CT分级联合血清miR-29c对重症胰腺炎预后评估的研究

郑业锟

【摘要】 目的：探討CT分级联合血清微小RNA-29c（miR-29c）对重症胰腺炎（SAP）预后的评估作用。方法：回顾性分析2015年6月-2019年11月于本院就诊的139例SAP患者的资料。根据患者预后结果分为生存组108例和死亡组31例。收集患者CT影像学资料，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测各组血清miR-29c水平，采用logistic回归分析影响SAP患者死亡的危险因素，采用ROC曲线分析CT分级联合血清miR-29c对SAP不良预后的预测价值。结果：死亡组D级患者所占比例低于生存组，E级患者所占比例高于生存组，差异有统计学意义（P<0.05）。死亡组SAP患者血清miR-29c水平低于生存组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组白细胞、红细胞、血红蛋白、白蛋白、C反应蛋白及血淀粉酶指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;死亡组SAP患者APACHEⅡ评分高于生存组，差异有统计学意义（P<0.05）。logistic回归分析结果显示，APACHEⅡ评分、CT分级、血清miR-29c水平均是影响SAP患者死亡的独立危险因素（P<0.05）。ROC曲线分析结果显示，CT分级预测SAP不良预后的曲线下面积为0.626，灵敏度为61.3%，特异度为63.9%。血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.966，灵敏度为96.8%，特异度为88.9%。CT分级联合血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.972，灵敏度为96.8%，特异度为90.7%。结论：CT分级、血清miR-29c均是影响SAP患者死亡的独立危险因素，应用CT分级联合血清miR-29c共同评估SAP患者的预后具有一定临床指导意义。

【关键词】 重症胰腺炎 微小RNA-29c CT分级 预后

Study on Evaluation of CT Grading Combined with Serum miR-29c in Prognosis of Severe Pancreatitis/ZHENG Yekun. //Medical Innovation of China， 2021， 18（12）： 00-010

[Abstract] Objective： To evaluate the effect of CT grading combined with serum microRNA-29c （miR-29c） in the evaluation of prognosis of severe pancreatitis （SAP）. Method： Data of 139 cases of SAP patients admitted to our hospital from June 2015 to November 2019 were retrospectively analyzed. According to the prognosis， the patients were divided into survival group （108 cases） and death group （31 cases）. CT imaging data were collected， and the level of serum miR-29c in each group was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）. Logistic regression was used to analyze the risk factors affecting the mortality of patients with SAP， and ROC curve was used to analyze the predictive value of CT grading combined with serum miR-29c for poor prognosis of SAP. Result： The proportion of grade D patients in the death group was lower than that in the survival group， and the proportion of grade E patients was higher than that in the survival group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The serum miR-29c level of SAP patients in the death group was lower than that in the survival group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in WBC， RBC， hemoglobin， albumin， C-reactive protein and blood amylase between the two groups （P>0.05）. The APACHEⅡ score of SAP patients in the death group was higher than that in the survival group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Logistic regression analysis showed that APACHEⅡ score， CT grade and serum miR-29c level were all independent risk factors affecting the death of SAP patients （P<0.05）. The results of ROC curve analysis showed that the area under the curve of CT grading to predict the poor prognosis of SAP was 0.626， the sensitivity was 61.3%， and the specificity was 63.9%. The area under the curve of serum miR-29c for predicting poor prognosis in SAP was 0.966， with a sensitivity of 96.8% and a specificity of 88.9%. The area under the curve of CT grading combined with serum miR-29c for predicting poor prognosis in SAP was 0.972， with a sensitivity of 96.8% and a specificity of 90.7%. Conclusion： CT grading and serum miR-29c are both independent risk factors affecting the death of patients with SAP， and the application of CT grading combined with serum miR-29c to evaluate the prognosis of patients with SAP has certain clinical guiding significance.

[Key words] Severe pancreatitis microRNA-29c CT grading Prognosis

First-authors address： The Sixth Peoples Hospital of Huizhou， Huizhou 516200， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.12.002

