张曼玲,李朝娟,汤晓琴,杨 飞,门 靖,任亚宁
西安万隆制药股份有限公司,陕西 西安 710119
1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐,CAS号为52605-52-4,分子式C13H19Cl3N2,分子量309.66,作为一种重要的氯苯基哌嗪衍生物,在化工医药、有机合成领域有广泛的应用[1-2]。同时,1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐是制备抗抑郁药奈法唑酮(Nefazodone)、依托哌酮(Etoperidone)、曲唑酮(Trazodone)、非典型抗精神病药物伊潘立酮(Iloperidone)的关键中间体[3-7],而制备1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐的经典合成路线是以1-溴-3-氯丙烷为起始原料,经与1-(3-氯苯基)哌嗪反应生成1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪再经成盐精制获得[8]。因此,1-溴-3-氯丙烷的分析及检测技术对原料药的品质至关重要。
吴成杰等[9]建立了一种气相色谱法(GC)检测1-溴-3氯丙烷在磷酸哌喹中的方法,色谱系统选用DB-1(30 m×0.32 mm,3.0 μm)气相色谱柱,程序升温,氢火焰离子化检测器,分流比为5∶1,测试表明样品1-溴-3氯丙烷在1~15 μg/mL内进样,外标法以峰面积计,线性关系良好,平均回收率为99.5%,最低检测质量浓度为0.227 2 μg/mL。杨茉等[10]开发了GC检测伊潘立酮中1-溴-3-氯丙烷的方法,色谱系统采用DM-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)气相色谱柱,程序升温,氢火焰离子化检测器,分流比为3∶1,结果显示1-溴-3-氯丙烷在7.5~37.5 μg/mL内进样,呈现出良好的线性关系,平均回收率为99.4%,最低检测质量浓度为12.5 μg/mL。陈蓉等[11]采用顶空气相色谱法成功测定盐酸地拉卓原料药中1-溴-3-氯丙烷以及乙醇、丙酮和甲苯3种残留溶剂,以Agilent DB-WAX毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.50 μm)为色谱柱,程序升温,氢火焰离子化检测器,以分流比5∶1测定1-溴-3-氯丙烷,以分流比50∶1测定乙醇、丙酮和甲苯,顶空进样,结果表明:1-溴-3-氯丙烷、乙醇、丙酮和甲苯在测试范围内线性关系均良好,达到实验检测要求。但是以上方法的操作都相对复杂,在实际应用中有一定的限制。
本研究在文献的基础上,开发一种基于GC测定1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐中1-溴-3-氯丙烷的残留方法,并进行优化,以此对1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐进行质量控制,以便获得操作简单、重复性好的1-溴-3-氯丙烷残留检测分析方法,以期为相关药物的质量控制及杂质质谱分析检测提供指导。
1-溴-3-氯丙烷(含量≥98.0%),Sigma公司;1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐(含量≥98.0%,批号:ZT-200501、ZT-200502、ZT-200503),武汉欣欣佳丽生物科技有限公司;乙腈,色谱纯,国药集团试剂有限公司;纯化水,屈臣氏集团有限公司。
Agilent 7890B型气相色谱仪(FID检测器),Agilent公司;MS105DU型电子天平,梅特勒-托利多公司。
色谱柱为Agilent DB-624毛细管柱(30 m×0.25 mm,1.8 μm);程序升温为起始温度30 ℃,保持10 min,再以速率20 ℃/min升至220 ℃,保持10 min;检测器温度为240 ℃;进样口温度为220 ℃;载气为N2,流速为2.0 mL/min;分流比为5∶1。进样方式为直接进样,进样量1.0 μL。
稀释剂为V(乙腈)∶V(水)=100∶1;稀释剂作为空白溶剂。
对照品溶液:称取1-溴-3-氯丙烷123.30 mg置于100 mL容量瓶中,加稀释剂溶解至刻度,摇匀,作为对照品储备溶液;精密量取1.0 mL置于20 mL容量瓶中,加稀释剂至刻度,摇匀备用。
