葛根总黄酮对高脂血症大鼠代谢指标及肝组织病理形态的影响

马培志 陈金秀

(河南省人民医院药学部，河南 郑州 450003)

高脂血症是目前我国最常见的慢性病之一，不仅增加了动脉粥样硬化的风险，还与冠心病、脑卒中、高血压、2型糖尿病等密切相关〔1〕。老年人体力活动和机体代谢功能下降，高脂血症的发生率更高〔2〕；药物治疗是目前控制血脂最有效的方法，但长期服用他汀类降脂药物会增加患者的肝脏负担，提升横纹肌溶解的发生率，在老年人群中更为显著。探索调节血脂的中药成分，对开发具有良好降脂功效的中成药，提升老年高脂血症患者的病情控制效果具有重要意义。相关研究显示，多数黄酮类化合物具有明显的抗氧化活性〔3〕；本研究旨在探讨葛根总黄酮对高脂血症大鼠脂代谢指标、氧化应激指标及肝组织病理形态的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物 清洁级雄性SD大鼠72只，7周龄，体重170～190 g，购于郑州大学实验动物中心，实验动物许可证号：SCXK(豫)2005-0001。灯光模拟昼夜交替，温度23～25℃，湿度50%～60%，自由饮水和进食。

1.2主要试剂和仪器 葛根总黄酮购于天津市轩宏医药技术有限公司，其中葛根总黄酮总收率为原葛根质量的1.30%，含量以总黄酮计65.95%，以0.1 mmol/L氢氧化钠助溶后加入双蒸馏水配成5 mg/ml溶液。辛伐他汀片购于福安药业集团烟台只楚药业有限公司，以90%乙醇助溶后加入双蒸馏水配成5 mg/ml溶液。血脂生化检测试剂盒购于北京信诺金达生物有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇、谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒均购于上海佳和生物有限公司。Allegra 25R高速冷冻离心机购于美国贝克曼公司；手持式组织匀浆机购于上海弗鲁克科技有限公司；倒置显微镜购于日本奥林巴斯公司。

1.3高脂血症模型制备及分组干预 72只SD大鼠适应性喂养7 d，随机数字法分为正常对照组、模型组、辛伐他汀组、葛根总黄酮低剂量组、葛根总黄酮中剂量组、葛根总黄酮高剂量组，每组12只。正常对照组仅给予普通饲料；另外5组给予高脂饲料：2%胆固醇、20%猪油、5%蛋白粉、5%蔗糖、68%基础饲料，共喂养9 w。辛伐他汀组同时给予辛伐他汀10 mg/(kg·d)干预；葛根总黄酮低、中、高剂量组分别给予100、150、200 mg/(kg·d)葛根总黄酮进行干预；模型组给予等量的生理盐水。均制成10 ml/kg药液灌胃，连续给药9 w。

1.4标本采集与指标检测 分别于实验开始及药物干预3、6、9 w时记录各组大鼠体重。实验开始和药物干预9 w后，禁食不禁水12 h，眼眶静脉取血，2 000 r/min离心15 min，收集血清，检测各血脂指标水平。药物干预后9 w摘取大鼠肝脏，称量肝湿重，肝指数=肝湿重/体重×100%。生理盐水冲洗肝组织，取其中一部分研磨后进行组织匀浆，4℃ 12 000 r/min离心20 min，收集上清液，测定各血脂指标和SOD、丙二醇、谷胱甘肽过氧化物酶水平。

1.5肝组织病理形态观察 取另一部分肝组织，多聚甲醛固定24 h，固定、包埋后4 μm切片，进行苏木素-伊红(HE)染色，倒置显微镜下观察6组大鼠肝组织病理形态改变。

1.6统计学分析 采用SPSS21.0软件进行方差分析和t检验。

2 结 果

2.1各组肝指数和体重比较 模型组大鼠3～9 w体重明显高于正常对照组，9 w后肝指数明显高于正常对照组(P<0.05)，辛伐他汀组、葛根总黄酮各剂量组明显低于模型组(P<0.05);9 w后肝指数明显低于模型组(P<0.05)；葛根总黄酮高剂量组6～9 w体重明显低于辛伐他汀组(P<0.05)。见表1。

