HPLC法测定五味消毒饮中菊苣酸的含量

韩惠超 叶世芸 李向东 杨洁

（1.贵州中医药大学 贵州贵阳 550002；2.贵州得轩堂护康药业股份有限公司）

1 前言

五味消毒饮出自清代《医宗金鉴》，具有清热解毒、消散疔疮的功效[1]，为清热解毒的代表方，其方剂由金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子等组成。目前，对于其质量标准的研究，尤其是方剂中蒲公英的指标性成分菊苣酸的检测尚未见报道，故本文采用高效液相色谱法对本方中蒲公英的有效成分菊苣酸的含量进行测定。

2 材料和仪器

材料：对照品菊苣酸（成都普瑞法科技开发有限公司，含量98%）。

五味消毒饮处方：金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子（药材来源信息见表1）；冰醋酸（色谱纯）、甲醇（色谱纯）；黄酒；娃哈哈纯净水。

表1 药材产地信息

仪器：高效液相色谱仪；煎药壶；电子分析天平；超声波清洗器。

3 方法与结果

3.1 溶液制备

3.1.1对照品溶液制备

精确称取菊苣酸对照品11.6 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶内，摇匀，充分混合均匀并稀释，制成含量为1.16 mg/mL的对照品溶液，备用。

3.1.2供试品溶液制备

按照表2组方，遵循古籍方法：取金银花11.19g、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子各4.48 g浸泡30min，加400 mL水文火煎煮20 min，放入100 mL黄酒武火煎煮5 min，用300目尼龙布过滤，药渣按同法再次煎煮，将2次煎液合并，用水定容至800 mL，共15批水煎液。分别取10 mL，通过0.22μm微孔滤膜进行过滤，备用。

表2 15批方剂药材信息

3.2 色谱条件

色谱柱：Welch UItimate XB-C18（4.6mm×250 mm，5μm）。

流动相：0.5%醋酸水溶液-甲醇梯度洗脱（0～10 min，10%～32%甲 醇；10～20 min，32%甲 醇；20～35 min，32%～46%甲醇）。

柱温：30℃。

流速：1.0 mL/min。

检测波长：320 nm。

进样量：10μL。

3.3 检测波长选择

将一定浓度对照品溶液于波长200～400 nm进行全波段扫描，结果表明在320 nm处有最大吸收。

3.4 线性关系

精确量取菊苣酸对照品贮备液，分别稀释成2、4、8、16、32倍，充分摇匀，即得含量为1.16、0.58、0.29、0.145、0.0725、0.03625 mg/mL的对照品溶液，各进样10μL，注入液相色谱仪中按“3.2”项下色谱条件进行测定。

以菊苣酸对照品测得的峰面积值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归分析，得回归方程为：

结果显示，菊苣酸在0.0725～1.16 mg/mL内呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精确量取供试品溶液，按3.2色谱条件测定，按“3.2”项下色谱条件重复进样测定6次，测得菊苣酸的峰面积并计算相对标准偏差RSD为2.85%，结果显示其精密度良好。

3.6 重复性试验

取同批五味消毒饮6份，于3.2色谱条件下对溶液的菊苣酸含量进行HPLC测定，结果显示菊苣酸的平均含量为0.0670 mg/mL，且在0.0662～0.0681 mg/mL内，其相对标准偏差RSD为1.17%（n=6），表明有良好的重复性。

3.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、16 h于3.2色谱条件下进样，结果表明含量的相对标准偏差RSD=1.93%（n=6），表明在12 h内供试品溶液中菊苣酸的含量基本稳定。

3.8 加样回收率试验

取同一份供试品溶液进行6次回收率试验，对照品加入量中的菊苣酸的含量和样品中的菊苣酸含量之和在规定的标准曲线线性范围内，结果表明6次同一供试品溶液中测得菊苣酸的平均回收率为100.2%，相对标准偏差RSD为1.58%（n=6），测得结果在规定范围内，表明该方法可行。

3.9 样品含量测定

对15批样品按3.2的色谱条件进行含量测定，结果表明15批五味消毒饮中菊苣酸的含量稍有不同，但RSD值较小，表明该方法稳定可行，见表3。

表3 五味消毒饮含量测定结果

4 讨论

五味消毒饮为《古代经典名方目录（第一批）》收录，方中银花清热解毒，消散痈肿；紫花地丁、蒲公英、野菊花，紫背天葵子清热解毒，凉血消肿[2]。目前并没有关于菊苣酸含量测定的相关研究，为确定蒲公英在处方中的含量，本文根据测定蒲公英菊苣酸的含量可以测定蒲公英含量的思路，通过试验，建立了测定五味消毒饮中菊苣酸的方法。本文采用Welch UItimate XB-C18色谱柱，0.5%醋酸水溶液-甲醇为流动相，检测波长为320 nm测定五味消毒饮中菊苣酸的含量，菊苣酸浓度的线性关系良好；精密度、重现性、稳定性、试验结果良好；且供试品按照《古代经典名方中药复方制剂及其物质基准申报资料要求（征求意见稿）》要求采用遵古的原则按照古籍的方法进行提取，该方法可为五味消毒饮的质量控制提供参考。