清热祛瘀汤对慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的影响

杨成成 季晓黎 文怡 尹小兰 杨伊斯

摘要 目的：探討清热祛瘀汤对慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的炎性反应细胞因子及粘连相关免疫分子的影响。方法：选取100只Wistar雌性大鼠为研究对象，以随机分组方式将其分为5组，分别为模型对照组、假手术组、清热祛瘀汤组（包括低、中、高3种不同剂量），每组20只;除假手术组外，其余5组均建立盆腔炎性疾病大鼠模型;于清热祛瘀方作用下对其炎性反应细胞因子、血液流变学、粘连相关免疫分子变化情况进行分析。结果：与假手术组比较，模型对照组大鼠血液流变学各指标均明显升高变（P<0.05）;而经治疗后，各指标均明显下降，且与模型对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）;模型对照组与假手术组比较，大鼠血清IL-4、IL-10、TNF-α、IgA、IgG差异均有统计学意义（P<0.05）;经治疗后，清热祛瘀方各剂量组各指标水平均发生明显改变（P<0.05）。结论：清热祛瘀汤对慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的炎性反应细胞因子及粘连相关免疫分子、血液流变学均有较大影响，可推广应用。

关键词 清热祛瘀汤;慢性盆腔炎性疾病;炎性反应细胞因子;血液流变学;免疫分子;大鼠;粘连相关免疫分子;假手术

Experimental Study on Qingre Quyu Decoction on Inflammatory Cytokines and Adhesion-associated

Immune Molecules in Rats with Chronic Pelvic Inflammatory Disease

YANG Chengcheng，JI Xiaoli，WEN Yi，YIN Xiaolan，YANG Yisi

（Department of Gynecology，Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610072，China）

Abstract Objective：To investigate the effects of Qingre Quyu Decoction on inflammatory cytokines and adhesion-related immune molecules in rats with chronic pelvic inflammatory disease.Methods：One hundred female Wistar rats were selected as subjects.They were randomly divided into five groups：model control group，sham operation group and Qingre Quyu Decoction group（including three different doses of low，medium and high），with 20 rats in each group.Except for the sham operation group，the other 5 groups established a rat model of pelvic inflammatory disease; the changes of inflammatory cytokines，hemorheology and adhesion related immune molecules were analyzed under the action of Qingre Quyu Decoction.Results：Compared with sham operation group，the indexes of hemorheology of the model control group were significantly increased（P<0.05）.After treatment，the indexes were significantly decreased，and the differences were Statistically significant compared with the model control group（P<0.05）.There were statistically significant differences in serum IL-4，IL-10，TNF-α，IgA and IgG between model control group and sham operation group（P<0.05）; After treatment，the levels of of indexes in each dose group of Qingre Quyu Decoction significantly changed（P<0.05）.Conclusion：Qingre Quyu Decoction has great influence on inflammatory cytokines，adhesion related immune molecules and hemorheology in chronic pelvic inflammatory disease rats，and can be popularized and applied.

Keywords Qingre Quyu Decoction; Chronic pelvic inflammatory disease; Inflammatory cytokines; Hemorrheology; Immune molecules; Rats; Adhesion-related immune molecules; Sham operation

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.02.013

盆腔炎性疾病（Pelvic Inflammatory Diseases，PID）为女性常见疾病，为性活跃期女性发生率较高的一种上生殖道感染性疾病[1-2]。急性期若未得到有效治疗，则极易因病程迁延、患者体质差等因素而逐渐形成慢性盆腔炎性疾病（CPID）。而慢性盆腔炎性疾病的病情较为顽固，极易导致患者出现月经不调、白带异常增多、腰腹疼痛等症状;且慢性盆腔炎性疾病还可引发盆腔静脉曲张，从而诱发盆腔淤血综合征，严重时甚至可引发不孕，严重影响女性健康[3-4]。如何有效改善患者病情，提高女性生命质量已成为临床关注的重点。既往，临床上通常将现代医学抗感染等药物作为治疗该病的常用手段，但效果并不理想。且随着广谱抗生素的应用，致使药物耐药性不断升高[5-6]。近年来，临床上逐渐将中医疗法应用于慢性盆腔炎性疾病患者的治疗中。基于此，本次研究中以盆腔炎性疾病模拟大鼠为研究对象，采用中医清热祛瘀汤进行治疗，并分析该汤药对大鼠炎性反应细胞因子、粘连相关免疫分子、血液流变学等的影响，以阐明该疗法在慢性盆腔炎性疾病中的应用效果。具体研究如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 选取100只SPF级Wistar雌性大鼠为研究对象，所有大鼠均由成都中医药大学动物实验中心提供，实验動物合格证号：SCXK（甘）2004-0006-0000010;大鼠鼠龄10～14周，平均鼠龄（12.2±0.8）周;大鼠体质量190～248 g，平均体质量（219.9±15.4）g，保持环境温度22～25 ℃，湿度40%，明暗光照12 h/12 h，自由饮食。动物伦理学内容（伦理审批号：20180221）。

