检误差率为44.26%（54/122）。

国外报道的羊泰勒虫有4个种，即莱氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、分离泰勒虫和隐藏泰勒虫，其中莱氏泰勒虫具有致病性，由其引起的泰勒虫病也称恶性泰勒虫病。自1958年我国四川甘孜藏族自治州报道该病以来，甘肃、青海、宁夏、陕西、辽宁、内蒙古陆续报道有该病发生[5-7]。殷宏等（2002）通过系统研究后发现，我国羊泰勒虫病的病原并非莱氏泰勒虫，而是吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫。同时证实甘肃省夏河县、宁县、天祝县羊的泰勒虫是单一的吕氏泰勒虫，在临潭县、张家川县及青海省湟源县的羊泰勒虫是吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫的混合[5]。笔者再次证实了永靖县、榆中县、临潭县羊泰勒虫是吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫的混合；华池县羊泰勒虫是尤氏泰勒虫，从而得知甘肃省羊泰勒虫病的病原是尤氏泰勒虫和吕氏泰勒虫。