血清微小RNA-210、白细胞介素-17水平与急性脑梗死患者颈动脉狭窄程度的相关性

杨 洁, 王本孝, 王俊珺

(安徽皖北煤电集团总医院 神经内科, 安徽 宿州, 234000)

急性脑梗死(ACI)起病急，需及时进行有效的治疗，故早期快速而准确地诊断病情非常重要[1]。动脉粥样硬化形成颈动脉狭窄、闭塞，造成脑组织局部缺血或颈内动脉急性闭塞、斑块脱落是ACI发病的重要机制，颈动脉狭窄程度与ACI的发生、病情程度、预后均有紧密关联[2]。微小RNA(miRNA)目前已被应用于相关疾病的临床诊断与鉴别中，其中微小RNA-15b(miR-15b)、微小RNA-210(miR-210)是目前热门关注miRNA。miR-210已被证实与脑损伤、神经元凋亡有一定联系[3], 可能也与ACI颈动脉狭窄程度相关。此外相关研究[4]表明, miR-210表达与ACI患者炎症反应密切相关。除miRNA外，炎症反应也参与了ACI患者颈动脉狭窄进程，多种炎症因子表达异常与颈动脉狭窄有关[5]。炎症因子中，白细胞介素-17(IL-17)被证实能诱导粒细胞集落刺激因子表达，增加基质金属蛋白酶表达，可诱导斑块破裂，与动脉粥样硬化关系密切[6]。由此推测, miR-210、IL-17可能与ACI患者颈动脉狭窄程度也存在一定联系，但目前尚未明确。本研究重点分析了miR-210、IL-17与ACI患者颈动脉狭窄程度的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选择本院2019年1月—2020年12月收治的95例ACI患者作为研究对象，患者与家属均对研究知情且自愿签署同意书。纳入标准: ① 符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》[7]中ACI的诊断标准，并经脑部CT或MRI检查确诊ACI者; ② 颈动脉超声检查确诊颈动脉狭窄者; ③ 病变部位为颈内动脉供血区域者。排除标准: ① 短暂性脑缺血者; ② 有脑梗死病史者; ③ 合并其他心脑血管疾病者; ④ 合并感染性疾病或免疫性疾病者; ⑤ 近期(1个月内)使用免疫抑制剂或抗炎药物者。95例患者中，男58例，女37例; 年龄43～85岁，平均60.00岁(58.00, 62.00); 体质量指数为18.23～25.75 kg/m2, 平均22.02 kg/m2(21.83, 22.27); 发病至入院时间3～12 h, 平均7.24 h(6.72, 7.61)。

1.2 方法

1.2.1 血清指标检测方法: ① 炎症因子水平。采集4 mL空腹静脉血, 3 500转/min(半径10 cm)离心10 min,-20 ℃下保存待测，使用上海酶联免疫科技有限公司提供的试剂盒以酶联免疫法测定IL-17、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。② miRNA水平。采集2 mL空腹静脉血, 3 000转/min(半径12 cm)离心10 min,-80 ℃下保存待测。加入1 mL的Trizol RNA(美国Invitrogen公司)提取RNA，使用紫外分光光度计(美国THERMO公司, ND-1000N)检测RNA总纯度，达标(1.8～2.0)后通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)用2﹣△△Ct法[△Ct=Ct(miR-15b)-Ct(U6)、△Ct=Ct(miR-210)-Ct(U6)]计算血清miR-15b、miR-210相对表达水平。

1.2.2 颈动脉狭窄程度评估方法和分组方法: 患者入院后1周内完成相关检查，通过数字减影血管造影(DSA)、CT血管成像(CTA)等影像学检查方法测定颈动脉狭窄范围。根据颈动脉狭窄范围评估患者颈动脉狭窄程度为重度狭窄(狭窄范围>70%)、中度狭窄(狭窄范围为50%～70%)、轻度狭窄(狭窄范围<50%)，并分别纳入重度狭窄组、中度狭窄组、轻度狭窄组。

1.3 统计学分析

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据处理，计量资料均经Shapiro-Wilk正态性检验，偏态分布的数据以[M(P25,P75)]表示，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验，计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验，血清指标与ACI患者颈动脉狭窄程度的相关性采用Kendall′s tau-b相关性分析检验，偏态分布变量间相关性采用Spearman相关性分析检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 颈动脉狭窄程度

本研究95例ACI患者颈动脉狭窄范围的检查结果显示, 23例(24.21%)患者颈动脉狭窄范围>70%, 属于重度狭窄, 40例(42.11%)患者颈动脉狭窄范围为50%～70%, 属于中度狭窄, 32例(33.68%)患者颈动脉狭窄范围<50%, 属于轻度狭窄。