1.1.2 药物 清热祛瘀汤方组成主要为：白芷、红藤、没药、延胡索、土茯苓、当归、野菊花、五灵脂、黄柏、赤芍、乳香、丹参。方中所用药材均由成都中医药大学炮制实验室提供，且所有药材均经专业人员鉴定，满足药典质量要求。上述诸药均加水浸泡2 h，然后用水煎煮，对滤液进行过滤、合并，然后将其浓缩至规定浓度，最后进行冷藏备用。

1.1.3 试剂与仪器 10%水合氯醛（中国白鹤化工厂提供，批号：980101），酶联免疫吸附试剂盒（上海易莎生物科技有限公司提供，批号：E20160903）;多功能酶标仪（Tecan集团奥地利有限公司，型号：Tecan Infinite M200 PRO），电子计价秤（广东香山有限公司，型号：ACS-30-JE11），型恒温水浴锅（河北润连机械设备有限公司，型号：HHS-2S），冰箱（上海拓纷制冷设备有限公司，型号：BCD-290W），移液枪（上海医乐医用光学仪器厂，型号：DY47914），全自动血液流变仪（北京中勤世帝科学仪器有限公司，型号：LG-R-80A），全自动血液黏度仪（北京中勤世帝科学仪器有限公司，型号：LG-R-80E），离心机（上海云楼医用仪器厂，型号：80-1）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 以随机分组方式将100只大鼠分为5组，分别为模型对照组、假手术组、清热祛瘀汤组高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组20只;各组大鼠均进行为期1周的适应性饲养。然后以10%水合氯醛进行麻醉处理，麻醉起效后，以仰卧体位固定大鼠，在大鼠下腹部手术部位行去毛处理，常规消毒，沿腹中线在尿道口上方10 mm处做8～10 mm长的切口，对右侧子宫进行暴露，然后在距离卵巢20 mm部位，以5号针头将子宫划伤，然后向右侧输卵管-卵巢方向注入0.05 mL浓度为25%的苯酚胶浆溶液;然后逐层关闭腹腔，建立盆腔炎性疾病模型，完成造模。然后假手术组大鼠，在切开暴露后，直接进行关闭腹腔及消毒处理;术后，所有大鼠均常规进行为期1周的饲养

1.2.2 给药方法 第8天开始，依照人和大鼠药量换算方式对用药剂量进行换算，然后分别进行药物灌胃处理，其中假手术组与模型组均以10 mL/kg蒸馏水行灌胃处理，低剂量组以5.3 g/kg的清热祛瘀汤进行灌胃处理，中剂量组与高剂量组则分别以10.5 g/kg、21.0 g/kg的清热祛瘀汤灌胃;各组均灌胃1次/d，连续治疗4周。

1.2.3 检测指标与方法 最后1次给药后24 h，将禁食不禁水16 h的大鼠以350 mg/kg浓度为10%的水合氯醛行腹腔麻醉处理，麻醉起效后，行破腹处理，采集腹主动脉血6 mL，并以1∶125单位抗凝。然后取经肝素抗凝的全血0.8 mL，将其置于全自动血液流变仪、全自动血液黏度仪进行测定，测量指标包括全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、红细胞压积等;剩余全血以4 000 r/min，离心半径15.0 cm，离心5 min）进行离心处理;然后取0.8 mL血浆置于全自动血液流变仪上行血浆黏度测定。取在-20 ℃环境下保存备用的血清进行炎性反应细胞因子及粘连相免疫分子测定，包括IgA、IgG、IL-4、IL-10、TNF-α个指标均选用酶联免疫吸附试剂盒，并严格按照试剂盒相关说明书进行测定。

1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，计量数据以均数±标准差（±s）表示，采用t检验;计数资料用例（%）表示，进行χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血液流变学情况比较 与假手术组比较，模型对照组大鼠血液流变学各指标均明显升高变（P<0.05）;而经治疗后，各指标均明显下降，且与模型对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 各组炎性反应因子水平比较 模型对照组与假手术组比较，大鼠血清IL-4、IL-10、TNF-α差异均有统计学意义（P<0.05）;经治疗后，清热祛瘀方各剂量组各指标水平均发生明显改变（P<0.05）。见表2。

2.3 各组相关免疫分子指标比较 模型对照组与假手术组比较，大鼠血清IgA、IgG差异均有统计学意义（P<0.05）;经治疗后，清热祛瘀方各剂量组各指标水平均发生明显改变（P<0.05）。见表3。

2.4 清热祛瘀汤大鼠子宫病理学影响研究 正常对照组大鼠子宫组织结构正常，壁界清晰，无明显充血点及炎性浸润表现;模型组大鼠可见明显炎性细胞浸润，结缔组织增生明显，黏膜上皮细胞可见明显变性、坏死区;经清热祛瘀汤干预后，大鼠子宫组织结构恢复正常，炎性细胞浸润及组织增生减少。见图1。

