复方七芍降压片对自发性高血压大鼠血清炎症反应因子含量和血管组织学的影响

王顺民 黄露 陈橙 杨晓丹 唐路军 姚福胜 陆朵梅 宋雪云

摘要 目的：观察复方七芍降压片在调节血压时对血清炎症介质和血管组织学的影响。方法：采用自发性高血压大鼠（SHR）为实验对象，Wistar-kyoto大鼠（WKY）为实验对照，以灌胃方式给予复方七芍降压片和厄贝沙坦。使用嘌呤受体P2Y6抑制剂MRS2578干预炎症反应信号的传递，检测不同处理下大鼠的血压，炎症介质TNF-α、IL-6、IL-1β的表达，以及血管结构。结果：复方七芍降压片可以显著地降低大鼠血压。结果表明，复方七芍降压片可以显著地降低血清中TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症介质的含量。HE染色结果显示复方七芍降压片显著地促进血管结构恢复正常。结论：复方七芍降压片抑制了炎症介质的表达，促进了血管恢复。复方七芍降压片降低血压的功效可能与抑制炎症反应促进血管恢复有关。

关键词 复方七芍降压片;炎症介质;血管组织学;自发性高血压

Effect of Fufangqishao anti-hypertension tablets on the Content of Inflammatory Factors in Serum and Vascular Histology in Spontaneously Hypertensive Rats

WANG Shunmin1，Huang Lu1，CHEN Cheng2，YANG Xiaodan3，TANG Lujun4，YAO Fusheng3，LU Dumei5，SONG Xueyun1

（1 First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410007，China; 2 Hunan Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410006，China; 3 Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410208，China; 4 Hunan Aerospace Hospital，Changsha 410006，China; 5 Changsha 9th Hospital，Changsha 410018，China）

Abstract Objective：To observe the effect of Fufangqishao anti-hypertension tablets（FHT）on inflammatory factors in serum and vascular Histology.Methods：The spontaneous hypertensive rats（SHR）were used as the experimental model，Wistar Kyoto rats were used as the control.FHT and Irbesartan were given by gavage.Purinoceptor P2Y6 inhibitor MRS2578 was used to interfere with the transmission of inflammatory response signals.The blood pressure，the expression of TNF-α，IL-6，IL-1 β and the vascular histology of rats under different treatments were measured.Results：FHT can significantly reduce the blood pressure of rats under different disposal.ELISA results showed that FHT can significantly reduce the content of TNF-α，IL-6，IL-1 β in serum.HE staining showed that FHT significantly promoted the recovery of vascular structure in rats.Conclusion：FHT inhibited the expression of inflammatory factors and promote the recovery of blood vessels.The effect of FHT may be related to inhibiting inflammatory reaction and promoting vascular recovery.

Keywords Fufangqishao anti-hypertension tablets; Inflammatory Factors; Vascular Histology; Spontaneous Hypertension

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.04.009

高血压是一种全球性慢性疾病，高血压的防治是一项重要的课题[1-2]。中医理论认为，“病位在肝，根源在肾”是高血压的主要病机。复方七芍降压片由三七、白芍等多味活血化瘀、养阴柔肝的中药制备而成，有“补益肝肾，活血化瘀”之功，行“养阴柔肝，化瘀息风”之效。复方七芍降压片在实验研究和临床应用中均能够显著地降低血压[3-4]。

研究发现，高血压与血管重塑密切相关，异常的血流动力学、血管活性物质、细胞外基質和炎症介质等都是导致高血压血管重构的重要因素[5-6]。前期研究显示，复方七芍降压片在降低血压的同时，能够影响血流动力学，血管紧张素II、内皮素和一氧化氮等血管活性物质以及TNF-α、IL-6等炎症介质。炎症介质与原发性高血压关系密切，炎症反应是高血压发生和发展的重要因素[7-8]。本文重点研究复方七芍降压片在炎症介质抑制剂存在的条件下，对炎症介质和血管结构的影响，探讨复方七芍降压片通过抑制炎症反应和血管重塑达到降压效果的可能性，为其治疗自发性高血压提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 以48只8周龄自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertension Rat，SHR）为观察组，体质量为（246.5±18.3）g;以8只8周龄Wistar-kyoto大鼠（WKY）为对照组，体质量为（238.3±19.2）g。所用大鼠均为SPF级雄性，来源于北京维通利华实验动物有限责任公司[动物许可证号：SCXK（京）2012-0001]。饲养条件为室温18～20 ℃，湿度65%～70%，自由进食饮水。本研究经医学实验动物管理委员会批准（伦理审批号：ZYFY20151024）。

