乙肝两对半联合乙型肝炎病毒DNA 定量检测诊断慢性乙型肝炎的临床价值

曹惠

江苏省扬州市江都人民医院检验科 （江苏扬州 225200）

慢性乙型肝炎是一种常见的传染性疾病，患者临床表现为肝区疼痛、腹胀、恶心、畏食与乏力，病情严重者还会有脾大、肝掌、蜘蛛痣及慢性肝病面容伴随出现[1]。该疾病的传播途径包括医源性传染、输血、母婴及密切生活接触等，且疾病病程较长，治愈难度大，随着病情进展，可发展为肝硬化，甚至肝癌，对患者生命质量与身体健康产生严重影响[2-3]。乙肝两对半即乙肝五项，包括乙肝核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）、乙肝e 抗体（hepatitis B e antibody，HBeAb）、乙肝e 抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）[4-5]。乙型肝炎病毒DNA 通常是指乙型肝炎病毒基因，为一般病毒感染最敏感、直接的指标，若检测结果为阳性，则提示具有传染性或存在病毒复制[6]。为提高慢性乙型肝炎的诊断准确率，改善患者预后，本研究探究慢性乙型肝炎诊断中乙肝两对半联合乙型肝炎病毒DNA 定量检测的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年3月至2020年3月我院收治的115例慢性乙型肝炎患者，男63例，女52例；年龄24～78岁，平均（47.05±2.38）岁。本研究经医院医学伦理委员会批准。

纳入标准：临床资料完整；自愿参与本研究并签署知情同意书。排除标准：合并其他类型传染病；合并其他病毒性肝炎；急性乙型肝炎；中途退出。

1.2 方法

乙肝两对半检测：抽取患者清晨空腹静脉血4 ml，于室温下放置30 min，按照3 000 r/min 的速度离心5 min，取上清液，待用；采用科美化学发光仪LICA500，博阳生物科技（上海）有限公司试剂盒检测乙肝两对半；正常参考值为，HBcAb ≤15 PEIU/ml，HBeAb ≤3 PEIU/ml，HBeAg ≤0.7 PEIU/ml，HBsAb ≤10 mIU/ml，HBsAg ≤0.20 mIU/ml[7]。

乙型肝炎病毒DNA 定量检测：采用7500型定量PCR仪（AB Applied Bio systems 公司）及乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（圣湘公司）进行检测；从-20 ℃冰箱取出核酸释放剂、内标、酶混合液、PCR 反应液及定量参考品A、B、C、D 和阴、阳性对照平衡并恢复至室温后混匀，3 000 r/min 瞬时离心10～15 s 后待用；根据待测样本、阴性对照、阳性对照及定量参考品A～D 数量，按比例取相应量的反应液、酶混合液及内标，充分混匀成PCR-mix，3 000 r/min 瞬时离心后备用；每个PCR 反应管中加入核酸释放剂5 μl，并依次加入待测样本、阴性对照、阳性对照及定量参考品A～D各5 μl 混匀，每管加入PCR-mix 40 μl，混匀后离心30 s，上机检测。

1.3 观察指标

分析乙肝两对半联合乙型肝炎病毒DNA定量检测的结果。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 乙肝两对半检测结果

HBcAb、HBeAg、HBsAg 均为阳性，即大三阳患者共有33例，构成比为28.70%；HBcAb、HBeAb、HBsAg 均为阳性，即小三阳患者共有40例，构成比为34.78%，见表1。

表1 乙肝两对半检测结果

2.2 乙型肝炎病毒DNA 定量检测结果

所有患者乙型肝炎病毒DNA 定量检测结果平均值为（3.27±0.42）×106IU/ml；大、小三阳患者的乙型肝炎病毒DNA 定量测定值均高于其他类型患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 乙型肝炎病毒DNA 定量检测结果分析（IU/ml，±s）

表2 乙型肝炎病毒DNA 定量检测结果分析（IU/ml，±s）

模式 例数 DNA 定量检测结果1 33 （3.58±0.23）×107 21 （1.33±0.12）×106 3 40 （1.41±0.15）×107 4 10 （1.46±0.18）×103 5 6（1.23±0.11）×104 2（1.79±0.48）×103 F 236.589 P＜0.001 6 5

3 讨论

现阶段，乙型肝炎病毒感染已经发展成为一个全球公共卫生问题[8]。我国为慢性乙型肝炎大国，且近年来患者数量明显增多，虽然疫苗的广泛推广使感染率有所降低，但该病依旧属于需要被重视的严峻健康卫生问题[9]。流行病学研究显示，我国约有3千万慢性乙型肝炎患者，并且随着病情进展，最终演变成为肝硬化的患者占15%[10]。临床诊断肝炎时，通常会将血清转氨酶水平升高作为一个重要评价依据，但临床实践显示，部分非肝炎的肝脏疾病患者也存在血清转氨酶水平升高的现象，故该项指标水平升高在肝炎诊断中的应用受到了一定限制。随着免疫学、生物学技术水平的提高，临床发现了越来越多新型肝炎病毒，这为慢性乙型肝炎的诊断创造了有利条件[11-12]。

本研究结果显示，115例慢性乙型肝炎患者中，大三阳患者共有33例，构成比为28.70%；小三阳患者共有40例，构成比为34.78%；所有患者乙型肝炎病毒DNA 定量检测结果平均值为（3.27±0.42）106IU/ml；大、小三阳患者的乙型肝炎病毒DNA 定量测定值高于其他类型患者（P＜0.05）。究其原因，乙肝两对半为临床测定血液内乙型肝炎病毒的血清学标志，大三阳提示为急性或慢性乙型肝炎，具有较强传染性；而小三阳提示为传染性相对较弱的急性或慢性乙型肝炎[13]。乙肝两对半检测不仅操作简单，且检测结果能准确反映机体的病毒免疫反应状态，可为疾病治疗、预后评价提供重要参考依据。乙型肝炎病毒DNA 定量检测是一种利用DNA 对乙型肝炎病毒进行检测的技术，可用来判断乙型肝炎病毒的复制情况[14]。通常情况下，临床将乙型肝炎病毒DNA定量检测结果超过103判定为阳性，将103～105判定为低量复制，将≥107判定为大量复制。乙肝两对半难以对病毒复制情况进行判断，而乙型肝炎病毒DNA 定量检测则能有效弥补该缺陷，故两者联合检测的应用价值更加明显。

综上所述，乙肝两对半联合乙型肝炎病毒DNA 定量检测在慢性乙型肝炎诊断中具有一定临床价值。