2种全自动化学发光法检测平台检测抗苗勒管激素评估卵巢储备能力的比较

冯奕习，彭伟如，陈丹华，李汉秋，陈见辉，陈小冰

(东莞市中医院检验科，广东 东莞 523000)

抗苗勒管激素(AMH)是转化生长因子β超家族的一种多肽分子，由卵巢的前窦颗粒细胞和卵泡分泌，是目前预测卵巢储备的最佳生物标志物[1]。AMH在调节原始卵泡募集和卵泡生长中起着重要作用[2-3]。AMH可抑制卵泡刺激素(FSH)的作用，导致排卵障碍，从而使卵泡持续生长；AMH也可下调颗粒细胞的芳香化能力，减少雌二醇(E2)的产生，直到卵泡达到8 mm时AMH含量迅速降低至无法检测到，而E2浓度迅速上升[1-3]。因此，AMH测定值与FSH和E2密切相关。有文献[1]报道高水平的AMH与卵巢癌和多囊卵巢密切相关，但在绝经后女性的血液中却检测不到。目前AMH在生殖医学中常用于评估卵巢储备和预测体外受精(IVF)前药物刺激后的卵巢反应[4-5]。因此，血清AMH含量的检测在IVF用药的临床决策、个体化咨询以及其他相关的临床应用中具有较好的指导意义。

AMH检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)和电化学发光法等，其中亚辉龙公司和贝克曼公司的AMH检测平台采用的化学发光法，灵敏度和自动化程度高，报告稳定，适合临床大样本的检测。本研究分别使用贝克曼UniCel DxI 800和亚辉龙iFlash3000 2种检测平台对125例女性血液样本进行AMH浓度检测，评估2种平台在卵巢储备功能中的作用，为相关临床疾病的诊断和辅助治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器及试剂

全自动化学发光分析仪：iFlash 3000(深圳亚辉龙，中国)和UniCel DxI 800(贝克曼库尔特公司，美国)。试剂盒为iFlash AMH和Access AMH，检测范围分别为：0.01～16.0 ng·mL-1和0.02～23.7 ng·mL-1，检测下限分别为0.01和0.02 ng·mL-1。所有的检测程序均严格按照说明书进行，使用各自厂家提供的质控品进行日常的质控。

1.2 一般资料

选取2020年5—7月东莞市中医院妇科门诊就诊的125例女性患者，于月经周期第2—4天抽血进行AMH浓度检测，同时行阴道超声检测确定患者卵泡数。根据血清AMH检测平台的不同分为亚辉龙组和贝克曼组。另参照文献[6-7]根据卵泡数评估卵巢储备能力，并以卵巢储备功能不同将125例患者分为5个亚组，即亚组1(围绝经期组)12例，年龄为50～60岁，平均年龄(49.92±3.50)岁，其卵泡数(AFC)为0；亚组2(卵巢低反应组)20例，年龄为(39.75±3.78岁)，其AFC为0～7个；亚组3(卵巢功能正常组)17例，年龄为(33.18±3.54)岁，其AFC为8～15个；亚组4(卵巢高反应组)19例，年龄为(28.42±2.69)岁，其AFC为16～23个和亚组5(多囊卵巢综合征，PCOS组)57例，年龄为(30.04±3.46)岁，其AFC>24个。

1.3 实验方案

基于美国临床实验室标准化委员会EP文件的标准要求[8]，根据2个检测平台试剂盒检测的线性范围，选取已知的AMH高、中、低浓度3个水平的血清标本各1份，在亚辉龙和贝克曼仪器重复检测20次，用于批内精密度分析；每份标本每天测定1次，持续20 d，用于批间精密度分析。125例血清样本分别在2个平台上，用化学发光法检测AMH浓度后进行一致性相关分析。

1.4 统计学方法

采用MedCalc软件进行数据处理。使用受试者工作特征曲线(ROC)对AMH评估卵巢储备能力进行比较。使用Bland-Altman、Passing-Bablok回归和Wilcoxon秩和检验比较2个检测平台测量值的均差值、测量值的相关性以及配对样本的差值差异[9]。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度验证

批内和批间精密度分析结果显示，2种全自动化学发光法平台测定AMH水平均具有良好的精密度：低、中、高3个浓度样品的贝克曼测定值批内变异系数(CV)分别为2.08%、1.42%和1.34%，批间CV分别为 3.40%、2.35%和2.05%；亚辉龙测定值批内CV分别为1.77%、1.06%和1.08%，批间CV分别为2.63%、2.16%和1.91%。见表1。

表1 2组精密度分析的比较 ng·mL-1

2.2 AMH评估卵巢储备能力

2种平台检测AMH浓度结果显示，2组AMH浓度测定值在卵巢储备能力上比较一致，表现为随着卵泡数的增加，AMH浓度呈增加趋势，围绝经期组最低，PCOS组最高。见表2。

表2 2组测定AMH评估卵巢储备能力的比较

表2 2组测定AMH评估卵巢储备能力的比较

组别nAMH亚辉龙亚组1120.078±0.111亚组2200.691±0.579亚组3173.062±1.629亚组4195.123±1.230亚组55712.635±3.356贝克曼亚组1120.047±0.051亚组2200.462±0.529亚组3172.717±1.777亚组4194.591±1.455亚组55715.825±5.402

