不同碳氮源对长根菇菌丝生长的影响*

熊 雪，李 鹏，向 准▲，赵晓朋，汪建文

(1贵州省生物研究所，贵州 贵阳 550009；2贵阳学院，贵州 贵阳 550002；3贵州科学院，贵州 贵阳 550001)

长根菇(Oudemansiellaradicata)属于白蘑科、奥德蘑属，又名长根奥德蘑、长根金钱菌、长根小奥德蘑等[1-2]。其菌肉白色而薄，味道鲜美，口感细嫩，富含多糖、蛋白质、氨基酸、脂肪、维生素等营养成分，深受消费者喜欢[1-3]。同时其特有的长根菇素对高血压患者有明显的降低血压的作用，其多糖成分对肿瘤有明显的抑制作用[3-6]，是一种优质的食药用真菌[7]，具有极大的研究价值。长根菇分布地广，在我国云南、河北、吉林、江苏、安徽、福建、广西、四川、西藏等大部分地区均有分布[8]。但由于长根菇栽培中需培土栽培，可重复性差、产量较低、病虫害严重，目前还很难实行规模化栽培[8]。因此，本文探索不同碳源、氮源对长根菇菌丝生长的影响，挑选较为适宜其生长的营养条件、温度条件，为培育高质量的长根菇菌丝奠定基础，为实现长根菇的规模化生产提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

供试长根菇菌株保藏于贵州省生物研究所。

1.2 实验培养基

活化培养基：马铃薯(去皮)200 g，葡萄糖20 g，KH2PO43 g，MgSO4·7H2O 1.5 g，维生素B110 mg，琼脂粉20 g，去离子水1000 mL，pH自然。

基础培养基：葡萄糖 20 g，(NH4)2SO42 g，KH2PO41 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，维生素B110 mg，琼脂20 g，去离子水1000 mL。

1.3 试验方法

1.3.1 菌种活化

制备长根菇活化培养基平板10个，无菌环境下将试管母种接种到长根菇活化培养基平板上(接种至平板的中心位置)，25 ℃恒温培养箱中培养活化备用。

1.3.2 不同碳源试验

以长根菇基础碳源培养基为对照，分别以等量果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖代替基础培养基中的葡萄糖，作为不同碳源培养基，每处理5次重复，将菌丝长至平板三分之二的活化平板用5 mm的打孔器将菌落打成圆片，然后接种于不同碳源平板的中心位置，25 ℃下进行培养，待菌丝萌发后开始采用划线法每日标记菌落直径(十字交叉法)，培养至菌丝长满或停止生长，测量菌落直径。菌丝铺满平板时，观察记录菌落的菌丝形态、色泽、菌落形状、菌丝长势和边缘特征等，用“+”“-” 表示菌丝的长势，“+” 越多表示菌丝生长得越好、越健壮、均匀，“-”表示菌丝不生长。

1.3.3 不同氮源试验

以等量的蛋白胨、酵母膏、谷氨酸、硝酸钾、尿素分别代替基础氮源培养基中的氮源硫酸铵，每处理5次重复。后续操作同1.3.2。

1.3.4 不同碳氮比试验

在固定温度培养基中调整碳氮比进行试验，碳源为葡萄糖，氮源为蛋白胨，碳源浓度为2%，添加不同重量蛋白胨，配成碳氮比10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1、80∶1、90∶1和100∶1(蛋白胨含碳量忽略不计)的培养基，每处理5次重复。后续操作同1.3.2。

1.3.5 不同温度试验

将菌丝长至平板三分之二的活化平板用5 mm的打孔器将菌落打成圆片，然后接种于长根菇活化培养基上，将接种好的平板分别放置在15 ℃、18 ℃、20 ℃、23 ℃、25 ℃、27 ℃、30 ℃的恒温培养箱中培养，每处理5次重复。其余操作同1.3.2。

1.4 数据统计

实验数据采用EXCLE及PASW Statistics 18.0统计软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 不同碳源对长根菇菌丝生长的影响

如表1所示，对于试验所选5种不同碳源，长根菇接种培养48 h后均能萌发，且正常吸收，菌丝铺满平板后为绒毛状白色圆形菌落。但不同碳源培养下日均生长速度不同，蔗糖、乳糖为碳源培养时，速度显著快于其他处理，平板铺满时间也最短，菌丝萌发后铺满平板仅需8 d，且长势最佳；碳源为果糖时，生长速度显著低于其他处理，铺满时间最长(11 d)，且长势最差。整体呈现蔗糖(10.00 mm/d)>乳糖(9.96 mm/d)>麦芽糖(8.81 mm/d)>葡萄糖(8.50 mm/d)>果糖(7.60 mm/d)的趋势。综上所述，在5种供试碳源中，长根菇菌丝生长最佳碳源为蔗糖，其次为乳糖、麦芽糖。

