紫草中羟基萘醌总色素含量测定的稳定性研究

朱 勇，李怀国

（佛山市中医院制剂中心，广东 佛山 528000）

紫草是2020 版《中国药典》中收载的中药品种。紫草为紫草科紫草属植物，以干燥的根入药。中医学认为，紫草性寒，味甘、咸，归心经、肝经，具有凉血活血、解毒透疹之功效[1]。现代药理学研究表明，紫草具有抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤、镇静镇痛、兴奋平滑肌等作用，对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌等均有抑制作用，且能加速上皮细胞的生长，在治疗烫伤方面有特效[2]。现阶段的研究表明，紫草中的紫草素及乙酰紫草素是其能够发挥抗炎作用的主要成分。2020 版《中国药典》紫草项下羟基萘醌总色素含量的测定方法是：将紫草在50℃下干燥3 h，粉碎（过3 号筛），用95%的乙醇浸泡4 h 后震摇并稀释，然后按照紫外-可见分光光度法（2020 版《中国药典》四部通则0401）在516 nm 波长处测定其吸收度，羟基萘醌总色素的含量不得少于0.8%（按左旋紫草素计）[3]。我院自主研发的紫草油、伤科黄水、伤科黄油纱等均需要应用到紫草，我院对紫草药材质量的要求较高，对紫草中羟基萘醌总色素含量的要求是《中国药典》中规定的3 倍。本文主要是对紫草中羟基萘醌总色素含量测定的稳定性进行研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

紫草（批号：20200717，购自佛山冯了性药材有限公司），经鉴定为紫草科紫草属植物新疆紫草；左旋紫草素标准品（批号：110769-200405，购自中国生物制品有限公司）；L5s 紫外可见分光光度计（由上海分析仪器厂生产）；AE200 型电子天平（由瑞士METTLER 公司生产）；CT-C-I 型热风循环烘箱（由常州益民干燥设备有限公司生产）；WIMER 3001 干粉激光粒度仪（由济南微纳仪器有限公司生产）。

1.2 方法

1.2.1 试验方法 1）紫草中羟基萘醌总色素含量的测定。取紫草中药材，按照2020 版《中国药典》（四部通则0401）中收载的方法，测定其中羟基萘醌总色素的含量，具体的操作方法是：在50℃的环境下将紫草干燥3 h，粉碎（过3 号筛），用95%的乙醇浸泡4 h 后震摇并稀释，然后按照紫外-可见分光光度法（2020 版《中国药典》四部通则0401）在516 nm波长处测定其吸收度，明确其中羟基萘醌总色素的含量。2）精密度试验。配置左旋紫草素（含量为3%）乙醇溶液标准品及空白样品，按照2020 版《中国药典》（四部通则0401）中收载的方法及检测条件重复检测6 次，测定其中羟基萘醌总色素的含量。3）稳定性考察。将同一批紫草粉碎成不同等级的细粉，在相同干燥时间、相同含水量下按照2020 版《中国药典》（四部通则0401）中收载的方法及检测条件测定羟基萘醌总色素的含量，考察该方法的稳定性。4）准确度试验。取已知左旋紫草素含量为3%的紫草乙醇溶液6 份（每份5 mL），在其中加入左旋紫草素标准品（左旋紫草素的含量为3%）乙醇溶液6 份（每份5 mL）。将上述两种溶液混合，得到供试品溶液。按照2020 版《中国药典》（四部通则0401）中收载的方法及检测条件测定羟基萘醌总色素的含量，计算加样回收率。加样回收率（%）=（测得量-已知量）/加入量×100%。1.2.2 L9（34）正交试验 根据2020 版《中国药典》中收载的紫草测定方法中的主要影响因素，以羟基萘醌总色素含量测定为指标进行L9（34）正交试验，考察药材的粉碎细度、干燥时间及含水量对测定结果的影响。L9（34）正交试验的影响因素和水平详见表1。

表1 L9（34）正交试验的影响因素和水平

2 结果

2.1 精密度试验结果

通过进行精密度试验可知，左旋紫草素（含量为3%）乙醇溶液标准品及空白样品的平均加样回收率为101%，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为1.46。

表2 精密度试验结果

2.2 稳定性考察结果

通过进行稳定性考察可知，在紫草药材粉碎成极细粉的条件下测得羟基萘醌总色素的含量值较为稳定。详见表3。

表3 紫草粉碎的粗细度对羟基萘醌总色素含量测定值的影响

2.3 L9（34）正交试验结果

本研究中进行L9（34）正交试验的结果详见表4。

表4 L9（34）正交试验结果

2.4 羟基萘醌总色素含量测定影响因素的方差分析结果

对本研究中影响紫草中羟基萘醌总色素含量测定的因素进行方差分析的结果显示，药粉细度是影响紫草中羟基萘醌总色素含量测定的主要因素，其次为药粉干燥时间和药粉含水量。详见表5。

表5 羟基萘醌总色素含量测定影响因素的方差分析结果

2.5 测定紫草中羟基萘醌总色素含量的最佳条件

本研究中通过进行L9（34）正交试验可知，将药材粉碎成极细粉、在50℃下干燥3 h、将药粉的水含量控制在9.0%左右是测定紫草中羟基萘醌总色素含量的最佳条件。

3 讨论

紫草可凉血活血、解毒透疹，可用于治疗血热毒盛、麻疹、斑疹透发不畅诸证。现代药理学研究表明，紫草中的羟基萘醌总色素是其主要药理成分。通过对紫草中羟基萘醌总色素的含量进行测定有利于对其进行质量控制[4]。我们发现，按照2020 版《中国药典》（四部通则0401）中收载的方法测定紫草中羟基萘醌总色素的含量时，对检测条件的要求过于宽泛，测定条件不够细化，因此导致测定结果存在较大差异。近年来，我们在测定紫草中羟基萘醌总色素的含量时细化了测定条件，提高了药材含量测定的稳定性，有利于药材的质量控制。

本研究的结果证实，药粉细度是影响紫草中羟基萘醌总色素含量测定的主要因素，其次为药粉干燥时间和药粉含水量。将药材粉碎成极细粉、在50℃下干燥3 h、将药粉的含水量控制在9.0% 左右是测定紫草中羟基萘醌总色素含量的最佳条件。