1.1.2 实验药物 复方七芍降压片（湖南中医药大学第一附属医院药剂科，批号：201506），厄贝沙坦[赛诺菲（杭州）制药有限公司，批号：5A159]。

1.1.3 试剂与仪器 MRS2578试剂（赛力克，美国，货号：S2855）;大鼠TNF-α酶联免疫试剂盒（欣博盛，货号：ERC102a.96）;大鼠IL-6酶联免疫试剂盒（欣博盛，货号：ERC003.96）;大鼠IL-1β酶联免疫试剂盒（欣博盛，货号：ERC007.96）;苏木精（国药沪试，货号：71020782）;伊红Y（国药沪试，货号：71014544）。智能无创血压计（北京软隆生物技术有限公司，型号：BP-98A）;病理组织包埋机（常州市中威医疗仪器有限公司，型号：BMJ-1n）;倒置显微镜（奥林巴斯，日本，型号：CKX53）;超薄切片机（广州市华俊医疗器械有限公司，型号：LKB-Ⅲ）;生物组织自动脱水机（湖北省孝感市宏业医用仪器有限公司产品，型号：TS-12F）;多功能酶标仪（安图斯，奥地利，型号：biocell2010）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 取8只WKY大鼠作为正常对照组（A：WKY对照组）。将SHR大鼠随机分为6个观察组，每组8只（B：SHR组;C：SHR+MRS2578组;D：SHR+复方七芍降压片组;E：SHR+复方七芍降压片组+MRS2578;F：SHR+厄贝沙坦组;G：SHR+厄贝沙坦组+MRS2578）。

1.2.2 给药方法 适应性喂养1周后，各观察组开始给药。复方七芍降压片和厄贝沙坦每日定点灌胃1次，连续灌胃8周，每周最后1 d测量体质量，根据体质量调整给药量;MRS2578则采用腹腔注射给药，隔日注射1次。复方七芍降压片给药量为16 g/（kg·d），厄贝沙坦给药量为25 mg/（kg·d），MRS2578为药量为3 mg/（kg·d）。

1.2.3 检测指标与方法 1）血压测定：用药期间每周最后1 d，应用智能无创血压计测量各组鼠尾血压。2）酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测：用药期间每周最后1 d，采集各组血液，离心后获得血清，按照ELISA试剂盒说明书操作。3）石蜡切片及HE染色：大鼠断头处死后，分离肾主动脉血管组织。10%甲醛固定，石蜡包埋后制作切片。切片脱蜡至水，使用苏木精和伊红进行染色。

1.3 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，各组间比较采用方差分析（ANOVA），组间两两比较采用最小显著差值法（LSD），以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血压变化测定结果 各组大鼠处理前及处理后的血压如图1所示。WKY对照组（A组）血压在整个实验各时间点均比较平稳，SHR组（B组）血压呈现自发性升高，单处理组（C、D、F组）血压呈现下降趋势，双处理组（E、G组）呈现更明显的下降趋势。将各组间数据进行比较得出：MRS2578可以有效抑制高血压（C组相较于B组、E组相较于D组、G组相较于F组，第4周后P值均<0.05）;復方七芍降压片可以有效抑制高血压（D组相较于B组，第4周后P值均<0.05）;厄贝沙坦可以有效抑制高血压（F组相较于B组，第4周后P值均<0.05）;双处理组比较MRS2578或复方七芍降压片或厄贝沙坦单独处理，对血压的控制效果更为显著（E、G组相较于C组、E组相较于D组、G组相较于F组，第4周后P值均<0.05）。复方七芍降压片组与厄贝沙坦血比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 炎症介质检测结果 在实验的第1、4、8周最后1 d分别采集大鼠的外周血;采用ELISA法分别检测血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量，结果如图2所示。WKY对照组（A组）血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量在实验各个阶段均比较平稳，SHR大鼠模型组（B组）血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量呈现升高趋势，单处理组（C、D、F组）血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量呈现一般下降趋势，双处理组（E、G组）血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量呈现显著下降趋势。将各组间数据进行比较得出：MRS2578可以有效降低血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量（C组相较于B组、E组相较于D组、G组相较于F组，第4、8周P值均<0.05）;复方七芍降压片可以有效降低血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量（D组相较于B组，第4、8周P值均<0.05）;厄贝沙坦可以有效降低血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量（F组相较于B组，第4、8周P值均<0.05）;双处理组比较MRS2578或复方七芍降压片或厄贝沙坦单独处理，对血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量控制效果更为显著（E、G组相较于C组、E组相较于D组、G组相较于F组，第4、8周P值均<0.05）。复方七芍降压片组与厄贝沙坦组比较，血清中炎症介质含量差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 动脉组织学观测结果 分离各组大鼠肾主动脉血管组织，甲醛固定后制作石蜡切片，HE染色后观测，结果如图3所示。WKY大鼠正常组（A组）：动脉内膜光滑、管壁厚度较均匀;可见主动脉膜中VSMC排列均匀而有序;主动脉中层弹性膜厚薄均一，分层清晰且完整;随实验的进程，组织结构无明显变化。SHR大鼠模型组（B组）与正常组（A组）比较：动脉内膜粗糙不平，管壁明显增厚;主动脉膜中VSMC分布不均匀，且数目明显增多;主动脉中层弹性膜厚薄不一，分层不明显，且少数出现断层的现象;随实验的进程，到第4、8周组织结构更加恶化，一些部位出现明显的肿大。单处理组（C、D、F组）与模型组（B组）比较，随着实验的进程，到第4周主动脉组织结构有明显的改观，到第8周主动脉组织结构恢复的更加正常，但与正常组（A组）比较还存在较大的差异。双处理组（E、G组）与单处理组（C、D、F组）比较，主动脉组织结构又有比较明显的改观，到第8周主动脉组织结构基本恢复到正常状态，正常组（A组）比较，差异不明显。复方七芍降压片组与厄贝沙坦血比较差异无统计学意义（P>0.05）。