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis， SAP）是因急性胰腺炎由局部发展累及全身器官及系统而起，伴有脏器功能障碍或出现坏死、脓肿或假性囊肿等局部并发症，或两者兼有，多表现为上腹部明显压痛、肌紧张、腹胀、肠鸣音减弱或消失等，该病病死率高，临床治疗关键是及早发现和诊断，在疾病早期对病情严重程度及预后情况进行评估，对降低SAP患者病死率具有重要意义[1-2]。CT分级评分系统是目前临床上应用最为广泛的诊断SAP最有效的方法，其对预后估计主要是根据胰腺局部的大体病理变化，但须与患者的全身情况的急性生理与慢性健康评分（acute physiology and chronic health evaluation，APACHEⅡ）等评分系统综合分析，较为客观[3-4]。目前，尚未有较高敏感性和特异性的生物学指标用于指导SAP的诊断和预后评估，因此为进一步提高SAP的诊治成功率，急需寻找能有效判断病情、推测预后的生物学指标。研究表明，微小RNA（microRNA或 miRNA）与恶性肿瘤的预后存在相关性，在炎症性疾病中的作用逐渐凸显。miRNA在消化系统疾病中已有较多研究，且与急性胰腺炎的发生、发展密切相关，可以用作预测急性胰腺炎严重程度的参考指标[5-6]。miR-29c是重要的miRNAs，其在多种恶性肿瘤疾病中具有重要作用，是肿瘤发生发展的重要因素，但其在胰腺炎中变化情况的研究鲜有报道。故本研究通过回顾性分析，探讨miR-29c与SAP患者预后的关系，并探讨CT分级联合血清miR-29c对SAP预后评估的临床价值，以期为SAP预后判断提供参考依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2015年6月-2019年11月于本院就诊的139例SAP患者的资料。（1）纳入标准：所有患者均符合SAP亚特兰大分类新标准诊断共识诊断依据[7];48 h内完善腹部CT检查。（2）排除标准：患有胰腺癌及其他胰腺疾病;临床资料不完整。根据患者预后结果分为生存组108例和死亡组31例。本研究经本院道德伦理委员会批准通过，符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

1.2 方法 （1）主要试剂与仪器：SYBR Gren RCR master mix试剂购自天根生化科技有限公司;qPCR Arrays购自广州复能基因有限公司;DEPC购自美國Gibo公司;mir Vana PAPIS Kit试剂盒购自德国Qiagen公司;紫外分光光度计购自上海舜宇恒科仪器有限公司;低温高速离心机购自科大创新股份有限公司;qRT-PCR仪购自美国Bio-Rad公司;酶标仪购自德国Benchmark公司;引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。（2）实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time PCR， qRT-PCR）法检测血清miR-29c水平，所有研究对象均于入院时抽取空腹静脉血5 mL，

3 000 r/min离心30 min后分离上清液，即血清。以RNA试剂盒提取血清样本中总RNA，紫外分光光度法鉴定RNA纯度和完整性，将血清RNA按照反转录试剂盒说明书逆转录合成cDNA，取逆转录产物进行qPCR反应。miR-29c正向引物序列5-GTAGCACCATTTGAAATCAG-3，反向引物序列5-TTGGCACTAGCACATT-3，以U6作为内参基因，正向引物序列5-CTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3，反向引物序列：5-GCTTCGGCAGCACATATAC-3。按照SYBR Gren RCR master mix试剂说明配置反应体系，qRT-PCR反应体系20 μL：miScript SYBR? Green Mix 10 μL，cDNA 4.0 μL，上下游引物（10 μM）各1 μL，ddH2O 4.0 μL。选择qPCR反应程序上机，扩增条件：95 ℃，15 min;94 ℃，15 s;60 ℃，30 s;70 ℃，35 s;共40个循环，每例样本均经3孔重复，反应结束，收集数据进行分析，以2-??CT法计算血清miR-29c表达量。

1.3 判定标准 CT分级标准根据患者CT影像特征分为A、B、C、D、E 5个等级，A级：胰腺及胰周显示正常;B级：胰腺局限性或弥漫性增大，胰内灶性积液、轮廓不规则、密度不均、胰管扩张、胰周无渗出表现;C级：除B级表现外，胰腺增大，炎症累及胰周，胰周脂肪层模糊、水肿或脂肪层消失;D级：除C级表现外，存在1个间隙积液或有蜂窝组织炎;E级：除D级表现外，存在2个或多个间隙积液，或胰内或胰周有气泡出现，脓肿形成。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，影响SAP患者死亡的因素分析采用logistic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 生存组108例，男75例，女33例，平均年龄（51.75±6.24）岁。死亡组31例，男21例，女10例，平均年龄（53.32±7.04）岁。两组性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 生存组与死亡组SAP患者CT评分级比较 死亡组D级患者所占比例低于生存组，E级患者所占比例高于生存组，差异有统计学意义（字2=6.280，P=0.012），见表1。

2.3 生存组与死亡组SAP患者血清miR-29c水平比较 生存组的血清miR-29c水平为（2.41±0.72），死亡组的血清miR-29c水平为（1.04±0.24），死亡组SAP患者血清miR-29c水平低于生存组，差异有统计学意义（t=10.406，P<0.05）。

