癫痫患儿血清α-突触核蛋白和热休克蛋白70的表达及临床意义*

黄凌锋，廉荣镇，肖 能，欧阳纯，陈 薇

郴州市第一人民医院儿科，湖南郴州 423000

癫痫是临床常见的一种中枢神经系统疾病，在儿童中患病率较高，我国癫痫每年患病率约为7%，其中10岁以下儿童占比达3.45%[1]。癫痫具有反复发作的特点，并伴有呼吸系统紊乱、循环系统紊乱、肌肉抽搐等表现，对神经元造成的损害较大，可影响脑代谢功能，随着神经元结构改变，甚至会导致认知障碍[2]。近年来，有学者发现，α-突触核蛋白(α-Syn)可导致线粒体结构受损，从而破坏神经细胞功能，可能引起认知障碍[3]。因此，临床有理由推测，α-Syn可能与癫痫患儿认知障碍发生有关。另有研究发现，热休克蛋白(HSP)可能与癫痫进展有关，例如，癫痫患者神经细胞受损后，其变性蛋白质对热休克蛋白70(HSP70)生成有诱导作用[4]。目前，临床对癫痫患儿α-Syn、HSP70的研究仍处于初步探索阶段，其具体作用机制尚未明确。基于此，本研究观察癫痫患儿血清α-Syn、HSP70与认知功能、事件相关电位及血清炎症细胞因子的关系，以期为临床诊疗提供思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2016年8月至2019年8月收治的癫痫患儿105例作为癫痫组。癫痫诊断参考《小儿癫痫的诊断与治疗》[5]：(1)临床发作。(2)脑电图检查提示痫样放电。①每天癫痫发作>3次，提示癫痫频发；②发作持续时间≥30 min或短期连续间断发病≥30 min，但间歇期未达到发病前状态，提示癫痫持续状态；③无上述特征的癫痫患儿即为非频发非持续状态。癫痫组男63例，女42例；年龄4～12岁，平均(8.72±3.25)岁；身高130～147 cm，平均(138.04±3.96)cm；体质量24～33 kg，平均(28.92±3.26)kg。根据患儿癫痫类型，将癫痫组患儿分为癫痫1组(癫痫频发)24例，癫痫2组(癫痫持续状态)38例，癫痫3组(非频发非持续状态)43例。另选取在本院进行体检的健康儿童68例作为健康对照组，其中男37例，女31例；年龄5～13岁，平均(9.09±3.65)岁；身高131～145 cm，平均(137.53±4.48)cm；体质量23～35 kg，平均(29.08±4.72)kg。两组性别、年龄、身高、体质量比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究方案获医院伦理委员会批准，受试者家属均签署知情同意书。

1.2纳入、排除标准 (1)纳入标准。癫痫组：①年龄≤15岁，符合上述关于癫痫的诊断标准；②经体检，未见神经系统阳性体征；③原发性癫痫，未见癫痫相关并发症；④病例资料完整；⑤监护人对研究内容知情同意。健康对照组：①身体健康状况良好；②性别、年龄等基线资料与癫痫组匹配；③监护人对研究内容知情同意。(2)排除标准：①入院前服用过抗癫痫药物者；②因颅脑外伤等其他非癫痫因素引起的认知障碍者；③因脑出血、中枢神经系统感染等诱发的继发性癫痫者；④近期使用过免疫抑制剂、激素类药物者；⑤重度营养不良者；⑥肝、肾、心等脏器严重受损者。

1.3仪器与试剂 主要试剂：人C反应蛋白(CRP)检测试剂(北京世纪沃德生物科技有限公司)、人α-Syn检测试剂(上海将来实业股份有限公司)、人HSP70检测试剂(美国eBioscience)以及血清白细胞介素-1β(IL-1β，成都超九八生物)、白细胞介素-6(IL-6，上海纪宁生物)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α，美国eBioscience公司)检测试剂。主要仪器：全自动生化分析仪(深圳迈瑞医疗，MR-96A)、诱发电位仪(上海企晟医疗器械有限公司，Nicolet EDX型)。

