血管内皮生长因子与缺血性结肠炎相关性

卢翀 胡益冰 丁进

[摘要] 目的 研究血管內皮生长因子与缺血性结肠炎相关性，探讨VEGF在缺血性结肠炎早期诊断中的应用价值。 方法 选取2018年6月至2020年3月在我院消化内科就诊的缺血性结肠炎患者50例为研究组，选取同期未患病者53例为对照组。比较研究组治疗前后与对照组血液中的VEGF表达水平;血液及结肠组织中的VEGF RNA表达水平;分析研究组治疗前后血液及结肠组织中VEGF RNA表达水平的相关性。 结果 治疗前研究组血液中VEGF水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。治疗前研究组结肠组织及血液中VEGF RNA表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。研究组治疗前后血液及结肠组织中VEGF RNA表达水平的相关性分析结果显示，两者表达水平呈正相关。 结论 VEGF在缺血性结肠炎的早期诊断中具有一定的意义，有助于提高早期诊断率，改善患者预后。

[关键词] 缺血性结肠炎;血管内皮生长因子;生物医学;VEGF RNA

[中图分类号] R574          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2021）09-0026-04

The correlation between vascular endothelial growth factor and ischemic colitis

LU Chong   HU Yibing   DING Jin

Department of Gastroenterology， Affiliated Jinhua Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Jinhua   321000， China

[Abstract] Objective To study the correlation between vascular endothelial growth factor and ischemic colitis， and to explore the application value of VEGF in the early diagnosis of ischemic colitis. Methods Fifty patients with ischemic colitis who were treated in the Department of Gastroenterology of our hospital from June 2018 to March 2020 were selected as the study group， and 53 patients with no disease during the same period were selected as the control group. The expression levels of VEGF in the blood， the expression levels of VEGF RNA in the colon tissue and in the blood of the study group before and after treatment and between the two groups were compared. The correlation between the expression levels of VEGF RNA in the blood and colon tissue of the study group before and after treatment were analyzed. Results Before treatment， the blood VEGF level in the study group was significantly higher than that in the control group， and the difference was statistically significant（P<0.05）; after treatment， the difference between the two groups was not statistically significant（P>0.05）. Before treatment， the expression levels of VEGF RNA in colon tissue and blood in the study group were significantly higher than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）; after treatment， the differences between the two groups were not statistically significant （P>0.05）. Analysis showed that the correlation between the expression levels of VEGF RNA in blood and colon tissues in the study group before and after treatment were positively correlated. Conclusion VEGF has a certain significance in the early diagnosis of ischemic colitis， which helps to increase the early diagnosis rate and improve the prognosis of patients.

[Key words] Ischemic colitis; Vascular endothelial growth factor; Biological medicine; VEGF RNA

缺血性结肠炎（Ischemic colitis，IC）是因肠道动脉供血不足或静脉回流受阻导致的结肠缺血性损伤性疾病，是缺血性结肠炎中最常见的临床类型[1]。IC的临床表现多种多样，早期确诊较困难，误诊率高，术后死亡率高达21%。血液检测在IC快速诊断中有重要意义[2]。在一定的时间内，组织如果没有获得充分的血液，机体为了维护自身的稳定状态，会出现一些适应性反应，现有的文献提出，缺氧诱导因子1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）和血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）等与上述现象相关[3]。细胞处于缺氧状态时，泛素蛋白酶体因不断发生降解而减少，与此同时，HIF-1α的分子浓度则会不断升高。VEGF由HIF-1α复合物产生，其与特异性受体KDR/Flk-1结合，刺激内皮细胞增殖，从而生成血管[4-5]。本研究旨在分析缺血性结肠炎及健康人群血液和结肠组织中VEGF的表达水平，探讨VEGF在IC早期诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年6月至2020年3月在我院消化内科就诊的IC患者50例为研究组，其中男23例，女27例;年龄41～88岁，平均（62.51±6.24）岁;基础疾病史包括动脉硬化、高血压病、高脂血症、糖尿病、便秘、腹部手术史。诊断标准：参考2015年美国胃肠学院发表的《结肠缺血的临床指南》[6]。纳入标准[6-8]：①出现IC的临床症状，如腹痛、腹泻，便血等;②结肠镜提示肠壁缺血表现或术中发现结肠缺血、坏死;③腹部影像学结果提示，伴（或不伴）肠壁增厚、肠腔狭窄、肠管扩张、腹腔积气积液及腹部血管狭窄或闭塞等。排除标准：①感染性结肠炎、假膜性肠炎、炎症性肠病、憩室炎和结肠癌等相关疾病;②资料不完整。选取同期未患病者53例为对照组，其中男25例，女28例;年龄43～84岁，平均（63.27±5.32）岁;入组前均进行结肠镜检查，并且未发现结肠病变。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有研究对象及其家属签署知情同意书。

1.2 方法

收集两组研究对象入院时血液样本1 mL，采用离心机（1000 g，10 min）分离血清，保存至-80℃冰箱内。

收集患者结肠组织匀浆，通过RNA试剂盒（RNeasy Mini Kit，Qiagen，Valencia）提取样本自身RNA[9]。采用ABI prism 7700系统（TaqMan PCR，Applied Biosystems）、Assays-on-Demand引物、探针组Hs00153153m1及TaqMan Assay试剂4339277F进行RT-PCR分析，以GADPH为内参照，测定VEGF的表达水平[10]。严格按照ELISA试剂盒（Human VEGF Immunoassay Quantikine，R&D Systems，Minneapolis，USA）说明书进行操作，获得VEGF浓度标准曲线，从而检测出两组患者血清中VEGF的表达水平[11-12]。