将HE染色的结果应用计算机图像分析系统，在同一位置测量主动脉血管中膜厚度和管腔直径，以二者比值计算WT值（Wall Thickness），结果如图4所示。WKY大鼠正常组（A组）在整个实验阶段均比较平稳;SHR大鼠模型组（B组）呈现升高趋势;单处理组（C、D、F组）第1周WT值与SHR大鼠模型组（B组）差异无统计学意义，第4、8周呈现下降趋势;双处理组（E、G组）第1周与SHR大鼠模型组（B组）差异无统计学意义（P>0.05），第4、8周后呈现下降趋势，与单处理组比较下降趋势更明显。将各组间数据进行比较得出：MRS2578可以有效降低WT值（C组相较于B组、E组相较于D组、G组相较于F组，第4、8周P值均<0.05）;复方七芍降压片可以有效降低WT值（D组相较于B组，第4、8周P值均<0.05）;厄贝沙坦可以有效降低WT值（F组相较于B组，第4、8周P值均<0.05）;双处理组比较MRS2578或复方七芍降压片或厄贝沙坦单独处理，对血管WT值控制效果更为显著（E、G组相较于C组、E组相较于D组、G组相较于F组，第4、8周P值均<0.05）。复方七芍降压片组与厄贝沙坦血比较差异无统计学意义（P>0.05）。

3 讨论

炎症介质是自发性高血压的重要因素之一。研究发现，TNF-α，IL-6等炎症介质在高血压患者中的表达量较正常人高[9-10]。嘌呤受体P2Y6是传递炎症反应信号的关键蛋白[11-12]，被认为与高血压的调控密切相关[13]。在本研究中，使用MRS2578作为P2Y6的抑制剂[13-14]，抑制炎症反应信号的传递。研究结果显示，所有SHR模型组中IL-6、IL-1β、TNF-α均呈现高水平表达，说明SHR体内促炎-抗炎平衡体系已经打破，血压增高导致的内皮功能障碍可产生大规模、高强度、持续性的炎症反应，进而打破炎症反应稳态平衡。随着时间的推移，SHR模型组（B组）中IL-6、IL-1β、TNF-α均呈现升高趋势。复方七芍降压片降低了血压，下调了IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平，与MRS2578处理组和厄贝沙坦处理组一致。已有研究表明，多种降压药物在降压的同时能够下调炎症介质的表达[15-16]。因此推测抑制这些药物可能是通过抑制炎症反应来发挥降压功能，而复方七芍降压片很可能也是通过抑制炎症反应，达到降压的效果。

研究表明，高血压与血管重塑密切相关[17-18]。WT值为血管壁比血管腔，比值升高则血管内阻力增加，是评判小动脉血管重塑的一个指标。本研究结果显示，复方七芍降压片可以显著改善自发性高血压造成的动脉内膜粗糙不平，管壁增厚;促使主动脉膜中血管平滑肌细胞（VSMC）分布均匀，数目逐渐恢复到正常水平;优化主动脉中层弹性膜，使其逐步恢复成厚薄均一，分层明显;逐步下调血管壁厚度，直至恢复正常水平。血管异常增生使高血压发展过程中的血管切应力增加，炎症介质刺激血管内皮引起细胞损伤，从而导致VSMC的异常增生和迁移，最终使得组织纤维化直至血管结构改变。因此，内皮细胞的炎症反应可能是血管异常增生发生的始动因素。复方七芍降压片从消除炎症反应开始，在抑制血管异常增生中起到很好的疗效，这是其治疗高血压的病理学机制。

动物机体内有促炎系统和抗炎系统，其持续时间及反应程度决定了组织损伤修复的结果，二者保持平衡状态，才能维持机体正常的炎症反应稳态[19-20]。研究发现，短时间和轻度的炎症反应对损伤修复有利，长时间和强烈的炎症反应对损伤修复不利甚至导致坏死，而持续的中等强度的炎症反应则易引起组织纤维化，导致血管结构变化[21]。在高血压状态下，各炎症介质没有处在正常水平，炎症反应反复发生或被过度放大，内皮细胞不断分泌炎症介质，使炎症介质维持在较高水平，机体难以维持炎症反应稳态，最终造成血管组织损伤、血管异常增生甚至血管重塑。本研究中复方七芍降压片对干预炎症反应具有良好的效果，显著降低炎症介质表达水平，维系了机体正常的炎症反应稳态。中医防治高血压讲究“整体条理，辨证施治”，从多环节、多途径、多靶点进行调节，具有疗效持久稳定、不良反应小的特点。因此，把握高血压的中医病理，依理法方药进行机制研究，对高血压的预防、治疗和转归均具有十分重要的临床意义和科学价值。

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（2019-10-30收稿 責任编辑：王明）