2.3 AMH对卵巢储备能力评估价值的测定

与贝克曼组比较，亚辉龙组区分卵巢储备能力较好。在区分围绝经期组与卵巢低反应组、卵巢低反应组与卵巢功能正常组、卵巢功能正常与卵巢高反应组、卵巢高反应组与PCOS组上，亚辉龙检测平台测定AMH的截断值分别为0.095、0.665、2.130和5.345 ng·mL-1，曲线下面积(AUC)分别为0.965、0.956、0.947和0.910，贝克曼组的截断值分别为0.085、0.776、2.365和6.090 ng·mL-1，AUC分别为0.992、0.956和0.960。见表3。2个平台测定AMH浓度区分卵巢高反应组和PCOS组样本的ROC曲线图。见图1。

表3 2组测定AMH对卵巢储备能力评估价值的比较

1-特异度

2.4 AMH检测一致性的相关分析

一致性相关分析结果显示，2组检测AMH具有良好的相关性，一致性相关系数ρc=0.849，95%CI=0.803～0.885，相关系数ρ为0.903，Pearson相关系数为0.934。Passing-Bablok回归结果显示，y轴亚辉龙数据的截距为0.343(95%CI=0.284～0.559)，斜率为0.786(95%CI=0.761～0.836)。见图2。Wilcoxon秩和检验显示贝克曼和亚辉龙系统检测值存在显著的差异(Z=-2.40，P=0.016)。根据Bland-Altman图，两者的平均值偏差为1.3 ng·mL-1，其差异主要在0线值以下，贝克曼检测约比亚辉龙产生的数据高0.10倍。见图3和图4。

贝克曼/(ng·mL-1)

AMH测定均值/(ng·mL-1)

AMH均值/(ng·mL-1)

3 讨论

AMH Gen II ELISA是检测AMH的经典试剂盒，使用了两对可识别表位的高度特异性单克隆抗体F2B/7A和F2B/12H，其检测下限为0.08 ng·mL-1[10]。新上市的贝克曼Access AMH检测试剂盒，抗体与上述试剂盒一致，但由于采用了化学发光法，使得其稳定性、检测灵敏度大大提高[11]。 亚辉龙 AMH免疫测定的核心技术是一步式夹心免疫测定法，使用顺磁微粒包被AMH抗体，吖啶标记的AMH抗体结合物，形成夹心(抗体-抗原-抗体)复合物，该抗体与Access AMH检测试剂盒使用的抗体不一致[12]。尽管核心抗体不一致，但2种自动化检测平台测定AMH均具有出色的批内和批间精密度，其CV均低于3%，低于制造商规定的限值。表明样本检测的一致性较高，无需重复测定。最近的报道[12-13]表明，使用2种自动化方法测定AMH时，实验室内部和实验室外部的检测值之间无显著性变化，表明检测平台较稳定。故本研究和前人研究结果均表明，对设备和测试方法的分析性能验证结果显示2种检测平台的测试结果可以在实验室内部互认。

本研究采用亚辉龙和贝克曼2个检测平台测定AMH值用于评估研究对象的卵巢储备能力，结果发现，测定的AMH浓度与卵泡数高度相关，与ANDERSON研究[14]结果一致。该研究使用罗氏AMH测定试剂盒对AMH测定值评估生长卵泡池的价值进行了前瞻性研究，研究结果表明AMH浓度与AFC数量具有良好的相关性。本研究结果还显示，采用2种平台区分卵巢低反应、功能正常和高反应、以及围绝经期组和PCOS组的灵敏度和特异度均接近或超过90%，诊断的AUC均大于0.90，表明采用2个平台检测的AMH值均可以预测女性的卵巢储备功能，这与此前的使用贝克曼和罗氏化学发光法测定AMH用于预测PCOS的研究结果相似[15]，表明2个检测平台测定AMH的能力较好。

CLSI EP09-A2文件规定[9]，为确保项目检测结果的一致性，实验室内部需要对不同仪器检测同一项目进行比对，若使用不同平台检测同一个项目并发放报告时，检测报告中除了列举检测项目结果外，理应报告使用的测定方法和仪器的特定名称。因此，为了满足实验室内部仪器性能的一致性，本研究对亚辉龙与贝克曼2种测定方法进行比较，相关性和偏差性分析结果表明2种方法之间的偏差仅为1.3 ng·mL-1，贝克曼测定AMH的均值比亚辉龙平台检测的AMH均值平均高0.1倍，Pearson相关系数为0.934，表明此2种平台较为吻合。上述研究结果表明在2个检测平台上AMH的测定存在均差值比例差异。故实验室技师和临床医师均应该意识到使用上述2个系统进行测定的一些局限性和差异性。

综上所述，本研究在亚辉龙和贝克曼2个自动化平台检测了125例临床样本的AMH浓度值，所测定的AMH浓度值均具有良好的预测卵巢储备功能的能力，与AFC数量预测的卵巢储备结果具有高度相关性，提示可用于生殖医学领域。