育龄男女地贫基因检测与血液学表型的关系

温凯纯 温锦才 杜淑娴 郑博弘

广东省普宁市妇幼保健计划生育服务中心检验科 515300

地中海贫血(地贫)为珠蛋白生成障碍性贫血，主要是因遗传基因缺陷使血红蛋白中一种或多种珠蛋白链合成缺陷而导致的贫血或病理状态，目前尚无根治方法，且中重型地贫治疗预后不佳，因此需在婚前及孕前进行基因筛查，以减少地贫患儿的出生。相关报道指出，不同地贫基因型患者的血液学表型存在差异，但目前尚无报道明确指出患者基因型与血液学表型的关系[1]。故本研究通过对普宁市地贫孕龄夫妇进行基因检测及血液学表型分析，旨在探究育龄男女地贫基因检测与血液学表型的关系，为制定可行的人群干预计划及早期检测方案奠定基础，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月30日—2019年12月31日到我院进行地中海贫血项目检测的育龄男女3 820例；年龄20～38岁，平均年龄(29.16±3.61)岁。纳入标准：经我院伦理委员会审核通过，患者知情且签署同意书。排除标准：重大传染性疾病患者；恶性肿瘤患者；其他血液疾病患者；慢性代谢疾病患者。

1.2 方法 (1)血样采集：由专业人员按照我院血液采集标准进行血液采集，每位患者采集空腹静脉血2ml。(2)血液检测：应用Sysmex XT-2000i 进行血细胞分析，检测红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、血红蛋白A2(HbA2)。取MCV<82fl或者MCH<27pg为地中海贫血初筛阳性标准[2]。(3)应用 Sebia Capillarys2 FP测定HbA2及HbF。如HbA2<2.5%判为疑似α地贫携带者，如HbA2>3.5%，则判为疑似β地贫携带者。将上述筛查结果阳性者进行基因检测以确诊。(4)基因检测：严格按照核酸提取操作说明书提取DNA，并放置于-20℃环境中保存备用，采用潮州凯普公司提供的α-及β-地贫基因诊断试剂盒，PCR反应条件α为：95℃预热15min，热处理98℃40s、64℃70s、72℃150s，共35个循环，β为：94℃预热3min，热处理94℃30s、55℃30s、72℃30s，共40个循环。采用Cap-PCR技术检测α-地贫基因，α-地贫的诊断标准[3]为患者存在SEA/αα基因、-α3.7/αα基因、-α4.2/αα基因缺失或ααQS/αα基因、ααCS/αα基因、ααWS/αα基因突变；采用RDB-PCR技术检测β-地贫基因，β-地贫的诊断标准为患者存在16种常见基因突变。

1.3 观察指标 (1)统计检查结果，分析地贫基因突变类型。(2)血液学表型参数：比较不同地贫基因类型患者MCV、MCH、HbA2分布情况，分析不同血液学表型参数对α型地贫基因的诊断价值。(3)分析α型地贫基因与血液学表性参数变化的关系。

1.4 统计学方法 应用SPSS21.0软件分析数据，计量资料以均数±标准差表示，用t检验；计数资料以百分比(%)表示，用χ2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义；采用多元Logistics回归分析α型地贫基因与血液学表性参数变化的关系；采用ROC曲线分析不同血液学表型参数对α型地贫基因的诊断价值。

2 结果

2.1 基因检查结果分析 α型地中海贫血的构成比高于β型、α/β复合型(P<0.05)，见表1。

表1 基因检查结果分析

2.2 不同地贫基因类型患者血液学表型参数分布情况 α型地贫患者的MCV、MCH高于β型、α/β复合型，HbA2低于β型、α/β复合型(P<0.05)，见表2。

表2 不同地贫基因类型患者血液学表型参数分布情况

2.3 不同血液学表型参数对α型地贫基因的诊断价值分析 MCH、HbA2诊断α型地贫基因的AUC>MCV(P<0.05)，见表3、图1。

表3 不同血液学表型参数对α型地贫基因的诊断价值分析

图1 不同血液学表型参数诊断α型地贫基因的ROC曲线分析

2.4 α型地贫基因与血液学表性参数变化的关系分析 α型地贫基因与血液学表性参数变化无关(P>0.05)，见表4。

表4 α型地贫基因与血液学表性参数变化的关系分析

3 讨论

国内外均有报道指出，α型为地中海贫血的主要基因突变类型[4]。本研究经检验，α型地中海贫血的构成比高于β型、α/β复合型，这表明α型地中海贫血为地贫的主要类型，与上述研究结果相同。β型地中海在地中海贫血的三种类型中危害最大，也是我国南方最常见的常染色体遗传病之一。一旦患儿出现重症β-地贫，只能通过不断输血进行治疗，但输血无法从根本上治愈β-地贫，只能延缓疾病进展，延长患儿生命，而造血干细胞移植为目前唯一一种可以起到治愈效果的治疗手段，但寻求合适配型的难度较大，且造血干细胞移植治疗费用过高，一般家庭难以承受，进而会增加患儿病死率。本研究发现，β型地贫在地中海贫血患者中的占比为28.03%，高于广东省平均水平的21.08%，这表明本市应加强β型地贫的筛查，完善β型地贫突变图谱，并严格对适龄人群进行婚前及产前体检，对携带致病基因的人群进行遗传咨询和婚配指导，以有效减少β型地贫患儿的出生。

α型地中海贫血是一组常染色体不完全显性遗传型慢性溶血疾病，主要是因为α珠蛋白基因缺陷，导致α珠蛋白肽链与β珠蛋白肽链合成速率不平衡，导致幼红细胞利用铁发生障碍，红细胞参数发生变化。本研究发现，α型患者的MCV、MCH高于β型、α/β复合型，HbA2低于β型、α/β复合型，说明α型地贫基因患者的血液学表型不同于β型、α/β复合型，提示或可通过检测患者血液学表型来对地贫基因类型进行判断，为此，笔者进行了进一步研究，结果发现，MCH、HbA2诊断α型地贫基因的AUC>MCV，且均>0.75，说明MCH、HbA2对α型地贫基因具有诊断价值，故可通过检测MCH、HbA2对地贫基因类型进行初步判断。另外，本研究发现，α型地贫基因与血液学表性参数变化无关，与既往研究结果存在差异[5-6]，这可能与不同地贫基因类型患者的人数比例不均有关，故后期需调整各地贫基因型患者人数比例以进一步分析地贫基因与血液学表性参数变化的关系。

综上所述，α型地中海贫血为普宁市地中海贫血的主要类型，且MCH、HbA2对α型地贫基因具有诊断价值，表明可通过MCH、HbA2诊断α型地贫基因。