一例鸽毛滴虫病的诊断与治疗

胡巧云，姜利霞,2，何世成，唐小明，林 源，彭 志，王卫国,王昌建※

（1.湖南省动物疫病预防控制中心，湖南长沙410014；2.湖南农业大学，湖南长沙410128）

鸽毛滴虫病又称口腔溃疡症，亦称为“鸽癀”，是一种由毛滴虫引起侵害鸽消化道上段的原虫病。以鸽口腔、咽喉及上消化道形成粗糙黄色干酪样的沉着物为主要特征，导致病鸽口腔不能完全闭合，黄白色分泌物阻塞上消化道和呼吸道，继而消瘦或窒息死亡。乳鸽最易感染发病，感染死亡率高达80%以上。成年鸽感染率较低，可能携带但不表现临床症状。鸽毛滴虫的感染常常与饲养条件相关，饲养密度高环境恶劣可能出现毛滴虫病的爆发，造成养殖户的经济损失[1,2]。

本次案例诊断主要对养殖户送来的5只病鸽，进行了解剖、病理观察、原虫观察、细菌分离，并对干酪样物进行了毛滴虫基因的扩增和测序，现实验室诊断过程如下：

1 发病情况

花垣县一养殖场12万羽种鸽，品种为新白卡、石岐鸽。从2020年7月中旬起，陆续有幼鸽发病，至8月初累计至发病100只。发病日龄均为17～25日龄，病程为7～10日。病鸽表现为呼吸困难、消瘦、脖子肿大、喉管内有黄色干酪样物质（如图1），拉黄绿色稀便。用过强力霉素、氟苯尼考、阿莫西林、恩诺沙星等药物未有效果。一年免疫两次新城疫苗，其余疫苗都未免疫。

2 病理解剖

对送检5只病鸽进行了解剖，取样。病鸽口腔和咽喉有粘液，喉管内和食道黏膜表面附着黄色干酪样物质（如图1），嗉囊黏膜粗糙不平，喉头无明显病变，气管有环状出血现象。肌肉无明显病变，心包腔内有黄色积液，气囊有黄色纤维素性渗出物。肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、腺胃都无明显病变。肌胃内膜呈绿色，内容物呈绿色，剥离内膜内壁无明显病变。肠、胰脏无明显病变，法氏囊水肿，脑无明显病变。

图1 病鸽的典型症状

3 毛滴虫的镜检与基因扩增测序

3.1 毛滴虫镜检观察

将1.5 mL离心管中加入0.5 mL生理盐水，用棉签刮取病鸽口腔和咽部黄色干酪样物质，打开离心管，将样本拭子放入其中，并浸入生理盐水中，密封写好编号记录，打开样本离心管，取拭子样本涂抹于载玻片上，盖上盖玻片，置光学显微镜下放大400倍观察。可见灰白色梨型或椭圆形的虫体，钟摆状不停运动，虫体运动迅速，活性非常强（如图2箭头所示）。

图2 干酪样物质用生理盐水悬浮后观察到的毛滴虫

3.2 毛滴虫E2基因的引物合成与测序

3.2 .1 引物设计

根据毛滴虫（Trichomonas gallinae）的黏附因子（AP65-1） 基因序列(NCBI Genebank登录号:KJ721787.1)，利用Primer 5.0软件设计了1对特异性引物（Pf：5’-CCTTCTCCCATACAAGGTCTTC-3’,Pr：5’-GCGGTCTGTACCCATATCTAAC-3’），预期扩增大小为475bp，引物由北京擎科生物科技有限公司合成，-20℃保存备用。

3.2 .2 干酪样物的核酸提取、PCR扩增及测序分析取鸽干酪样物质0.1g加入EP管中，加生理盐水至200μL，至全自动核酸提取仪提取核酸，再用提取的核酸作为模板，配制反应体系，至PCR仪中反应，反应条件为：95℃预变性10min；95℃ 变性10s，60℃ 退火30s，72℃ 延伸30s，35个循环；95℃延伸10 min。

扩增出与预期大小一致的特异性片段，PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果如图3。凝胶回收后，送北京擎科生物科技有限公司测序。测序结果通过NCBIblast比对，该基因片段与NCBI数据库中17条序列有较高的同源性，均为滴虫属（Trichomonas），主要为阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）的粘附蛋白AP65-2、禽毛滴虫（Trichomonas gallinae）的黏附蛋白AP65-1，同源性为95.83%～97.05%。这表明该样品中存在毛滴虫同源性较高的核酸，为鸽毛滴虫的诊断提供了依据。

图3 毛滴虫ap65-1基因的PCR扩增结果

4 细菌分离结果

用接种环取5只病鸽口腔、咽部的黄色干酪样物质，病鸽心血、肝、肺、肾分别接种于含有5%胎牛血清的TSA培养基和鲜血琼脂平板上，经37℃培养24～48h。

挑取部分相对优势菌落，进一步划线纯化，然后挑取菌落革兰氏染色,再经全自动微生物鉴定仪鉴定。细菌分离结果是，5只鸽子的干酪样物质接种的平皿都长出很多的菌，说明干酪样物质里的含菌量非常高，是细菌丛生的地方。4只鸽子肝脏中都能分离到一种白色粗糙菌落，3只鸽子组织中没有分离到菌，两只鸽子血液中分离到不同的菌落。经染色和鉴定，干酪样物质较优势的菌为大肠杆菌，肝脏分离到的为革兰氏阳性（G+）棒状芽孢杆菌，血液中分离到葡萄球菌。在发病严重的鸽子组织样品中也发现有细菌感染，没有分离到一种优势致病菌。

综合鸽子的发病情况、临床症状、解剖情况以及实验室检测结果，判定此病例是由鸽毛滴虫引起主要症状，并有混合细菌感染引起鸽群的发病和死亡。

5 治疗及饲养管理建议

5.1 及时给药治疗

发现病鸽和带虫鸽应隔离饲养，在饲料中添加抗滴虫药物，0.5%制霉菌素，饮水中添加0.01%甲硝唑，发病严重的鸽子注射甲硝哒唑。用0.05%结晶紫溶液进行全群预防。对已除去干酪样沉积物的咽喉溃疡面，用10%碘甘油或金霉素油膏涂于表面。

5.2 彻底消毒

发病鸽带虫鸽，及时隔离治疗，死亡鸽子进行无害化处理。对于污染的鸽舍，清扫干净，对鸽舍、环境和接触的器具用石灰乳、火碱来苏尔等进行消毒。

5.3 饲养管理

分群饲养防止疫病传播，注意合适的饲养密度。不同年龄段的鸽子分群饲养，新引种的鸽子先隔离观察，保证没有疫病再引入鸽舍。注意鸽舍卫生清洁，防止疫病滋生。鸽群环境不好，免疫力低下加重毛滴虫的发生。定期检查口腔毛滴虫，发现问题及时采取措施，隔离治疗。

经过以上一系列措施执行后，该鸽场鸽群疫病明显好转。