何首乌黑豆酒炙的炮制工艺研究

李正刚，曲涵婷，李本淳，王路宏，赵 艳﹡

(1.四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000；2.四平市社会精神病院，吉林 四平 136000)

何首乌为蓼科植物PolygonaummultiflorumThunb.何首乌的干燥块根[1]。生品味苦、涩，性甘、微温。归肝、心、肾经。功能主治为：解毒、消痈、戒疟、润肠通便，用于疮痈、瘰疬、风疹瘙痒、久虐体虚、肠燥便秘。经过黑豆和黄酒炮制后，其功能主治发生变化，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂作用。用于血虚萎黄、眩晕耳鸣．须发早白、腰膝酸软、肢体麻木、崩漏带下、久疟体虚、高脂血症[2]。现代研究多集中于《中华人民共和国药典》中的黑豆汁制法研究，而黑豆汁和黄酒共制的研究报道甚少[3-9]。黑豆酒炙的方法首载于我国现存最早的一部骨伤科专著——唐代兰道人所撰的《仙授理伤续断秘方》[10]。明代的《仁术便览》明确记载黑豆酒制何首乌的炮制方法：“何首乌酒浸软，切大片，黑豆一层，何首乌一层，蒸晒各七遍，听用”。[11]现炮制方法收载在《北京市中药饮片炮制规范》2008版[2]和《河南省中药饮片炮制规范》2005版中[12]。其炮制方法为《中华人民共和国药典》2015版四部通则0213中的炖法，但以上标准文献都仅做了一般原则性的规定，未规定其关键炮制工艺参数。本实验采用正交实验设计，以二苯乙烯苷含量、游离蒽醌含量指标，综合评分法优化何首乌黑豆酒炙的炮制工艺，以确定最佳炮制工艺参数，为实际生产奠定理论基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

电子天平BT125D型(北京赛多利斯仪器天平有限公司)；电子天平BS323S型(北京赛多利斯仪器天平有限公司)；Agilent LC1260高效液相色谱仪；色谱柱：安捷伦ZORBAX SB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm。

1.2 材料

药材：何首乌片购自于河北保定中药材市场，经本所副主任药师梁帅鉴定为蓼科植物PolygonaummultiflorumThunb.何首乌的干燥块根加工成的何首乌片，并按照《中华人民共和国药典》2015版一部何首乌饮片项下标准检验合格。

炮制所用辅料为黑豆和黄酒。黑豆执行标准为《中华人民共和国药典》2015年版一部[13]；黄酒执行标准为企业标准。

1.3 对照品

2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号110844-201814)；大黄素(中国食品药品检定研究院，批号110756-201913)；大黄素甲醚(中国食品药品检定研究院，批号110758-201817)。

1.4 试剂

水(自制蒸馏水)，乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，磷酸二氢钾(分析纯)。

2 方法

2.1 黑豆汁制备

取黑豆10 kg，加水适量，煮约4 h，熬汁约15 kg，豆渣再加水煮约3 h，熬汁约10 kg，合并黑豆汁约25 kg。

2.2 炮制工艺研究

2.2.1 预实验考察 平行称取生何首乌片3份，分别加黑豆汁和黄酒拌匀(每100 kg何首乌片，用黑豆汁25 kg、黄酒25 kg)，分别炖制3、6、9 h，自然放凉7 h后，取出，于70 ℃干燥10 h。考察炮制后饮片的性状，具体见表1。

表1 何首乌炮制工艺预实验考察情况

2.2.3 正交实验优化 对何首乌片的炖制时间、放凉时间和干燥温度，这3个工艺参数进行优化，确定最佳炮制工艺。经前期预实验考察结果，炖制时间9 h，性状可以达到质量标准要求，本次正交实验拟考察隔水炖制时间8、12、16 h；同时对放凉时间考察0、4、8 h，烘干温度60 ℃，70 ℃，80 ℃。选用L9(34)正交表进行正交实验设计，因素水平设计见表2。

表2 何首乌炮制工艺因素水平

2.3 考察指标测定

2.3.1 外观性状 参考《北京市中药饮片炮制规范》2008版制何首乌性状标准，并结合样品实际情况，以表面黑褐色或棕褐色，质坚硬，断面角质样，棕褐色或黑色，气微，味微甘而苦涩，为符合要求。经过考察，9个正交实验样品性状均能够满足性状要求。