供试品溶液:称取1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐样品约1 g,精密称定,置10 mL容量瓶中,加稀释剂适量溶解并定容(采用0.25 μm过滤膜进行过滤前处理)。
取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液(批号:ZT-200501),分别进样检测,结果见图1。由图1可知:空白溶剂乙腈峰对1-溴-3-氯丙烷峰无干扰,1-溴-3-氯丙烷峰与溶剂峰的分离度良好,R>1.5。
精密量取1-溴-3-氯丙烷的对照品储备溶液0.1、0.2、0.5、0.8、1.0和2.0 mL,分别置20 mL的量瓶中,加入稀释剂至刻度,摇匀(记为线性1~6)。取线性1~6的样品分别进样,将测得结果进行线性回归,回归方程为y=9 862.269 0x+595.595 4,相关系数r=0.999 6。由回归方程可知:1-溴-3-氯丙烷在6.18~122.40 μg/mL浓度范围内,与浓度成良好的线性关系,
图1 空白溶剂、对照品溶液和供试品的GC图
精密量取对照品溶液,用稀释剂逐级稀释,分别进样。按信噪比(S/N)=10∶1考察定量限,测得1-溴-3-氯丙烷的定量限为6.18 μg/mL。取定量限溶液连续进样6次,1-溴-3-氯丙烷峰面积的相对标准偏差(RSD)为1.86%(n=6)。按S/N=3∶1考察检出限,1-溴-3-氯丙烷检出限为1.51 μg/mL。
进样精密度:取对照品溶液连续进样6次,记录峰面积,结果发现:1-溴-3-氯丙烷峰面积的RSD为1.21%(n=6),表明仪器精密度良好。
重复性试验:制备6份加标供试品液,色谱条件进样检测,记录峰面积并以外标法计算1-溴-3-氯丙烷的残留量,结果表明:6份加标供试品溶液测得1-溴-3-氯丙烷的残留量的平均值为0.049 1%,RSD为2.52%(n=6),表明方法重复性良好。
中间精密度试验:不同时间、不同分析人员、不同的气相色谱仪进行重复性样品溶液制备12份,进样检测,记录峰面积并以外标法计算1-溴-3-氯丙烷的残留量。结果发现:12份加标供试品溶液测得1-溴-3-氯丙烷的残留量的平均值为0.48%,RSD为3.76%(n=12),表明本方法重现性良好。
取对照品溶液、供试品溶液,分别于室温放置0、4、8、12、16、20和24 h,分别进样检测,结果显示:24 h内对照品溶液1-溴-3-氯丙烷峰面积的RSD为2.63%(n=7);24 h内重复性溶液1-溴-3-氯丙烷峰面积的RSD为2.95%(n=7),表明对照品溶液、供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
取样品(批号:ZT-200501)适量,分别加入10%、100%、200%浓度的对照品溶液适量,制成10%加标供试品溶液、100%加标供试品溶液、200%加标供试品溶液,每个浓度平行制备3份。取各水平加标供试品溶液和供试品溶液分别进样检测,计算1-溴-3-氯丙烷的回收率,结果见表1。由表1可知:9份加标供试品溶液的回收率为90.78%~92.81%,平均回收率为91.77%,RSD为1.78%,表明本方法测定样品中1-溴-3-氯丙烷残留的准确度良好。
表1 准确度试验结果(n=9)
考察载气流速、柱温、进样口温度等参数,在不同条件下测定1-溴-3-氯丙烷含量,结果见表2。由表2可知:耐用性结果的RSD为5.20%,表明该方法耐用性良好。
表2 耐用性试验结果
取样品适量,制备供试品溶液,分别进样检测,按外标法计算1-溴-3-氯丙烷的含量,结果见表3。由表3可知:3个批次的样品中都没有检出1-溴-3-氯丙烷含量。
表3 样品中1-溴-3-氯丙烷残留量测定结果(n=3)
本研究开发了一种GC法分析测定1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐中1-溴-3-氯丙烷残留方法,探讨了GC测定过程中的影响因素,包括专属性、线性关系、定量限与检出限、精密度、稳定性、准确度、耐用性等,测试结果表明:在6.18~122.40 μg/mL范围内,呈现出良好的线性关系,其加标回收率为90.78%~92.81%,RSD为1.78%,定量限为6.18 μg/mL,检出限为1.51 μg/mL,稳定性和耐用性良好。
该检测方法操作简单、重复性好,对开发1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪盐酸盐的质量控制和检测方法具有重要借鉴意义。