PPD 皮试联合结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测对肺结核的诊断价值

谢友新，钟丽萍，钟雨融

（广东省佛山市三水区疾病防治所，广东 佛山 528100）

0 引言

目前，肺泡灌洗找抗酸杆菌、支气管镜活检病理、支气管镜刷检找抗酸杆菌、痰涂片找结核杆菌、痰结核菌培养均为临床对肺结核的主要诊断手段，但由于我国痰培养阴性肺结核患者占比居多，导致上述诊断敏感度较差，现为探究更有效的诊断方式[1-2]，特选取2019 年1 月至2020 年8 月期间在我院接受治疗的100 例肺结核患者以及100 例同期在我院接受治疗的非肺结核性肺部疾病患者作为研究对象，对其分析后现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019 年1 月至2020 年8 月期间在我院接受治疗的100 例肺结核患者作为临床研究对象为观察组，并选取100 例同期在我院接受治疗的非肺结核性肺部疾病患者做对比对象为对照组。观察组中男51例，女49例。年龄16～62岁，平均（44.39±2.21）岁。对照组中男50 例，女50 例。年龄16～61 岁，平均（44.41±2.23）岁。经过统计学处理，所有参与研究的患者的一般资料（年龄以及性别）等均无显著差异，无统计学意义(P＞0.05)。医院伦理委员会已对本研究的实施予以批准，且患者及家属也已对研究基础了解，并签署同意书。

纳入标准[3]：（1）符合肺结核诊断标准：胸部CT 扫描或胸片摄片所获病灶特点与该疾病影像学特征相符，有活动性肺结核临床表现，痰结核分枝杆菌培养阴性，临床抗结核治疗有效；（2）非肺结核组：实验室检查不支持肺结核诊断，影像学检查与肺结核影像学特征不相符，无肺结核临床表现。

排除标准[4]：（1）合并HIV 等免疫缺陷病者；（2）接受放化疗治疗者。

1.2 方法

所有患者均接受PPD 皮试以及结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测，其中PPD 试验是将5U PPD 注入患者的前臂皮内，在两至三天后，测量硬结直径，对测量结果进行记录，根据测量到的纵向直径以及横向直径计算硬结平均直径，即（纵向直径+横向直径）/2=硬结平均直径（mm）。所得值在10mm 以上则属于试验结果阳性。

SP0T-TB 测定是在患者入院后的三天内对患者的静脉血进行采集，血液采集量为8mL，将其置入含肝素抗凝剂的血样管中，将白细胞进行分离。再在其中加入细胞培养液，待细胞重悬后，再对其进行洗涤。在已包被抗IFN-y 抗体微量板的四个孔中加入细胞培养液，以此为阴性对照。再将植物血凝素（PHA）加至孔中作为阳性对照。将MTB 特异混合多肽CFP-10 与ESAT-6(上海复星)加至孔中为实验孔。再于每个孔中加入培养好的悬液，每孔悬液内含细胞25 万。在37℃环境中，对微量板进行培养，约16～20h。再通过PBS 进行洗涤，共洗涤四次。再加入抗人IFN-y 单克隆抗体，更换至2℃～8℃环境中进行培育，培育一个小时，再通过PBS 进行洗涤，共洗涤四次。再在每个孔内加入显色底物液，放置于室温环境中，七分钟后开始观察结果。并通过计算机辅助成像分析系统对斑点进行阅读、统计。阳性评定标准为：空白对照孔有6～10 个斑点数，与此同时，抗原A 孔/B 孔内的斑点数高于或等于空白对照孔版点数的两倍或空白对照孔有0～5 个斑点数，抗原A 孔/B 孔内的斑点数比空白对照孔斑点数多六个以上（包括六个）。阴性评定标准：不满足阳性评定标准，但阳性对照孔具备良好的结果。通过T-SPOT-TB 的T 细胞斑点数计算空白对照孔与抗原A孔/B 孔内的斑点数之间的差值，以最大值为最终结果。抗原A 孔斑点数与空白对照孔的斑点数差值即抗原B 孔T 细胞斑点数，抗原B 孔斑点数与空白对照孔的斑点数差值即抗原B 孔T 细胞斑点数。

1.3 观察指标

对比两组患者的PPD 皮试以及结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测阳性结果。

对比观察组患者PPD 皮试、结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测以及联合检测的准确率情况。

1.4 统计学方法

通过SPSS 22.0 统计学软件计算研究内需对比的数据，样本率的比较通过χ2检验计算，正态计量数据用“”表示，并通过t检验计算；以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PPD 皮试以及结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测结果比较

检测发现，观察组患者的PPD 皮试阳性率以及结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测结果阳性率显著高于对照组患者的，差异具有统计学意义（P＜0.05），详细情况见表1。

表1 两组PPD 皮试以及结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测结果比较 [n（%）]

2.2 观察组PPD 皮试、结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测以及联合检测的准确率情况

检测发现，观察组患者中，联合检测准确率显著高于单独诊断准确率，差异具有统计学意义（P＜0.05），详细情况见表2。

表2 观察组PPD 皮试、结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测以及联合检测的准确率情况[n（%）]

3 讨论

经流行病学调查研究发现，结核病属于单一致病菌中致死率最高的病种，随着免疫缺陷疾病种类增多、耐药结核杆菌株增多以及人口流动性增大，该疾病在全球患病率均呈逐年递增趋势[5-6]。且该疾病患病初期无典型临床特征，起病隐匿，故造成误诊率高等情况，导致患者的最佳治疗时机被错过。故探求该疾病的特异性诊断指标尤为重要[7-8]。

本研究经检测发现，观察组患者的PPD 皮试阳性率以及结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测结果阳性率显著高于对照组患者的，差异具有统计学意义（P＜0.05）；观察组患者中，联合检测准确率显著高于单独诊断准确率，差异具有统计学意义（P＜0.05）。这提示了，PPD 皮试以及结核感染T淋巴细胞斑点试验在结核病以及非结核性肺病的鉴别中具有较高价值，且联合诊断能够显著提高诊断准确率[9-10]。究其原因，PPD 属于皮肤试验，属于纯蛋白衍化物，也属于混合物，包含了诸多种类的抗原，卡介苗菌株、环境分枝杆菌、致病性分枝杆菌都有其所拥有的抗原，故单独应用该试验检测并不能有效进行疾病鉴别[11]。而T 淋巴细胞斑点试验是以结核分枝杆菌特异性抗原分泌物，对活化T 细胞进行刺激，使其生成IFN-γ 原理建立的,具有较高的特异性，抗原并不会与其他致病菌发生较叉，故敏感性较高[12]。故两者联合应用可显著提高诊断准确率。

综上所述，在肺结核的诊断中PPD 皮试联合结核感染T 淋巴细胞斑点试验检测效果显著。