犊牛腹泻大肠杆菌血清型鉴定

吴孟 覃杰

（新疆第二师畜牧兽医工作站 841005）

近年来，巴州地区犊牛腹泻的发病率和死亡率一直居高不下，大肠杆菌是引起犊牛腹泻的一个重要原因。犊牛腹泻造成犊牛生长发育迟缓或死亡，给养牛业带来较大的经济损失。因大肠杆菌血清型较多，变异较大，给大肠杆菌引起的腹泻防治带来困难，故本试验检测巴州地区致犊牛腹泻大肠杆菌的血清型，找到优势血清型，为犊牛腹泻的防治提供参考。

1 材料

1.1 病料

2019～2020 年间，采用灭菌棉签采集巴州地区6 家规模牛场、12 家散养户的共75 头腹泻犊牛深部直肠粪便拭子样品，同时采集病死犊牛的脏器样品，样品采集后24h 内做细菌的分离培养鉴定。

1.2 药品和主要试剂

普通琼脂培养基、普通肉汤培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红亚甲蓝琼脂培养基，购自北京奥博星生物技术有限责任公司。细菌生化微量鉴定培养基，按常规方法配置。血清型检测试剂购自中国兽药监督所。

2 方法

2.1 细菌分离鉴定

棉签拭子接种于营养肉汤溶液，剪碎脏器样品接种于营养肉汤溶液，37℃过夜培养，形成增菌液，将增菌液用接种环在麦康凯平板连续划线，37℃培养18～24h 后观察培养特性，然后从每个平板挑取砖红色、圆形凸起的菌落，接种于伊红亚甲蓝琼脂平板，置37℃培养18～24h，观察分离细菌生长的菌落特点，同时用该菌落涂片，革兰染色、镜检，然后挑取典型菌落再接种于营养肉汤中进行纯菌增殖。生化试验按陆承平[1]介绍的方法对所有分离细菌进行生化指标测定。

2.2 血清型鉴定试验

将分离纯化的大肠杆菌接种于普通液体培养基中，置恒温摇床中培养20h，121℃高压1.5h 破坏K 抗原，即为“O”抗原。用0.5%生理盐水洗下菌苔，得到细菌悬液，取一洁净的载玻片，一边滴加20μL 的0 抗原多价血清，另一边滴加20μL 的生理盐水作为阴性对照，分别加入10μL 细菌悬液，混合均匀，与血清充分混匀后在1min 内观察结果，有明显凝集现象的为阳性，呈阳性者再与单因子血清反应，测定该菌株的血清型。生理盐水对照应没有凝集现象。

3 结果与分析

3.1 分离鉴定

在麦康凯培养基上菌落表现为圆形、隆起、湿润、光滑、边缘整齐、红色菌落，在伊红亚甲蓝琼脂培养基上长出有金属光泽的黑色菌落。菌株经革兰氏染色镜检为阴性短杆菌，两端钝圆，无芽孢，单个存在，初步确定为大肠杆菌。共从75 份样品中分离鉴定出39 株大肠杆菌，大肠杆菌检出率52.0%。

3.2 生化试验

对初步分离鉴定的细菌进行生化试验，葡萄糖、乳糖、吲哚、木糖、甘露醇、麦芽糖、硝酸盐阳性、VP、棉籽糖阴性，均符合大肠杆菌的生化特性。

3.3 血清型鉴定试验

对分离的39 株大肠杆菌进行血清型鉴定，其中36 株确定了血清型，共有6 种血清型，优势血清型为O78、O111。具体结果见附表。

4 讨论

本试验从75 份犊牛腹泻样品中分离得到39 株大肠杆菌样品，大肠杆菌检出率52.0%，可见大肠杆菌为巴州地区犊牛腹泻的一个重要病原，对犊牛腹泻防治可以考虑大肠杆菌引起。

本试验中，大肠杆菌的血清型有6 种，分别为O8、O26、O35、O78、O101、O111，其中O78、O111 明显高于其他3种，为优势血清型。与喻华英[2]报道的新疆部分地区犊牛腹泻大肠杆菌血清型完全不一致，与李慧[3]报道的新疆石河子地区犊牛腹泻大肠杆菌血清型只有O78 一致，这可能不同地区大肠杆菌血清型存在地区差异[4]。本试验中有3 株大肠杆菌未鉴定出血清型，这可能与购买的检测试剂没有相应的血清型有关。