1.4方法

1.4.1检测方法 健康对照组在体检当日接受各项检查，癫痫组在治疗前进行检查。(1)血清指标检测：在受试者空腹状态下，采集4 mL静脉血，3 000 r/min离心20 min，离心半径为15 cm，分离血清，存放于-70 ℃低温冰箱待测。采用免疫比浊法检测血清CRP水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清α-Syn、HSP70、IL-1β、IL-6、TNF-α水平，严格根据试剂盒说明书操作。(2)事件相关电位P300检查：经诱发电位仪检测，设置非靶刺激、靶刺激2个等级，频率分别为750、2 000 Hz，将二者组成刺激序列。受试者选择坐位，通过耳机给声的形式诱发，根据国际电生理学会制定的标准[6]进行检测，记录P300波幅、P300潜伏期。(3)认知功能评估：参考中国韦氏儿童智力量表(C-WISC)[7]评价，该量表含有言语测验、操作测验2个部分，前者包括领悟、算术、知识、词汇、数字广度、相似，后者包括数字符号、积木、拼图、填图、排列。相对有效范围为55～145分，分值越高，提示智力越好。

1.4.2治疗方法 癫痫组在接受上述检查后，给予抗癫痫治疗，其中有54例经丙戊酸钠(上海青平药业有限公司，国药准字H31020728)治疗，剂量10～20 mg/(kg·d)，疗程3～5 d。51例采用卡马西平(北京诺华制药有限公司，国药准字H11022279 )治疗，剂量10～40 mg/(kg·d)，疗程7～14 d。

2 结 果

2.1两组血清α-Syn、HSP70及炎症因子水平比较 癫痫组血清α-Syn、HSP70、IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平均高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组血清α-Syn、HSP70及炎症因子水平比较

2.2两组C-WISC评分、事件相关电位P300比较 癫痫组C-WISC评分低于健康对照组，而P300潜伏期较健康对照组明显延长，差异均有统计学意义(P<0.05)，两组P300波幅比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组C-WISC评分、事件相关电位比较

2.3癫痫1、2、3组患儿α-Syn、HSP70及认知评分、事件相关电位、炎症因子比较 癫痫1组、癫痫2组的血清α-Syn、HSP70、IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平均高于癫痫3组，且P300潜伏期长于癫痫3组，而癫痫1组、癫痫2组的C-WISC评分低于癫痫3组，差异均有统计学意义(P<0.05)，其中癫痫2组血清IL-6、CRP、TNF-α水平低于癫痫1组，差异有统计学意义(P<0.05)，癫痫1、2、3组患儿P300波幅比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 癫痫1、2、3组患儿α-Syn、HSP70及认知评分、事件相关电位、炎症因子比较

2.4癫痫患儿血清α-Syn、HSP70与认知功能评分、事件相关电位、炎症因子的相关性 Pearson线性相关分析显示，血清α-Syn、HSP70与C-WISC评分呈负相关(P<0.05)，与P300潜伏期及血清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α呈正相关(P<0.05)，二者与P300波幅无相关性(P>0.05)。见表4。

表4 癫痫患儿血清α-Syn、HSP70与认知功能评分、事件相关电位、炎症因子的相关性

续表4 癫痫患儿血清α-Syn、HSP70与认知功能评分、事件相关电位、炎症因子的相关性

3 讨 论

癫痫是儿童中的常见病，对神经系统功能影响较大，在这类患儿中，30%～40%的病例出现智力损害，癫痫后认知功能障碍发生机制比较复杂，是多因素作用的结果，包括发作频次、病灶部位、癫痫类型、抗癫痫药应用情况等[8]。近年研究发现，α-Syn可通过对线粒体外膜进行干扰，导致其结构受损，诱发氧化应激，对神经细胞功能有损害作用[9]。这提示α-Syn可能对癫痫后神经功能损害有影响。HSP70是热休克蛋白的重要组成部分，其在健康脑组织中含量较少，而在癫痫发作时可见HSP70聚集[10]。故临床可考虑将血清α-Syn、HSP70用于癫痫患儿的病情评估，但现阶段临床对二者在癫痫中的作用机制尚未完全明确，仍需大量研究予以论证。