2.4 生存组与死亡组SAP患者临床资料比较 两组的白细胞、红细胞、血红蛋白、白蛋白、C反应蛋白及血淀粉酶指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;死亡组SAP患者APACHEⅡ评分高于生存组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.5 logistic回归分析影响SAP患者死亡的危险因素 以APACHEⅡ评分、CT分级、血清miR-29c水平为自变量，以SAP患者生存情况为因变量，进行logistic回归分析，结果显示，APACHEⅡ评分、CT分级、血清miR-29c水平均是影响SAP患者死亡的独立危险因素（P<0.05），见表3。

2.6 CT分级联合血清miR-29c对SAP不良预后的预测价值 ROC曲线分析结果显示，CT分级预测SAP不良预后的曲线下面积为0.626[95%CI（0.513，0.738），P=0.033]，灵敏度为61.3%，特异度为63.9%。血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.966[95%CI（0.939，0.993），P=0.000]，灵敏度为96.8%，特异度为88.9%。CT分级联合血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.972[95%CI（0.947，0.997），P=0.000]，灵敏度为96.8%，特异度为90.7%。见图1。

3 讨论

SAP是一种临床常见的自身消化性急重症，既表现为胰腺本身病变，又表现为胰周其他器官病理改变，以及腹膜后、腹膜下等多间隙受累，是一个既有局部又有全身反应的复杂病理生理过程，其发病原因与胆石症、高脂血症及过度饮酒等有关，其中SAP的诱发与胆系疾病高度相关，暴饮暴食是主要的诱因之一。SAP可以引起胰腺坏死及其他器官衰竭等多种并发症，病情凶险，易反复，发展迅速，病死率高，给患者生存生活造成严重威胁，因此早期诊断和精准判断SAP严重程度，可使SAP患者得到及时恰当有效的治疗，从而改善预后[8-10]。

CT能够清楚地显示胰腺及胰周组织病理形态改变，临床可根据CT影像学中胰腺形态变化、胰周渗液等变化评估疾病预后。CT分级可为SAP的诊断提供直观形态学依据，是诊断胰腺坏死的金标准，灵敏度高，可以反映胰腺本身形态变化，胰腺增大及胰腺周边是否有出血、坏死等病变情况，并能显示胰周间隙等远处多间隙扩散范围，准确地对胰腺坏死的存在和范围进行描述，对胰腺实质的病变做出评分，CT分级高者，SAP多间隙扩散范围大，局部并发症的出现概率较高，对SAP治疗及预后的评估具有重要意义[11-12]。本研究结果显示，SAP患者的CT分级集中在D级和E级，死亡组D级患者所占比例低于生存组，E级患者所占比例高于生存组，差异有统计学意义（P<0.05），表明SAP患者病情的严重程度与CT分级具有一定的关联性，可能为评估SAP患者预后提供依据。进一步ROC曲线分析结果显示，CT分级预测SAP不良预后的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.626、61.3%、63.9%，表明CT分级对SAP患者不良预后具有一定预测价值。但是，CT分级侧重于单纯影像学表现情况，对患者临床表现及生化情况不做评价，单独CT分级指标对疾病预后进行判断存在片面性，在疾病早期，可结合临床指标和生物学指标共同评估SAP患者预后，以更好地判断预后并及时有效地指导治疗[13-15]。miRNA是一类内源性非编码小分子RNA，可参与细胞的重要生物学過程，在胚胎发育、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡以及机体生长代谢等过程具有重要调控作用，其异常表达可能与某些疾病有关。另外，miRNA表达具有显著组织特异性和稳定性，可作为某些疾病的生物标志物，近年研究表明，miRNA在胰腺疾病的发生发展过程中占据重要地位，对消化道疾病诊断的灵敏度及准确性较高，具有作为生物标记物的潜能[16-18]。

miR-29c是miR-29家族成员之一，研究表明

miR-29c在多种癌组织中如结肠癌、胃癌、白血病等呈下调表达[19-20]，与肿瘤发生发展和转移具有明显相关性，具有抑制肿瘤细胞增殖、转移、耐药等作用，并可作为判断恶性肿瘤预后的重要指标。本研究结果显示，死亡组SAP患者血清miR-29c水平显著低于生存组，差异有统计学意义（P<0.05），表明血清miR-29c水平可能作为评价SAP患者的重要预后指标。本研究通过比较存活组和死亡组SAP患者的CT分级和血清miR-29c水平，表明CT等级越高、血清miR-29c水平越低，病死率越高，预后越差，本研究logistic回归分析结果显示，APACHEⅡ评分、CT分级、血清miR-29c均是影响SAP患者死亡的独立危险因素。进一步ROC曲线分析结果显示，血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.966、96.8%、88.9%，表明血清miR-29c对SAP患者不良预后具有较高预测价值。CT分级联合血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.972、96.8%、90.7%，表明CT分级联合血清miR-29c对SAP患者不良预后预测价值较高，推测两者联合对预测SAP患者的预后具有重要临床意义。

综上所述，CT分级、血清miR-29c均是影响SAP患者死亡的独立危险因素，应用CT分级联合血清miR-29c对SAP患者不良预后具有较高预测价值。由于本研究的局限性，样本数量较少，后期应扩大样本数量，进一步探究CT分级联合血清miR-29c评估SAP预后的临床价值。

参考文献

[1] Baronia A K，Azim A，Ahmed A，et al.Invasive Candidiasis in Severe Acute Pancreatitis： Experience from a Tertiary Care Teaching Hospital[J].Indian J Crit Care Med，2017，21（1）：40-45.

