气相色谱-质谱法测定鱼肉中 8 种环境激素的残留量

◎ 李雪银，黄孟丽，张 莹

（南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 210000）

环境激素已成为继臭氧层、地球气候变暖之后的第三大环境问题。环境激素通常包括类似于雌激素的外源化学物质（壬基酚、双酚A、已烯雌酚和17α-乙 炔基雌二醇）和环境中的内源性雌激素（17α-雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇和雌酮）[1-2]。有关环境激素在河流、湖泊、污水处理排放口以及生物体内的监测报道较多，环境激素广泛存在于水环境中，鱼类是水生生态系统中重要的无脊椎动物，环境激素对其危害不容忽视[3-4]。

目前，环境激素的测定方法有液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法等[5-8]。本文将对辛基酚、壬基酚、双酚A、己烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇8 种环境激素进行研究，采用乙酸乙酯提取样品，固相萃取柱进行净化处理，经气相色谱柱分离后，在选择离子监测模式下采用电子轰击离子源，对上述8 种环境激素进行测定，建立了同时提取、同时测定的气相色谱-质谱（GC-MS）定性、定量方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

7890B/5977A 气相色谱-质谱仪（Agilent 公司）、 ME503T 电 子 天 平（Mettler Toledo 公 司）、A10 超纯 水 机（Advantage 公 司）、X-30R 冷 冻 离 心 机（Beckman Allegra 公司）及N-EVAP 45 位水浴氮吹仪（Organomation 公司）。

辛 基 酚（CAS 号：140-66-9，100.0 μg·mL-1）、壬基酚（CAS 号：25154-52-3，100 μg·mL-1）、双酚A（CAS 号：80-05-7，100.0 μg·mL-1）、雌酮（CAS号：53-16-7，100.0 μg·mL-1）、17α-乙炔雌二醇（CAS号：57-63-6，100.0 μg·mL-1）、17β-雌二醇（CAS 号：50-28-2，100.0 μg·mL-1）和雌三醇（CAS 号：50-27-1， 100.0 μg·mL-1），均购自Dr.Ehrenstorfer 公司。己烯雌酚（CAS 号：6898-97-1，纯度96.0%），购自北京曼哈格生物科技有限公司。

环境激素混合标准储备溶液：20.00 μg·mL-1（其中双酚A 为10 μg·mL-1），于4 ℃保存。临用前，用甲醇逐级稀释配成20.00 ng·mL-1（其中双酚A 为 10 ng·mL-1）的混合标准工作溶液。

乙酸乙酯、甲醇、丙酮为色谱纯；碳酸钠、无水硫酸钠为分析纯，在650 ℃马弗炉中灼烧4 h，置于干燥器内备用；试验用水为超纯水；七氟丁酸酐（HFAA）纯度≥98%。

1.2 仪器工作条件

色谱条件：初始柱温120 ℃，保持2 min，以 15 ℃·min-1升至250 ℃，再以5 ℃·min-1升至300 ℃，保持5 min。进样口温度：250 ℃；进样量：1.00 μL； 进样方式：不分流；色谱柱：HP-5MS（30 m×250 μm× 0.25 μm）。

质谱条件：电离方式为电子轰击离子源（EI）；电离能量：70 eV；接口温度：280 ℃；离子源温度：230 ℃；四级杆温度：150 ℃；溶剂延迟：7 min。

选择离子监测（SIM）：辛基酚、壬基酚、双酚A、己烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇衍生物的监测离子见表1。

表1 8 种环境激素衍生物的监测离子表

1.3 试验方法

称取鱼肉样品5 g 于50 mL 离心管，加碳酸钠溶液3 mL，乙酸乙酯20 mL，漩涡混匀，超声提取 10 min，4 000 r·min-1离心10 min，取上清液至100 mL梨形瓶中。残渣用乙酸乙酯10 mL 重复提取一次，合并上清液，于40 ℃旋转蒸发至干，用50%环己烷-乙 酸乙酯溶液5 mL 溶解残留物，备用。

固相萃取柱依次用甲醇5 mL、水5 mL 活化，取备用液过柱，控制流速不超过2 mL·min-1，用50%甲醇水溶液10 mL 淋洗，抽干，用甲醇10 mL 洗脱，控制流速不超过2 mL·min-1。收集洗脱液于10 mL 具塞玻璃离心管中，于40 ℃水浴中氮气吹干。

于上述具塞玻璃离心管中加入七氟丁酸酐30 μL、丙酮70 μL，盖紧盖，漩涡混合30 s，于30 ℃恒温箱中衍生30 min，氮气吹干，精密加入正己烷0.5 mL，旋涡混合10 s，溶解残余物，按仪器工作条件进行测定，总离子流色谱图见图1。

2 结果与分析

2.1 校正曲线与基质效应

用空白基质鱼肉和溶剂甲醇将环境激素混合标准工 作溶液稀释成系列浓度为3.125 ng·mL-1、6.250 ng·mL-1、12.500 ng·mL-1、25.000 ng·mL-1、50.000 ng·mL-1、100.000 ng·mL-1和200.000 ng·mL-1的标准物质工作溶液（其中己烯雌酚浓度为2.984 ng·mL-1、5.969 ng·mL-1、11.940 ng·mL-1、 23.880 ng·mL-1、95.500 ng·mL-1和191.000 ng·mL-1；双酚A 浓 度 为1.562 ng·mL-1、3.125 ng·mL-1、6.250 ng·mL-1、 12.500 ng·mL-1、25.000 ng·mL-1、50.000 ng·mL-1和 100.000 ng·mL-1），同法衍生。上机测试后，以浓度为横坐标，待测物峰面积为纵坐标绘制校正曲线，在规定的浓度范围内，校正曲线相关系数均大于0.99，线性关系良好，线性回归方程及相关系数见表2。

基质效应评价依据：ME（%）=|Slope 基质/Slope溶剂-1|×100（ME 绝对值＞50，强基质效应；20＜ME绝对值＜50，中等基质效应；ME 绝对值＜20，无基质效应）。由表2 可知，8 种环境激素均属于强基质效应，基质标曲响应比溶剂标曲高，基质起增强的效应，故采用基质标定量。

图1 8 种环境激素类化合物的总离子流色谱图

表2 线性回归方程、相关系数、基质效应表

2.2 方法回收率及精密度

在鱼肉空白样品中分别加入不同浓度水平的8 种环境激素混合标准溶液，按试验方法处理后进行测定，每组平行测定6 次，结果见表3。在鱼肉基质中8 种化合物的回收率为71.64%～91.08%，测定值的相对标准偏差为1.04%～3.20%，说明方法精密度良好，符合残留分析的要求。

表3 回收试验结果和精密度表（n=6）

续表3

2.3 样品分析

按试验方法测定了市场上常见的鱼肉如黑鱼、鲫鱼、桂鱼、鲈鱼和鲳鱼等样品，在测定的30 多个样品中，均未检出8 种环境激素。

3 结论

本文采用气相色谱-质谱法测定了鱼肉中8 种环境激素残留量，采用HP-5MS 色谱柱分离，质谱测定中采用电子轰击离子源，选择离子监测模式进行定性及定量分析。方法具有灵敏度高、准确度和精密度好的特点，适合于实际样品的检测。