3 讨论

慢性盆腔炎性疾病也叫盆腔炎性疾病后遗症，其主要是指女性内生殖器及周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎性反应，具有病程长、易复发等特点[7-8]。多是因急性盆腔炎性疾病未能得到及时、彻底治疗，致使病情迁延、反复发作所致。慢性盆腔炎性疾病患者多可见盆腔组织增厚、粘连、下腹疼痛、白带异常等现象，严重者甚至可引发不孕等严重后果，对女性健康乃至家庭生命质量造成严重影响[9]。抗菌药物为临床上治疗该病的常用方式，然而长期或反复予以患者多种抗菌药物联合治疗往往难以取得理想效果。

近年来，临床上逐渐将中医应用于该病的治疗中，中医认为，慢性盆腔炎性疾病属于“腹痛”“癥瘕”“带下”等范畴[10]，认为该病的发生与血瘀、湿热有较大关联，而湿热内停、反复进退、邪毒内存、正气不足则是导致该病发生的重要病机。因此，中医通常将活血化瘀、清热利湿作为治疗该病的关键。本研究中所选用的清热祛瘀汤，其方中所含有的野菊花、红藤、土茯苓等药物均有清热解毒、活血通络、散瘀的功效;与黄柏相配伍，可促使清热效果增强;延胡索则均具有辛散温通的功效;而没药、当归、乳香、五灵脂、赤芍、丹参等药物则具有消肿止痛、行氣活血的作用;与白芷相配伍则可发挥通滞散结的功效;且丹参与赤芍配合使用还可达到调经止痛、活血化瘀的功效;且赤芍还有良好的抗炎功效，可对炎性反应细胞浸润进行有效抑制，从而可达到促进黏膜上皮细胞功能恢复、细胞分泌活动增强的效果;而丹参则具有促纤溶功效，在促进纤溶蛋白溶解、缓解组织粘连方面可发挥积极作用;当归则可在一定程度上对血小板聚集现象进行改善，并可促进非特异性免疫功能增强;诸药合用可达到清热利湿、活血化瘀、行气止痛的功效[11]。将其应用于慢性盆腔炎性疾病的治疗中可发挥一定的积极作用，对改善患者病情有重要意义。

临床上通常认为，慢性盆腔炎性疾病迁延不愈与盆腔血液循环障碍有较大关联;临床多项研究显示[12]，盆腔炎性疾病后遗症患者多伴有血液凝滞、黏稠状态，而血瘀证则与血液流变学存在较大关联。本次研究结果提示清热祛瘀汤在改善慢性盆腔炎性疾病患者血液流变学方面可发挥积极作用。另外，中医认为，慢性盆腔炎性疾病的发生与湿热有较大关联;而湿热的发生则与慢性炎性反应有较大关联。体内细胞因子异常应答则与慢性炎性反应的发生有较大关联。盆腔炎性疾病患者多可见Th细胞亚群偏离现象，IL-4、IL-10均属于抑炎性细胞因子，两者均有Th2细胞产生;其中IL-4有较强的抗炎活性，可有效的对脂多糖介导的炎性细胞因子进行抑制，并可在一定程度上对TNF-a及前列腺素E2的分泌情况进行抑制，进而可达到抗炎性反应糖皮质激素的功效。而IL-4则可对促炎性反应细胞因子进行抑制，从而可在一定程度上减轻因炎性细胞因子所致的过强免疫反应，进而可达到减轻自身免疫应答的功效。TNF-a则可在炎性反应发生发展中发挥双向调节功效[13-14]。免疫球蛋白IgA、IgG则是体液免疫的主要组成部分，属于具有抗体活性的蛋白质，可会较好的抗病毒、抗菌功效，可在机体抗感染免疫中发挥重要价值。本次研究结果提示清热祛瘀汤可在一定程度上对体液免疫反应进行调节，并可对变态反应形成进行有效抑制，从而可发挥较好的抗感染、抗炎功效，进而可达到减轻患者炎性症状的效果。

综上所述，清热祛瘀汤对慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的免疫分子、血流动力、血清炎性反应因子水平均有较好的调节作用，可在一定程度上减轻盆腔炎性疾病症状，对防治盆腔炎性疾病有重要价值，可在临床上推广应用。

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（2019-07-03收稿 责任编辑：王明）

基金项目：四川省教育厅科研计划项目（17ZB0154）

作者简介：杨成成（1986.03—），女，硕士，主治医师，研究方向：中医药防治妇科痛症，E-mail：3086827810@qq.com

通信作者：杨伊斯（1987.01—），女，本科，主治医师，研究方向：中医药防治妇科疾病，E-mail：150393856@qq.com