为保证检查结果的准确性，研究组结肠镜检查时取活检标本3处，其中2处位于病变结肠黏膜，1处位于正常结肠黏膜;对照组结肠镜检查时取活检标本3处，其中2处位于降结肠黏膜，1处位于乙状结肠黏膜。将活检标本置于含有100 μL RNA稳定剂的1.5 mL Microfuge管中，置于-80℃冰箱内保存，随后对所有标本进行RT-PCR分析[13]。

研究组保守治疗为主，予全身应用广谱抗生素、禁食等，鼻饲拜阿司匹林肠溶片（Bayer Vital GmbH，批准文号：J20080078，规格：100 mg）100 mg，1次/d，疗程为14 d。所有研究对象均不使用其他活血化瘀中药、降纤酶、抗凝剂或溶栓治疗。研究组治疗7～10 d后临床症状明显缓解，复查结肠镜显示病变结肠黏膜接近正常，同时可见瘢痕，采用上述方法收集研究组治疗后的血清及结肠组织标本进行检测分析。

1.3 统计学方法

应用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验;计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义[14]。

2 结果

2.1 两组血液中VEGF水平比较

治疗前研究组血液中VEGF水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。经过7～10 d积极治疗，研究组患者结肠组织过表达的VEGF基本恢复正常水平。

2.2 两组VEGF RNA表达水平比较

治疗前研究组结肠组织及血液中VEGF RNA表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2～3。经过7～10 d积极治疗，研究組患者结肠组织区域过表达的VEGF RNA基本恢复正常水平。

2.3研究组血液及结肠组织中VEGF RNA表达水平相关性分析

对研究组治疗前后血液及结肠组织中VEGF RNA表达水平进行相关性分析，结果显示，两者表达水平呈正相关。

3讨论

缺血性结肠炎发病急，具有腹痛、便血症状消失快，结肠黏膜病变恢复快的疾病特点[15-16]。目前结肠镜检查是缺血性结肠炎的首选诊断手段和金标准。结肠镜检查所见结合活检病理可与肠结核、炎症型肠病及结肠肿瘤相鉴别[17]。缺血性结肠炎发病急，又缺乏特异的临床表现，虽然结肠镜为缺血性结肠炎诊断的主要方法，但其为有创性检查，且对于可疑坏疽型缺血型肠炎，则禁忌结肠镜检查[18]。探索缺血性结肠炎诊断的简便、快捷的血液标志物协助结肠镜诊断，为今后的发展方向。

本研究结果显示，治疗前研究组血液中VEGF水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后组间比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。经过7～10 d积极治疗，研究组患者结肠组织黏膜损伤基本恢复正常，过表达的VEGF也基本恢复正常水平，提示当组织在一定时间内无法得到充足的血液时，机体为了维护自身的稳定将会生成HIF-1α因子，其不仅能够促使基因进行转录，还能够在一定程度上增加部分蛋白质和酶，或提高它们的活性，如果人体处于缺氧状态时，这种因子还能够有效预防细胞的凋亡[19]。

本研究结果显示，治疗前研究组结肠组织及血液中VEGF RNA表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后组间比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。经过7～10 d积极治疗，研究组患者结肠组织黏膜损伤基本恢复正常，瘢痕区域过表达的VEGF RNA也基本恢复正常水平，提示当组织在一定时间处于缺血状态时，机体为了维护自身的稳定性会诱导VEGF表达，以使组织所遭受的损伤程度不会继续扩大，同时具备一定的修复作用[20-21]，经过一段时间后，组织将会恢复到正常状态，由缺血诱导出现的相关因子也会逐渐降低，直至恢复到正常水平。因此，缺血性结肠炎内部存在一定的缺血性危害。

同时，观察研究结果显示，缺血性结肠炎血液中也可检测到过表达的VEGF因子，并且与结肠组织中VEGF表达情况呈明显正相关，提示外周血中VEGF表达水平可在一定程度上反映出肠道的缺血性危象，为该疾病的早期诊断提供了参考。

综上所述，VEGF的血管生成在缺血性结肠炎中具有关键作用。当组织处于缺血状态时，血管生成因子VEGF的表达水平将会上升，此时旁分泌因子将会得到一定的信号，并和特定的受体进行反应，促使相应的内皮细胞进行增殖。上述结果为缺血性结肠炎的发病机制提供了相应的分子证据，提示缺血性因子会在缺血性结肠炎自身的病理学过程中具有相对关键的作用。本研究证实了VEGF能够在缺血性结肠炎对应的病变位置发生过表达，在临床工作中，为评估结肠组织的缺血情况或展开进一步的修复，可以通过对上述因素的表达水平进行评价，进而做出更为准确的判断。同时，利用血液中VEGF的检测，有助于高龄或有禁忌证等不能实施结肠镜检查的患者的临床诊断，减少误诊概率，对缺血性结肠炎的临床诊断、病情评估及指导治疗等方面均具有重要的价值。

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（收稿日期：2020-08-23）