[2]张宏伟，丁威，张琴，等.早期肠内营养支持治疗对重症急性胰腺炎患者临床效果及手术方式安全性的影响[J].中国综合临床，2018，34（1）：49-53.

[3]宋宇，张鹏，许尚文，等.CT评估脂肪肝对急性胰腺炎严重程度的预测价值[J].中国医师进修杂志，2018，41（8）：701-705.

[4] Haider M，Makary M A，Singh V K，et al.Total pancreatectomy and islet autotransplantation for chronic pancreatitis： spectrum of postoperative CT findings[J].Abdom Imaging，2015，40（7）：2411-2423.

[5]高明，卞尔保，李贺，等.急性胰腺炎患者循环miR-29a水平升高且与疾病严重程度及预后差正相关[J].细胞与分子免疫学杂志，2018，34（10）：71-76.

[6]李斌，黄涛，王飞，等.血清miR-29c和miR-720表达在脑胶质瘤患者检测中的意义[J].中国热带医学，2016，16（8）：818-821.

[7] Banks P A，Bollen T L，Dervenis C，et al.Classification of acute pancreatitis-2012：revision of the Atlanta classification and definitions by international consensus[J].Gut，2013，62（1）：102-111.

[8]陳炳勋，李汉智，王云龙，等.重症急性胰腺炎继发胰腺感染患者的临床特征和影响因素分析[J].中华医院感染学杂志，2019，29（7）：1069-1071.

[9] Ha X，Song Y，Zhao H，et al.Endothelial progenitor cells in peripheral blood may serve as a biological marker to predict severe acute pancreatitis[J].World J Gastroentero，2017，23（14）：2592-2600.

[10] Nishimura Y，Iwamuro M，Ocho K，et al.A Rare Case of Diffuse Large B-cell Lymphoma in a Patient with IgG4-Related Autoimmune Pancreatitis[J].Acta med Okayama，2016，70（4）：279-284.

[11]王健，郁毅刚，林庆斌.改良CT严重指数和CT严重指数对急性胰腺炎严重程度和预后的预测价值[J].中国医师进修杂志，2018，41（1）：21-25.

[12] Izquierdo Y E，Fonseca E V，Luz-?ngela M，et al.Utility of CT classifications to predict unfavorable outcomes in children with acute pancreatitis[J].Pediatr Radiol，2018，48（7）：1-8.

[13]杨颖.浅析急性胰腺炎患者血清CRP的水平与其病情CT分级和肝脏密度的相关性[J].当代医药论丛，2017，15（16）：36-37.

[14]朱丹丹，牛婧博，于健.CT评价系统联合D-二聚体对重症急性胰腺炎早期预后评估的作用[J].大连医科大学学报，2019，41（1）：18-21，27.

[15]孟红兵，曹兴健，范玉萍，等.Balthazar CT评分联合血浆D-二聚体对重症急性胰腺炎患者预后的预测价值[J].检验医学与临床，2019，16（8）：80-83.

[16] He Z，Liao Z，Chen S，et al.Downregulated miR-17， miR-29c， miR-92a and miR-214 may be related to BCL11B overexpression in T cell acute lymphoblastic leukemia[J].Asia Pac J Clin Oncol，2018，14（5）：e259-e265.

[17]孙月玲，关万涛，邓武兴，等.重症急性胰腺炎患者外周血miR-22-3p和miR-324-5p水平及其对重症急性胰腺炎相关性急性肺损伤的诊断价值分析[J].临床和实验医学杂志，2018，17（15）：1599-1603.

[18] Shu X M.Assessment of the expression of mir-29c，mir-200a and mir-145 in endometrial tissue and the downstream molecules in infertile patients with endometriosis[J].J Hainan Med Unive，2017，23（19）：97-100.

[19]赵丽颖，李慧霞，张红梅.急性淋巴细胞白血病患儿血清miR-17、miR-29c的表达及临床意义[J].医学研究杂志，2019，48（4）：111-116.

[20]徐峰，宋静，史肖华.结肠癌细胞增殖和侵袭过程中miR-92a和miR-29c的表达及其意义[J].国际消化病杂志，2018，38（1）：71-74.

（收稿日期：2021-02-18） （本文编辑：姬思雨）