表1 不同碳源对长根菇菌丝生长的影响Tab.1 Effect of different carbon sources on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

2.2 不同氮源对长根菇菌丝生长的影响

如表2所示，长根菇菌丝在所选6种氮源培养下，菌落表现有差异。氮源为尿素时，菌丝不生长，其余5种氮源培养基，接种培养48 h后菌丝萌发，菌落为绒毛状白色圆形菌落。菌丝日均生长速度呈现出酵母膏(10.06 mm/d)>硝酸钾(9.89 mm/d)>蛋白胨(9.88 mm/d)>谷氨酸(9.67 mm/d)>硫氨酸(8.87 mm/d)>尿素(0 mm/d)。其中，菌落长势最好的为酵母膏，萌发后铺满平板时间也最短(8 d)；菌落长势较差的为硫酸铵，铺满平板时间最长(10天)。综上可知，长根菇的最佳氮源为酵母膏，其次为硝酸钾和蛋白胨，不能吸收尿素。

表2 不同氮源对长根菇菌丝生长的影响Tab.2 Effect of different nitrogen sources on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

2.3 不同碳氮比对长根菇菌丝生长的影响

结合表3、图1可知，在所设10∶1～100∶1碳氮配比范围间，长根菇接种培养48 h后均可萌发，长满平板后菌落呈绒毛状白色圆形菌落。菌丝生长速度存在一定差异，随着碳源的增加，整体呈波浪式增长。碳氮比为40∶1、60∶1、100∶1时，菌落长势较好且快，仅需8 d铺满平板；其余处理下菌落长势相当，速度较慢，需9 d方能铺满平板。在碳氮比为40∶1时菌丝日均生长速度最快(11.53 mm/d)，在碳氮比为10∶1时菌丝日均生长速度最慢(9.14 mm/d)。综上可知，碳源为葡萄糖，氮源为蛋白胨时，长根菇对碳氮配比的要求不严，均能较快的生长，其中最佳碳氮比为40∶1。

表3 不同碳氮比对长根菇菌丝生长的影响Tab.3 Effect of different carbon-nitrogen ratios on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

图1 不同碳氮比对长根菇菌丝生长速度的影响Fig.1 Effect of different carbon-nitrogen ratios on the mycelial growth speed of Oudemansiella radicata

2.4 不同温度对长根菇菌丝生长的影响

如表4、图2所示，在不同温度条件下，长根菇菌丝生长过程表现出明显差异。随着温度的增加，菌丝生长速度整体呈现先增后减的趋势，其中23 ℃下菌丝生长最快(8.84 mm/d)，15 ℃下菌丝生长最慢(6.63 mm/d)。15～20 ℃下，菌丝生长慢、长势差，萌发后所需铺满时间也较长。23～25 ℃条件下，菌丝仅需48 h方可萌发，萌发后10 d内铺满平板，整体长势较好。27～30 ℃条件下，菌丝萌发时间晚，但生长速度快，整体长势一般。综上可知，长根菇菌丝生长对温度条件的适应范围较广，15～30 ℃均能正常萌发，且生长速度较快，但结合菌丝长势及萌发时间可得，最适宜长根菇生长的温度为23～25 ℃。

表4 不同温度对长根菇菌丝生长的影响Tab.4 Effect of different temperature on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

图2 不同温度对长根菇菌丝生长的影响Fig.2 Effect of different temperature on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

3 结论与讨论

在以往国内学者对长根菇的研究中，或深或浅都有提到长根菇菌丝生长阶段对碳氮源的吸收较为广泛[9-10]。本文也证实了这一点，在试验所选5种碳源、7种氮源中，除氮源尿素外，长根菇菌丝对其他氮源都能较好的吸收，且对酵母膏的吸收是最好的，这一点同李建宗的研究结果相同，不同的是长根菇菌丝对碳源乳糖的吸收与否存在较大差异，这很有可能因地方上长根菇品种上的差异造成的，但具体原因需更进一步的研究。樊有赋等人研究长根菇鳞柄变种的营养条件得到，长根菇鳞柄变种同样能吸收碳源乳糖，且最佳氮源为硫酸铵和牛肉膏[11]，这同本文及李建宗的研究结果有相似也有差异的地方，品种可能是造成这类差异的首要原因之一。本研究还发现长根菇菌丝生长对碳氮比要求不严，碳氮比10∶1～100∶1均能较好、较快的生长，最适碳氮比为40(葡萄糖)∶1(蛋白胨)，且菌丝在15～30 ℃下均能萌发且较快生长，有较广的适温范围。综上说明长根菇菌丝生长对碳氮源的种类及配比选择都较为广泛，对温度的适应范围也广，在生产中，该菌种母种生产应是易于把握的。但实际上长根菇目前仍无法实现较为大规模的种植推广，这难关很大可能集中在子实体原基的形成和子实体的生长上，具体需要更进一步对长根菇栽培技术进行系统的研究。