一种物理振荡制备溶血标本的改进方法

武文平，刘冰，佟瑞

（秦皇岛市中医医院检验科，河北 秦皇岛）

0 引言

溶血是临检工作中最常见的干扰因素，标本溶血后会对血常规、生化、免疫等多项检测指标结果造成干扰[1-3]。溶血对各项目的影响及相应的补救措施一直是检验医学研究热点，选用一种合理有效的制备溶血标本的方法是进行相关研究的基础。物理振荡法是人工制备溶血标本的常用方法，但在实际操作中，制备高浓度的溶血标本需要很长的振荡时间，且溶血浓度不理想。本实验在传统方法基础上进行改进，采取预处理措施，提高溶血效果，以期为临检工作中快速制备溶血标本提供一种参考方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取秦皇岛市中医医院2020年1月14日血常规标本20例（HGB 140.25±11.74 g/L），3000 rpm，5min，血浆无溶血（血浆HGB浓度为0 g/L），然后混匀，每例标本平均分为2份，设实验组和对照组 ；随机选取2020年1月15日促凝血标本20例[血清血红蛋白（hemoglobin，HGB） 139.15±11.17 g/L]，每例留取2份血样，待凝固后，3000 rpm，5min，血清无溶血（血清HGB浓度为0 g/L），设实验组和对照组。随机选取2020年1月16日体检人员20例，抗凝血（HGB 136.40±9.69 g/L）和促凝血（HGB 136.00±8.52 g/L）样本各留取8ml，立即分为7份，每份1ml，离心后血清或血浆均无溶血。

1.2 方法

1.2.1 实验组与对照组溶血效果比较

实验组标本预先3000 rpm，5min离心处理，分离血浆或血清备用，底部血细胞旋涡振荡5min，加入分离好的原血浆或血清混匀，3000 rpm，5min离心，测上层血浆或血清HGB浓度； 对照组标本旋涡振荡仪振荡5min，3000 rpm，5min离心，测上层血浆HGB浓度，采用配对t检验比较两组HGB水平有无差异。

1.2.2 采用上述实验组方法，研究不同时间振荡条件下所制备的溶血HGB浓度

将2020年1月16日收集的20例抗凝血和促凝血标本分各为7份，每份1ml，按实验组方法，分别给予2min、5min、10min、15 min、20 min、25 min、30 min 不同时间振荡，加入分离好的原血浆或血清混匀，3000 rpm，5min离心，测上层血浆或血清HGB浓度。

1.3 统计学处理

采用SPSS17.0软件进行统计学处理，服从正态分布的定量资料以（±s）表示，两组间比较采用配对t检验，两两间比较采用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验组与对照组HGB浓度比较

抗凝血与促凝血的实验组HGB浓度均明显高于对照组；差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 实验组与对照组血浆（血清）HGB浓度比较[（±s），g/L]

表1 实验组与对照组血浆（血清）HGB浓度比较[（±s），g/L]

组别 n 抗凝血HGB 促凝血HGB实验组 20 6.55±0.83 7.40±0.88对照组 20 0.85±0.37 0.95±0.39 t 38.803 48.367 P 0.000 0.000

2.2 不同振荡时间所制备的血红蛋白浓度

采用实验组方法，随着振荡时间的延长，所制备的标本HGB浓度不断增加，组间比较差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 不同振荡时间所制备的血红蛋白浓度（±s）

表2 不同振荡时间所制备的血红蛋白浓度（±s）

注：与2min比较，*P<0.05；与5min比较，# P<0.05；与10min比较，△P<0.05；与15min比较，αP<0.05；与20min比较，βP<0.05；与25min比较，γ P <0.05

振荡时间（min）抗凝血HGB浓度（g/L） 促凝血HGB浓度（g/L）2 0.80±0.41 0.85±0.37 5 6.10±0.91* 7.45±0.89*10 8.40±1.31* # 9.20±1.11*#15 11.70±1.22*#△ 12.65±1.09*#△20 14.55±1.23*#△α 15.15±1.42*#△α 25 17.55±1.43*#△αβ 18.10±1.33*#△αβ 30 19.65±1.27*#△αβγ 20.15±1.39*#△αβγ

3 讨论

物理振荡法制备溶血标本是通过外部力量破坏红细胞膜的稳定性，达到溶血目的[4]。不需要添加外来物质（生理盐水或去离子水），不改变样本原有成分，非常适用于生化免疫类项目的研究。传统方法直接将样本振荡，制备HGB>5g/L溶血标本，即需要30min以上的振荡时间。如果要制备>10g/L溶血标本，意味着更长的振荡时间。采用细针（30号）反复抽吸样本来制备溶血样本，操作过程产生大量泡沫，需要长时间静置才能消除，且只能应用于抗凝血样本[5]。反复冻融法虽然能取得高浓度的溶血标本，但实验过程需要反复洗涤、冻融，耗时长。田耘博等[6]用超声波破坏红细胞，实现了快速溶血，且建立了不同溶血程度的溶血梯度模型。

本研究从血液中液体成分对细胞膜稳定所起保护性作用的角度出发，预先离心分离血浆或血清，去除红细胞保护因素，同时拉近了红细胞之间的空间距离[7]，再对细胞进行振荡破坏，细胞间的撞击频率增加，最终达到了理想的溶血效果。根据实验结果，如果在时间上加以精确控制，可以制备出与临检工作中相符的溶血浓度的样本，省去了用生理盐水或去离子水调节溶血浓度的步骤[8-10]。此外，本实验制备的溶血标本会产生细胞碎片，溶血浓度越高，碎片越多，一部分悬浮在血浆或血清中，可考虑使用高速离心机12000rpm，10min 去除。

改进的物理振荡法可以快速制备溶血标本，所需设备简单，在一般实验室即可开展，为基层医务工作者制备溶血标本，开展溶血对检验项目影响研究提供一种实验方法[11,12]。