本研究结果显示，与健康儿童相比，癫痫患儿的血清α-Syn、HSP70增高(P<0.05)。α-Syn在神经组织内存在表达，对脑神经元有调节作用，其表达改变可能与其异常聚集存在关联，而氧化应激能促进α-Syn聚集[11]。α-Syn在表达水平较低时，能保护神经元，可发挥一定的抗过氧化氢功能，但其表达水平较高时，则会对神经元产生毒性，致神经功能受损[12]。HSP70能与聚集、错折叠、新生的蛋白质结合，解离某类蛋白质，使不溶性聚集物减少，在病理情况下释放入血。在癫痫发病后，脑细胞能对应激反应进行诱导，这种应激反应主要由蛋白质合成、蛋白质变性等机制所致，而变性蛋白质能诱导HSP70生成[13]。因此，癫痫后血清HSP70水平增高。本研究发现，癫痫患儿的血清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平均较健康儿童增高，提示癫痫患儿机体存在炎症。研究证实，炎症参与了癫痫病情进展，其能将机体抗癫痫途径阻断，导致癫痫加重，促使患儿处于持续癫痫状态，加重神经元损害[14]。这与本研究结论基本一致，因此，在癫痫的治疗中，临床需注重抗炎处理，缓解病情。

本研究结果提示，与健康儿童相比，癫痫患儿的C-WISC评分下降，而P300潜伏期延长，差异均有统计学意义(P<0.05)。P300电位能反映癫痫患儿的认知损害程度，潜伏期越长，表明大脑感知信息的能力越弱，出现明显的学习障碍以及信息加工能力损害[15]。本研究显示，癫痫患儿P300潜伏期延长，进一步证实其存在认知障碍。本研究结果还发现，与非频发非持续状态患儿相比，癫痫频发、癫痫持续状态患儿的血清α-Syn、HSP70水平更高(P<0.05)。α-Syn能与多巴胺结合生成多巴胺醌-突触核蛋白，导致神经元毒性增强[16]。而癫痫频发、癫痫持续状态者因癫痫发作频繁，间歇时间短，对神经元造成的损害更大，可能促进血清α-Syn表达进一步上调。HSP70对受损细胞有保护作用，但在应激状态下，其表达反而增高，原因可能在于，在出现应激损伤后，机体启动保护机制，产生应激性HSP70表达增高[17]。此外，本研究结果显示，3组患儿，癫痫3组的炎症因子水平最低，C-WISC评分最高，P300潜伏期最短，原因可能在于该组患儿癫痫程度最轻，其所遭受的神经元毒性最弱，故机体状态相对较好。

本研究结果显示，血清α-Syn、HSP70水平与C-WISC评分呈负相关(P<0.05)，而与P300潜伏期及血清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。α-Syn呈高表达时，可上调Bax表达，导致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性增强，对线粒体细胞色素C的大量释放有促进作用，可使细胞凋亡，加重炎性反应，损害认知功能，而其低表达可发挥抗过氧化氢作用，对神经元有一定保护作用[18]。HSP70在海马、丘脑等部位表达水平较高，上述区域均与认知功能密切相关，在出现影响脑功能的疾病时，可导致与认知功能相关区域受损，促进炎症介质释放，损害认知功能，在这种情况下，可能致HSP70表达应激性增高[19]。临床可将调节癫痫患儿的血清α-Syn、HSP70水平作为治疗新思路，改善预后。苏玉强等[20]研究发现，认知障碍大鼠的HSP70水平上升时，其神经元损害减轻。而本研究结果提示，在癫痫患儿认知功能受损情况下，HSP70反而出现应激性增高，分析原因可能与HSP70在发病后不同阶段的表达差异有关，或者与导致认知障碍的原发因素有关，这有待进一步探讨。

综上所述，癫痫患儿的血清α-Syn、HSP70水平较健康儿童明显增高，且二者变化受认知功能、P300潜伏期及机体炎症的影响。本研究局限性在于样本量较小，未来还需扩大样本量进行更深入的研究。