30%二嗪磷微囊悬浮剂高效液相色谱分析

王昌锦，林炳松，苏君一，康占海，陶 婧，刘细平，徐 妍

(1.北京宇悦生物科技有限公司，北京 100085；2.河北农业大学，河北保定 200020)

二嗪磷(diazinon)是一种高效、广谱的有机磷杀虫杀螨剂，对鳞翅目、半翅目等多种害虫均有较好的防治效果，主要登记用于防治水稻、棉花、果树、蔬菜、甘蔗、玉米、烟草、马铃薯等作物的各种刺吸式口器害虫和食叶害虫[1]。二嗪磷的残留分析及颗粒剂含量分析方法已有报道[2-3]，但有关二嗪磷微囊悬浮剂的分析方法，目前尚未见公开报道。本文采用高效液相色谱技术建立了30%二嗪磷微囊悬浮剂的分析方法，以期为该产品质量控制提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪配紫外检测器、自动进样器及Agilent色谱工作站(安捷伦科技有限公司)；岛津UV-1800型紫外可见分光光度计(岛津公司)；GD410DP型超声波清洗器(深圳市光点超声波设备有限公司)。

1.2 试剂

二嗪磷标准品(质量分数98.4%，北京宇悦生物科技有限公司)；甲醇(色谱纯)；水：新蒸二次蒸馏水；30%二嗪磷微囊悬浮剂(北京宇悦生物科技有限公司)。

1.3 液相色谱条件

Agilent 1260型高效液相色谱仪，具有紫外检测器和自动进样器；色谱柱：WondaSil C18-WR(150 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇＋水(体积比80∶20)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：254 nm；进样体积：5 μL。采用外标法定量。在该色谱条件下，二嗪磷的保留时间约为5.8 min。二嗪磷标样及样品的典型液相色谱图见图1、图2。

图1 二嗪磷标样的色谱图

图2 30%二嗪磷微囊悬浮剂的色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标准溶液的配制

准确称取二嗪磷标准品0.05 g (精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，超声溶解，备用。

1.4.2 试样溶液的配制

准确称取30%二嗪磷微囊悬浮剂样品0.17 g (精确至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，超声溶解后，过0.45 μm有机滤膜，备用。

1.4.3 测定

按1.3色谱条件，连续注入数针标样溶液，待相邻2针的相对响应值变化小于1.5%时，依标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样测定。

1.4.4 计算

将测得的2针试样溶液及其前后2针标样溶液中二嗪磷峰面积分别进行平均。试样中二嗪磷的质量分数w(%)按下式计算。

式中：A1为标样溶液中二嗪磷峰面积的平均值，mAU·s；A2为试样溶液中二嗪磷峰面积的平均值，mAU·s；m1为二嗪磷标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中二嗪磷的质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相的选择

分别试用不同比例的甲醇+水、乙腈+水作为流动相对试样进行分离检测，结果发现选用乙腈和水作为流动相出峰时间长且峰型不对称。当选用甲醇和水作为流动相且体积比为80∶20时，峰形对称，分离效果理想，出峰时间适中，故最终选定流动相为甲醇+水，二者的体积比为80∶20。

2.1.2 检测波长的选择

通过紫外可见分光光度计UV-1800在240~400 nm进行紫外扫描，二嗪磷在247 nm处有最大吸收。考虑溶剂、助剂对吸收的影响，最终选定以254 nm为检测波长(图3)。

图3 二嗪磷的紫外扫描图

2.2 特异性的测定

本试验方法采用全波长紫外扫描检测峰纯度分析法来鉴别。二嗪磷最小峰纯度相似度为1.000 000，最小峰纯度阈值为0.999 625，最小峰纯度指数为正值，说明样品色谱峰中不含有杂质。标样液相色谱峰与试样液相色谱峰出峰时间差在1.0%以内，如图1和图2所示。制剂中峰纯度色谱图如图4所示。

2.3 分析方法的线性相关性测定

按1.4.1中方法配制不同质量浓度的标样溶液，在1.3色谱条件下进样，每个质量浓度重复进样2次，求其峰面积平均值。以质量浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。二嗪磷线性方程为y=5 206.7x+1 519.3，相关系数为(R2) 0.999 8。二嗪磷线性关系图见图5。

图4 制剂中二嗪磷峰纯度色谱图

图5 二嗪磷线性关系图

2.4 分析方法的精密度测定

选取有代表性的30%二嗪磷微囊悬浮剂试样，在上述色谱操作条件下平行测定5次，结果见表1。可见，二嗪磷的标准偏差为0.18，变异系数为0.59%。

表1 分析方法的精密度测定结果

2.5 分析方法的准确度测定

采用标准添加法，在已知质量分数的试样中，加入一定量的二嗪磷标准品，按1.3色谱操作条件进行测定，结果见表2。可见，二嗪磷的平均回收率为99.90%，相对标准偏差为0.254 2%。

2.6 非分析物干扰试验

在评价准确度时，通常包含非分析物质的干扰，因有效成分中的任何干扰物均会导致分析方法出现系统误差。分析时应同时测定不带有效成份的空白样品，或证明其无干扰。通过对溶剂(甲醇)、空白样品(不含有效成分的助剂)、原药等按1.3色谱条件进行分析，结果发现甲醇、原药及不含有效成分的助剂对分析均无明显干扰，因此使用该分析方法未受到非分析物干扰而影响测定。

表2 分析方法的准确度测定结果

3 结 论

本文建立了30%二嗪磷微囊悬浮剂中有效成分的质量分析方法，此方法具有较高的准确度和精密度，线性关系良好，具有操作简便、快速、准确的优点，可适用于该产品生产过程的质量检测和控制。