表1 各组肝指数和体重水平比较

2.2各组血脂水平比较 第9周后，模型组血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白水平明显高于正常对照组，高密度脂蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)；辛伐他汀组、葛根总黄酮各剂量组血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白水平明显低于模型组，高密度脂蛋白水平明显高于模型组(P<0.05)；葛根总黄酮高剂量组血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白水平明显低于辛伐他汀组，高密度脂蛋白水平明显高于辛伐他汀组(P<0.05)。见表2。

表2 各组血脂水平比较

2.3各组肝组织脂肪水平比较 第9周后，模型组肝组织中三酰甘油、总胆固醇水平明显高于正常对照组(P<0.05)；辛伐他汀组、葛根总黄酮各剂量组明显低于模型组(P<0.05)；葛根总黄酮高剂量组明显低于辛伐他汀组(P<0.05)。见表3。

2.4各组肝组织氧化应激水平比较 第9周后，模型组肝组织中SOD、谷胱甘肽过氧化物酶水平明显低于正常对照组，丙二醇水平明显高于正常对照组(P<0.05)；辛伐他汀组、葛根总黄酮各剂量组肝组织中SOD、谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于模型组，丙二醇水平明显低于模型组(P<0.05)；葛根总黄酮高剂量组肝组织中SOD、谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于辛伐他汀组，丙二醇水平明显低于辛伐他汀组(P<0.05)。见表3。

表3 各组肝组织脂肪、氧化应激水平比较

2.5各组肝组织病理形态比较 正常对照组肝索整齐排列，肝小叶形态正常，细胞大小和结构均正常；模型组肝小叶结构紊乱，肝细胞明显肿胀，可见脂肪细胞浸润；辛伐他汀组和葛根总黄酮不同剂量组肝小叶结构出现不同程度紊乱，存在肝细胞脂肪变性，其中葛根总黄酮高剂量组肝组织病理学改善程度最为明显。见图1。

图1 各组肝组织病理形态特征(HE，×200)

3 讨 论

近年来研究发现，高脂血症能够诱发血管内氧化应激反应，损伤血管内皮细胞的正常生理功能，促进血管平滑肌细胞增殖，同时还能够促进血管内血栓形成，与动脉粥样硬化的发生与发展密切相关〔4〕。评价机体氧化应激水平的多项指标中以SOD、丙二醇、谷胱甘肽过氧化物酶的准确度和特异性较高。SOD是广泛分布于动物、微生物体内的抗氧化金属酶，在维持机体抗氧化与氧化平衡中起到关键作用，其活性的强弱能够反映出机体抗氧化能力的高低〔5〕。细胞膜脂质过氧化过程中能够分解产生丙二醛，其水平高低能够评价机体中脂质过氧化程度〔6〕。谷胱甘肽过氧化物酶主要分布于细胞质中，能够保护细胞结构免受过氧化物的损害，其水平变化可用于评价机体的抗氧化能力〔7〕。本研究结果提示高脂血症大鼠体内存在异常的氧化应激反应，降低氧化应激水平有助于改善脂代谢紊乱。

葛根是我国的传统中药材，是野葛干燥的根，具有生津止渴、解肌退热之功效。葛根总黄酮由葛根素、大豆甙等黄酮类化合物组成，是葛根发挥药效学作用的主要活性成分〔8〕。相关研究显示，多数黄酮类化合物具有明显的抗氧化活性，葛根总黄酮也不例外〔9〕。最新研究显示，葛根总黄酮能够明显缓解重金属中毒大鼠神经细胞的氧化损伤程度〔10〕，提升过氧化损伤心肌细胞的存活率〔11〕，减轻认知功能障碍大鼠海马神经元结构损伤及提升血清氧化应激指标水平〔12〕。因此，可推测葛根总黄酮可能对高脂血症大鼠的脂代谢和氧化应激指标具有一定的改善作用，进而减轻肝组织病理学改变。

本研究结果提示高剂量葛根总黄酮对于高脂血症大鼠在调血脂、抑制氧化应激反应强度方面优势明显。进一步观察大鼠肝组织病理形态改变情况显示，不同剂量的葛根总黄酮均能够改善高脂血症大鼠肝小叶结构紊乱和肝细胞肿胀，缓解高脂血症对肝脏的损伤，具体作用的分子机制仍需深入研究。