2.3.2 浸出物含量 照醇溶性浸出物测定法(《中华人民共和国药典》2015年版 四部通则 2201)项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂。结果见表3。

表3 炮制后饮片浸出物含量

2.3.3 二苯乙烯苷含量 参考《北京市中药饮片炮制规范》2008年版制何首乌标准项下二苯乙烯苷含量测定方法，采用高效液相色谱法，紫外检测器。测定结果见表4。

表4 炮制后饮片二苯乙烯苷含量

2.3.4 游离蒽醌含量 参考《中华人民共和国药典》2015年版一部制何首乌标准项下含量游离蒽醌测定方法，采用高效液相色谱法 。测定结果见表5。

表5 炮制后饮片游离蒽醌含量

3 综合评价结果

综合指标的计算在多指标的优化实验中，需对各个指标进行综合考虑和权衡。故设计一个综合指标“隶属度”，将各个指标统一综合考察，以综合指标进行直观分析和方差分析[14]。在计算综合指标之前，需先将各指标进行“隶属度”计算。对于欲达到最大值的指标(如浸出物、二苯乙烯苷、游离蒽醌)其指标隶属度=(指标值-指标最小值)/(指标最大值-指标最小值)。指标最大值的隶属度为1，而最小值隶属度为0，所以0≤指标隶属度≤ 1。如果各指标的重要性一样，就直接将各指标隶属度相加作为综合分数；如不一样就要求计算出加权和作为综合分数。根据检测结果，正交实验9个样品，性状均符合标准要求，浸出物无显著差异，虽然性状和浸出物为饮片重要质量项目，但是对最终差异评价无贡献，故不参加结果评估。以二苯乙烯苷含量和游离蒽醌含量两个指标进行综合评价。两个指标在炮制后的何首乌饮片中的重要性相同，各占50%。于是正交实验每个实验的综合分数=二苯乙烯苷隶属度×50% + 游离蒽醌隶属度×50%，满分为1.00。评分结果以综合分数作为总指标进行直观分析，结果见表6，方差分析见表7。

表6 L9(34)正交实验结果与综合评分情况

表7 正交实验方差分析表

由方差分析结果可知，各考察因数对制何首乌的质量影响大小顺序为A>C>B，炖制时间差异具有统计学意义。放凉时间、干燥温度差异无统计学意义，同时考虑传统炮制工艺和正交实验结果，确定最佳工艺：炖制12 h，自然放凉8 h，于80 ℃干燥。

4 不同产地考察

选用不同产地生何首乌片炮制3批样品，进行验证实验，结果见表8。炮制后饮片质量均符合标准要求，证明工艺稳定，合理可行。

表8 不同产地何首乌炮制验证结果 (%)

5 讨论

何首乌采用不同炮制辅料加工后的饮片名称均为“制何首乌”，难以分辨，给临床应用带来麻烦，因此规范不同炮制方式的何首乌饮片名称非常有必要，建议国家药典委员会针对何首乌饮片能够进行统一规范命名，加以区分。

何首乌黑豆酒炙的炮制方法主要应用在《中国药典》2015版一部收载的中成药平肝舒络丸、养血荣筋丸，以及执行国家卫生部药品标准和注册标准的益肾乌发口服液、妇宝金丸、换骨丸、活络丸、理气定喘丸、益血膏、产灵丹、益肾强身丸等品种中。中成药厂家何首乌(黑豆酒炙)饮片标准大部分执行《北京市中药饮片炮制规范》2008年版，部分厂家执行企业自拟的标准，标准不一致，因此有必要规范统一的炮制标准，为中成药的质量控制奠定基础。

何首乌中有效成分二苯乙烯苷不稳定，在炮制过程中含量会不断下降。结合性蒽醌是何首乌致泻的副作用成分，含量随着炮制时间延长而减少，游离蒽醌开始时增加，结合蒽醌向游离蒽醌转化，12 h后游离蒽醌不再增加，相对稳定。由此可知，炮制时间不到，游离蒽醌达不到要求，而现在仍然有效的《北京市中药饮片炮制规范》2008年版制何首乌并未规定游离蒽醌含量，建议标准增加游离蒽醌含量项目。