2.2 3组ACI患者基线资料及血清指标水平比较

3组患者性别、年龄、体质量指数、发病至入院时间比较，差异无统计学意义(P>0.05); 重度狭窄组患者miR-15b、miR-210表达水平低于中度狭窄组、轻度狭窄组患者, IL-17、IL-1β、TNF-α水平高于中度狭窄组、轻度狭窄组患者，中度狭窄组患者miR-15b、miR-210表达水平低于轻度狭窄组患者, IL-17、IL-1β水平高于轻度狭窄患者，差异均有统计学意义(P<0.05); 中度狭窄组患者TNF-α水平与轻度狭窄组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组ACI患者基线资料及血清指标水平比较[n(%)][M(P25, P75)]

2.3 血清指标与ACI患者颈动脉狭窄程度的相关性分析

Kendall′s tau-b相关性分析显示, miR-15b、miR-210与ACI患者颈动脉狭窄程度呈负相关(P<0.001), 而IL-17、IL-1β、TNF-α与ACI患者颈动脉狭窄程度呈正相关(P<0.001)。见表2。

表2 血清指标与ACI患者颈动脉狭窄程度的相关性

2.4 miR-210与IL-17的相关性分析

Spearman相关性分析结果显示, ACI患者的血清miR-210水平与血清IL-17水平呈显著负相关(rs=-0.697,P<0.001)。

3 讨 论

ACI是临床常见的脑血管疾病，也是目前导致脑血管疾病患者残疾的因素之一。颈动脉狭窄是ACI患者的主要病因之一，且颈动脉狭窄程度与ACI患者预后情况存在密切联系[8-9]。由此可见，分析ACI颈动脉狭窄程度相关指标对ACI患者的早期诊治具有较为重要意义。ACI患者发病后存在不同程度缺血、缺氧，而缺血、缺氧会影响miRNA变化，多种miRNA在脑缺血、脑缺氧、再灌注损伤等过程中均有一定调节作用[10]。其中, miR-210在脑缺血发生后表达异常，动物实验研究[11]表明, miR-210在脑缺血后血管新生过程中有一定促进作用, miR-210与ACI进展有关。炎性因子介导的炎症免疫反应也参与ACI颈动脉狭窄的发生发展, IL-17是一种分泌于T淋巴细胞亚群的促炎因子，对各种炎症反应均有一定促进作用，可能也与ACI的进展相关[12]。由此推测，miR-210、IL-17可能与ACI颈动脉狭窄程度相关。

本研究相关性分析结果显示, miR-15b、miR-210与ACI患者颈动脉狭窄程度呈负相关，而IL-17、IL-1β、TNF-α与ACI患者颈动脉狭窄程度呈正相关。因miR-15b、IL-1β、TNF-α与ACI患者颈动脉狭窄程度相关系数较小，本研究重点分析miR-210、IL-17与ACI患者颈动脉狭窄程度的关系。miR-210与ACI患者颈动脉狭窄程度相关可能是由于miR-210是一种缺氧激活因子，与机体缺血、缺氧具有紧密联系，而ACI患者存在不同程度的缺血缺氧，从而影响miR-210水平[13]。同时, miR-210在缺氧环境中可促进新生血管形成，从而改善机体缺血缺氧, miR-210低表达可能会降低其减轻脑缺血损伤的作用，弱化miR-210抑制ACI颈动脉狭窄进展的作用[3, 14]。因此，随着miR-210表达水平的降低, ACI患者颈动脉狭窄程度加重。在ACI疾病发生发展进程中，炎症反应起着一定作用, IL-17通过调节炎症因子，诱导中性粒细胞趋化，可增加白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)等因子释放，促进动脉粥样硬化形成和发展，从而加重颈动脉狭窄程度[15-16]。同时, IL-17可增加调控因子、粒细胞集落刺激因子等因子生成，而这些细胞因子具有促进动脉粥样硬化的作用[17]。此外, IL-17还会刺激巨噬细胞与平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶，诱导细胞外基质的降解而导致动脉粥样硬化斑块破裂，因此, IL-17间接加重了颈动脉狭窄[18]。相关研究[19]证实, miRNA参与ACI患者的免疫调节、信号传导等，从而影响机体炎症反应，且两者可以相互调节。

本研究Spearman相关性分析结果显示, ACI患者血清miR-210水平与血清IL-17水平呈负相关。分析原因, miR-210对JAK激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号途径具有调节作用，而JAK/STAT涉及多种信息，具有重要的修复和抗炎作用，可能抑制炎症因子，利于IL-17下调[20]。因此, miR-210与IL-17存在联系，两者可能相互作用，共同参与并影响ACI患者的颈动脉狭窄过程。

综上所述，血清miR-210低表达、IL-17高表达与ACI患者颈动脉狭窄程度加重有关，且血清miR-210水平与IL-17水平呈负相关，两者可能相互影响并共同参与ACI患者的颈动脉狭窄过程。